1、培養(yǎng)基驗證文件驗證文件名稱驗證文件編碼計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案TS-YZ-2522-01制藥有限公司制藥有限公司驗證立項申請表驗證立項題目計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查的驗證立項編號TS-YZ-2522-01驗證形式驗證立項部門質(zhì)量部申請日期年 月曰驗證對象計數(shù)培養(yǎng)基適用性驗證目的 及驗證內(nèi)容需氧菌、霉菌及醉母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用 性檢查。本次驗證的目的是確認胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡 萄糖瓊脂培養(yǎng)基是否適合需氧菌、霉菌及靜母菌數(shù)測定。主管部門 審核意見同意對計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查試驗方案進行驗證。年 月 日對驗證方案 的編制及 實施要求驗證方案編制應(yīng)科學(xué)，合埋，方法應(yīng)切實可行，實施必

2、須按照方 案進行。驗證總負責人批準經(jīng)審核批準對計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查進行驗證。簽字：年 月曰驗證方案的審批起草部門簽名日期化驗室質(zhì)量部批準部門簽名日期質(zhì)量部驗證總負責人12345678驗證方案目錄、概述、驗證目的、驗證范圍、驗證項目小組成員及職責、驗證合格標準、試驗材料、菌液制備、適用性檢查9、驗證記錄10、驗證結(jié)論及綜合評價計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查的驗證方案1 .驗證目的：需氧菌、霉菌及酵母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用性檢查。本次驗證的 目的是確認胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基是否適合需氧菌、霉菌及 酵母菌總數(shù)測定。2 .參照標準：中國藥典2015年版四部1105非無菌產(chǎn)品微生物

3、限度檢查法。3 .驗證項目：胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。4.驗證小組人員及職責：人員組成姓名部門職務(wù)/職稱職責組長質(zhì)量部副部長負責驗證期間各部門的協(xié)調(diào)及整個驗證過程的具體實施。成員化驗室主任負責驗證方案的起草及具體實施，確 保驗證過程能按方案規(guī)定的程序進 行，負責各種驗證資料（檢查結(jié)果） 的整理，負責驗證報告的編寫。化驗室化驗員化驗室化驗員負責驗證方案的審核及批準； 負責出具檢驗報告；審查驗證報告及發(fā)放驗證報告；負責驗證文件的管理化驗室化驗員負責驗證報告的編寫規(guī)范；審查驗證報告及發(fā)放驗證報告。5 .合格標準：被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比

4、值應(yīng) 在0.52范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。6 .試驗材料：6.1. 被驗證產(chǎn)品：胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。6.2.1. YXQ-LS-100G型立式壓力蒸汽滅菌器6.2.2. GHT-00雙人凈化工作臺6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安全柜6.2.4. MJ-250I型霉菌培養(yǎng)箱 （2025C ）6.2.5. LRH-250 生化培養(yǎng)箱（3035 c ）6.2.6. 電熱恒溫干燥箱6.2.7. 波爐6.3.驗證用培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號6.4.驗證用菌株：（第代）驗證菌株1口4 L工培療溫度培療時間（小時）7.菌液制備按6.4規(guī)定程序培養(yǎng)各

5、試驗菌株。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱 桿菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液制成約為50100cfu/ml的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入 35ml含0.05% （ml/ml ）聚山 梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液，將抱子洗脫。然后，采用適宜的方法吸 出抱子懸液至無菌試管內(nèi)，用含 0.05% （ml/ml ）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋 白凍緩沖液制成約為50100cfu/ml的黑曲霉抱子懸液。8 .適用性檢查：8.1. 取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的菌液(50100cfu/ml )各1ml, 每株試驗菌平行制

6、備2個平皿，分別注入2個無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆陳瓊脂 培養(yǎng)基，并作陰性對照，混勻，凝固，置 3035c培養(yǎng)24小時，計數(shù)；取白色念珠菌 的菌液(50100cfu/ml )各1ml,分別注入2個無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊 脂培養(yǎng)基，并作陰性對照，混勻，凝固，置 2025c培養(yǎng)72小時，計數(shù)；取黑曲霉菌 的菌液(50100cfu/ml ) 1ml,注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基， 每株試驗菌平行制備2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置2025c培養(yǎng)168小時，計數(shù)。8.2. 取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的菌液(50100cfu/ml )各1ml, 分別注

7、入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆陳瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置 3035c培養(yǎng)24小時，計數(shù)；取白色念珠菌 的菌液(50100cfu/ml )各1ml,分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂對 照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備 2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置 2025 C 培養(yǎng)72小時，計數(shù)；取黑曲霉菌的菌液(50100cfu/ml )各1ml,分別注入無菌平皿 中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置2025c培養(yǎng)168小時，計數(shù)。9 .驗證記錄10 .驗證結(jié)論及綜合評價日期:評價人:附表

