1、ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經理人首選培訓網站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區口蹄疫監測診斷作業指導書修訂日期修訂單號修訂內容摘要頁次版次修訂審核批準2011/03/30/系統文件新制定4A/0/批準：審核：編制：ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經理人首選培訓網站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區口蹄疫監測診斷作業指導書一、口蹄疫病毒 VP1 結構蛋白抗體檢測酶聯免疫吸附試驗1. 適用范圍用于檢測豬、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI 結構蛋白抗體，與豬、牛、羊口蹄疫病毒非結構蛋白抗體酶聯免疫吸附試驗診斷試劑

2、盒聯合使用，可區分 口蹄疫病毒感染動物及疫苗免疫動物。 檢測豬血清應用豬口蹄疫病毒 VP1 結構 蛋白抗體酶聯免疫吸附試驗診斷試劑盒；檢測牛、羊血清應用牛、羊口蹄疫病 毒 VP1 結構蛋白抗體酶聯免疫吸附試驗診斷試劑盒。2. 檢測試劑口蹄疫病毒 VP1 抗原包被板、樣品稀釋液、酶結合物、陰性對照、VP1陽性對照、酶結合物稀釋液、TMB 底物 A 液、TMB 底物 B 液、終止液(I.OMHZSO。)、濃縮洗滌液、稀釋板、一次性封板膜、微孔定位標簽。3. 檢測步驟3.1 使用前將試劑盒恢復到室溫，避免陽光直射或放置在30C以上的環境中。3.2 取出試劑盒中的樣品稀釋液。A1、B1 兩孔作為陰性對

3、照，Cl、D1 兩 孔作為陽性對照孔，其余孔作檢測孔，每孔一個樣品。3.3 在稀釋板的各孔中加 200 樣品稀釋液。在相應各孔中分別加入 10 此 對照血清或被檢血清樣品。用加樣器重復吹吸數次。稀釋每個樣品時必須使用 不同的吸頭。3.4 取出抗原包被板ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經理人首選培訓網站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區3.5 分別從稀釋板上取稀釋后的對照血清和被檢血清各100 此，加至抗原包被板的相應孔中，加益或封膜后，置37 士 2C下孵育 60 士 5 分鐘。3.6 洗滌工作液配制：按需要量，用去產離子水或雙蒸水將洗滌液作25倍稀釋

4、3.7 用洗滌工作液洗滌抗原包被板，每孔 300 噸，洗滌 6 次，拍干。3.8 酶結合物工作液配制：用酶結合物稀釋液將酶結合物作100 倍稀釋,現配現用。3.9 每孔加入 100 此酶結合物工作液，加蓋或封膜后，置 37i2 C下孵育 30 分鐘。3.10 重復 3.7。3.11TMB 底物工作液配制：將 TMB 底物 B 液和 TMB 底物 A 液等量混合， 現配現用。3.12 每孔加入 100 此底物工作液， 加蓋或封膜后， 置 37i2C下孵育 15 分鐘。3.13 每孔加入 100 此終止液，并輕輕振蕩混勻。3.14 在 15 分鐘內，用酶聯讀數儀測定在 450nln 波長下的 0D

5、 值。結果判定 4.1 豬口蹄疫病毒 vPI 結構蛋白抗體檢測結果判定：4.1.1 陰性對照孔平均 0D 值應續 0.15，每個陽性對照孔 0D 值應妻 0.5 , 且簇2.0。否則，試驗無效。臨界值=0.23x 陽性對照孔平均 0D 值。4.1.2 被檢樣品孔 0D 值臨界值時、判為陰性，即為抗口蹄疫病毒VPI結構蛋白抗體陰性。4.1.3 被檢樣品孔 0D 值臨界值，判為陽性。4.1.4 對判定結果為陽性的樣品，應用 2 個孔進行重復檢測。重復檢測后,ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經理人首選培訓網站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區若至少有一個孔為

6、陽性，則判為口蹄疫病毒 VPI 結構蛋白抗體陽性，若兩孔均 為陰性，則判為口蹄疫病毒 VPI 結構蛋白抗體陰性。4.1.5 當豬口蹄疫病毒 vPI 結構蛋白抗體酶聯免疫吸附試驗診斷試劑盒與豬口蹄疫病毒非結構蛋白抗體酶聯免疫吸附試驗診斷試劑盒聯合使用時，按下 列標準進行最終判定4.2 牛、羊口蹄疫病毒 VPI 結構蛋白抗體檢測結果判定：4.2.1 陰性對照孔平均 0D 值應0.2， 每個陽性對照孔 0D 值應0.5， 且W2.0。否則，試驗無效。臨界值=0.23x 陽性對照孔平均 0D 值。4.2.2 被檢樣品孔 0D 值V臨界值時，判為陰性，即為抗口蹄疫病毒VP1結構蛋白抗體陰性。4.2.3 被檢樣品孔 0D 值臨界值，判為陽性。4.2.4 對判定結果為陽性的樣品，應用 2 個孔進行重復檢測。重復檢測后, 若至少有一個孔為陽性，則判為口蹄疫病毒 VPI 結構蛋白抗體陽性，若兩孔均 為陰性，則判為口蹄疫病毒 V