1、色 譜 定 量 方 法一、歸一化法由于組分的量與其峰面積成正比,如果樣品中所有組分都能產生信號，得到相應的色譜峰,那么可以用如下歸一化公式計算各組分的含量.（7.34）若樣品中各組分的校正因子相近,可將校正因子消去,直接用峰面積歸一化進行計算。中國藥典用不加校正因子的面積歸一化法測定藥物中各雜質及雜質的總量限度。(7。35） 歸一化法的優點是：簡便、準確、定量結果與進樣量重復性無關（在色譜柱不超載的范圍內）、操作條件略有變化時對結果影響較小。缺點是:必須所有組分在一個分析周期內都流出色譜柱，而且檢測器對它們都產生信號。不適于微量雜質的含量測定.二、外標法用待測組分的純品作對照物質,以對照物質和

2、樣品中待測組分的響應信號相比較進行定量的方法稱為外標法.此法可分為工作曲線法及外標一點法等。工作曲線法是用對照物質配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線,求出斜率、截距。在完全相同的條件下,準確進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據待測組分的信號,從標準曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算,工作曲線法也可以用外標二點法代替。通常截距應為零，若不等于零說明存在系統誤差。工作曲線的截距為零時，可用外標一點法（直接比較法）定量. 外標一點法是用一種濃度的對照品溶液對比測定樣品溶液中i組分的含量。將對照品溶液與樣品溶液在相同條件下多次進樣,測得峰面積的平均值,用下式計算樣品中i組分的量：WA(W）(A

3、)（7.36）式中W與A分別代表在樣品溶液進樣體積中所含i組分的重量及相應的峰面積。(W)及(A)分別代表在對照品溶液進樣體積中含純品i組分的重量及相應峰面積。外標法方法簡便，不需用校正因子,不論樣品中其他組分是否出峰，均可對待測組分定量。但此法的準確性受進樣重復性和實驗條件穩定性的影響。此外，為了降低外標一點法的實驗誤差，應盡量使配制的對照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近。三、內標法選擇樣品中不含有的純物質作為對照物質加入待測樣品溶液中，以待測組分和對照物質的響應信號對比，測定待測組分含量的方法稱為內標法?！皟葮恕钡挠蓙硎且驗闃藴剩▽φ眨┪镔|加入到樣品中，有別于外標法。該對照物質稱為內標物

4、。在一個分析周期內不是所有組分都能流出色譜柱(如有難氣化組分），或檢測器不能對每個組分都產生信號，或只需測定混合物中某幾個組分的含量時，可采用內標法。準確稱量W克樣品，再準確稱量W克內標物，加入至樣品中,混勻，進樣.測量待測組分i的峰面積A及內標物的峰面積A,則i組分在W克樣品中所含的重量W，與內標物的重量W，有下述關系：（7.37)待測組分i在樣品中的百分含量C為：(7.38)對內標物的要求；內標物是原樣品中不含有的組分，否則會使峰重疊而無法準確測量內標物的峰面積；內標物的保留時間應與待測組分相近，但彼此能完全分離（R1.5)；內標物必須是純度合乎要求的純物質。內標法的優點是：在進樣量不超限(色譜柱不超載)的范圍內，定量結果與進樣量的重復性無關.只要被測組分及內標物出峰，且分離度合乎要求，就可定量，與其他組分是否出峰無關.很適用于測定藥物中微量有效成分或雜質的含量。由于雜質(或微量組分)與主要成分含量相差懸殊，無法用歸一化法測定含量,用內標法則很方便。