8、1:計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證記錄試驗時間 年 月 日完成時間 年 月 日驗證菌株平皿號驗證培養(yǎng)基組（cfu/ ml）陰性對照（cfu/ ml）對照培養(yǎng)基組（cfu / ml）陰性對照(cfu / ml)菌落平均數(shù)的比值（應(yīng)在0.52范圍內(nèi)）大腸埃希菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值金黃色葡穩(wěn)球菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值枯草芽抱桿菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值白色念珠菌（培養(yǎng)5天開始計數(shù)）1-2-平均值黑曲霉菌1-（培養(yǎng)5天開始計數(shù)）2-平均值結(jié)論復(fù)核人試驗人復(fù)核人試驗人驗證報告的審批起草部門簽名日期化驗室質(zhì)量部批準部門簽名日期質(zhì)量部驗證總負責人驗證報告1 .驗證目的：需氧菌、霉菌及酵母菌

9、計數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用性檢查。本次驗證的 目的是確認胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基是否適合需氧菌、霉菌及 酵母菌總數(shù)測定。2 .參照標準：中國藥典2015年版四部1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法。3 .驗證項目：胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。4.驗證小組人員及職責：人員組成姓名部門職務(wù)/職稱職責組長質(zhì)量部副部長負責驗證期間各部門的協(xié)調(diào)及整個驗證過程的具體實施。成員化驗室主任負責驗證方案的起草及具體實施，確 保驗證過程能按方案規(guī)定的程序進 行，負責各種驗證資料（檢查結(jié)果） 的整理，負責驗證報告的編寫。化驗室化驗員化驗室化驗員負責驗證方案的審核及批

10、準； 負責出具檢驗報告；審查驗證報告及發(fā)放驗證報告；負責驗證文件的管理化驗室化驗員負責驗證報告的編寫規(guī)范；審查驗證報告及發(fā)放驗證報告。5 .合格標準：被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng) 在0.52范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。6 .試驗材料：6.1. 被驗證產(chǎn)品：胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。6.2.1. YXQ-LS-100G型立式壓力蒸汽滅菌器6.2.2. GHT-00雙人凈化工作臺6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安全柜6.2.4. MJ-250I型霉菌培養(yǎng)箱 （2025C ）6.2.5. LRH-250 生化培養(yǎng)

11、箱（3035 c ）6.2.6. 電熱恒溫干燥箱6.2.7. 波爐6.3.驗證用培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號6.4.驗證用菌株：（第代）驗證菌株1口4 L工培療溫度培療時間（小時）7.菌液制備按6.4規(guī)定程序培養(yǎng)各試驗菌株。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱 桿菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液制成約為50100cfu/ml的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入 35ml含0.05% （ml/ml ）聚山 梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液，將抱子洗脫。然后，采用適宜的方法吸 出抱子懸液至無菌試管內(nèi)，用含 0.05% （ml/ml ）聚山梨酯80的pH7.0

12、無菌氯化鈉-蛋 白凍緩沖液制成約為50100cfu/ml的黑曲霉抱子懸液。8 .適用性檢查：8.1. 取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的菌液(50100cfu/ml )各1ml, 每株試驗菌平行制備2個平皿，分別注入2個無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆陳瓊脂 培養(yǎng)基，并作陰性對照，混勻，凝固，置 3035c培養(yǎng)24小時，計數(shù)；取白色念珠菌 的菌液(50100cfu/ml )各1ml,分別注入2個無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊 脂培養(yǎng)基，并作陰性對照，混勻，凝固，置 2025c培養(yǎng)72小時，計數(shù)；取黑曲霉菌 的菌液(50100cfu/ml ) 1ml,注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖

13、瓊脂培養(yǎng)基， 每株試驗菌平行制備2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置2025c培養(yǎng)168小時，計數(shù)。8.2. 取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的菌液(50100cfu/ml )各1ml, 分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆陳瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置 3035c培養(yǎng)24小時，計數(shù)；取白色念珠菌 的菌液(50100cfu/ml )各1ml,分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂對 照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備 2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置 2025 C 培養(yǎng)72小時，計數(shù)；取黑曲霉菌的菌液(50100cfu/ml )各1

14、ml,分別注入無菌平皿 中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，并作陰性對照，混勻，凝固，置2025c培養(yǎng)168小時，計數(shù)。9 .驗證記錄10 .驗證結(jié)論及綜合評價附表1:計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證記錄驗證菌株平皿號驗證培養(yǎng)基組（cfu/ ml）陰性對照（cfu/ ml）對照培養(yǎng)基組（cfu / ml）陰性對照(cfu / ml)菌落平均數(shù)的比值（應(yīng)在0.52范圍內(nèi)）大腸埃希菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值金黃色葡穩(wěn)球菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值枯草芽抱桿菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）1-2-平均值白色念珠菌（培養(yǎng)5天開始計數(shù)）1-2-平均值黑曲霉菌1-試驗時間年 月 日完成時間 年 月 日（培養(yǎng)5天開始計數(shù)）2-平均值結(jié)論復(fù)核人試驗人復(fù)核人試驗人制藥有限公司驗證證書驗證文件名稱計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查的驗證驗證文件編號TS-YZ-2522