1、慢性排斥腎肥大細胞形態與超微結構的研究關鍵詞：腎移植慢性排斥肥大細胞形態學超微結構摘要：目的：了解腎移植慢性排斥反應時肥大細胞在排斥腎中的形態、超微結構特點及分布規律，以探討肥大細胞是否在腎移植慢性排斥反應中所起的作用。方法：采用甲苯胺藍、愛爾沙藍特殊染色法及電子顯微鏡技術。結果：發現慢性排斥腎中，有較多的肥大細胞，主要分布于腎皮質區。特殊染色及超微結構的結果顯示，排斥腎中至少存在幼稚與成熟兩種類型的肥大細胞。在移植后3個時間段(4年)，每個高倍視野中，肥大細胞的平均數分別為2.092.84,8.934.25和13.764.53，隨著移植時間的延長，肥大細胞呈增加的趨勢。4年以上組明顯高于1年

2、4年組，(P0.01)；小于1年組的病例中52%未見到肥大細胞。結論：肥大細胞可能參與了腎移植排斥反應，其作用機理尚需進一步研究。中國書資料分類號：R329.24The morphological and ultrastructural studies on mast cells in chronic rejection of kidney allograftLiu Yage, Cao Jianping, Xiang Jun, Wang Shixian, Sun Wunli, Liu Long, Jiang Zhiming(Department of Medical Experiment, G

3、eneral Hospital of Shenyang Military Region, Shenyang 110015) Keywords：kidneytransplantationchronic rejectionmast cellmorphology ultrastructureAbstract：Aim:To clarify the morphological and ultrastructural features and the regularity of distribution of mast cells in the transplanted kidneys of chroni

4、c rejection and to srudy if mast cells play a role in the chronic rejection of kidney transplantation. Methods: Special stainings of toluidine blue, Alcian blue and electron microscopic technique were used in the study. Results: There were more mast cells in the kidneys of chronic rejection and the

5、cells were mainly distributed in the cortex region of the rejected kidneys. Special stainings and ultrastructural study showed that there were at least two types of mast cells, the young and the mature, in the rejected kidneys. In the groups of 4 year was significantly higher than that in the group

6、of 14 year(P 0.01). Mast cells were not seen in 52% of kidneys in the group of 1 year. Conclusion: Mast cells may be involved in the chronic rejection of kidney transplantation and its mechanism remains to be studied.腎臟的同種異體移植已成為挽救晚期腎功衰竭患者生命的重要手段，目前，影響移植腎功能的主要因素仍然是術后的排斥反應。由于新型免疫抑制劑的不斷涌現，急性排斥反應對移植腎已不

7、再構成威脅，但隨著移植時間的推移，慢性排斥反應又成為移植腎功能喪失的重要因素。慢性排斥腎的病理改變特征是：腎小球、血管、腎小管及間質的纖維化。越來越多的研究證明，組織的纖維化與肥大細胞分泌的多種介質及細胞因子有關。為此，我們對切除的慢性排斥腎中肥大細胞的形態、數量及超微結構進行了分析，以探討肥大細胞在腎移植慢性排斥反應中是否起一定的作用。1材料和方法1.1研究對象均為我院泌尿外科1987年1997年期間的住院患者，共57例，其中男36例，女21例，年齡24歲63歲。同種異體腎移植前診斷為慢性腎炎尿毒癥。慢性排斥反應的診斷參照文獻1，定為移植術后1年以上，腎功逐漸喪失，移植后常規應用硫唑嘌呤、強

8、的松或與環孢素A聯合應用。1.2形態學觀察光鏡觀察：標本來自本院病理科保存的石蠟切片，經常規HE染色后，光鏡下觀察。特殊染色基本按文獻2介紹的甲苯胺藍與愛爾沙藍法。染色后，于低倍鏡下選擇特殊染色陽性的細胞相對密集區，計數5個以上高倍視野中的細胞總數，及每個高倍視野中的平均細胞數。結果采用t檢驗分析。超微結構觀察：在保存的電鏡標本(由我院電鏡室提供)中，檢出8例慢性排斥腎。超薄切片標本，經醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙重染色后，以Philips M10型透射電鏡觀察。2結果HE染色顯示，慢性排斥腎的病理改變主要表現為腎內各級動脈管壁顯著增厚，內膜增生，管腔狹窄或閉鎖，腎單位纖維化，間質淋巴細胞及炎性細胞

9、浸潤，腎小管變性，以及腎間質纖維化等。兩種特殊染色陽性細胞的特征為：細胞呈圓形、橢圓形或棱形，核較大，胞漿豐富。甲苯胺藍染色胞漿顆粒呈紫紅色，細胞核為淡蘭色；愛爾沙藍染色陽性的細胞，細胞漿顆粒呈蘭色或紅色，細胞核為淡紅色。兩種方法染色呈陽性的細胞均可確定為肥大細胞。肥大細胞主要分布于腎皮質區(1)。移植后3個時間段的肥大細胞計數見表1，其中移植時間少于1年組的21例中，有11例未見到肥大細胞。1肥大細胞在排斥腎中的分布(40)Fig1Distribution of mast cells in rejected kidney( 40)Mast cells were localized in th

10、e cortex region in cytoplasmic gran-ules. Violet staining denotes toluidine blue. 表1腎移植后不同時間段肥大細胞數量的變化Tab1The changes of mast cell counts in rejected kidneys afterrenal grafting at different survival time(year) YearnMast cell counts/HPF( s) 415 13.76 4.53b P 0.01 a vs b 電子顯微鏡：8例標本中有4例見到肥大細胞。初步分為兩種類型

11、：一種細胞核較大，染色質疏松；另一種細胞核較小，染色質濃聚。細胞胞漿中的顆粒呈多樣性，電子密度減低，有的形成空泡(2A、B)。肥大細胞位于間質內，或與成纖維細胞、腎小球基底膜毗鄰。2肥大細胞的電鏡觀察Fig2Electronic microscope observation of mast cells A: The nucleus of mast cells were lager, chromosomal puff and cytoplasm granules fragment-like or vacule-like( 8900) B: The nucleus of mast cells we

12、re smaller, chromosomal concentration and cytoplasm granules were the same as A( 6610) 3討論本研究對57例腎移植后因腎功衰竭而行腎切除的患者腎標本中肥大細胞的形態進行了觀察，對3個不同時間段肥大細胞的數量進行了分析。結果表明，甲苯胺藍及愛爾沙藍兩種染色方法均能較好地顯示腎組織中的肥大細胞，其染色特征與文獻2的報道相一致。其中用愛爾沙藍染色法，可將肥大細胞胞漿中的顆粒染呈蘭色和紅色兩種型式，提示排斥腎中的肥大細胞存在著幼稚與成熟兩種類型。對肥大細胞計數的結果顯示，隨著移植時間的延長，肥大細胞的數量呈上升趨勢。

13、移植腎存活1年以上的兩個組肥大細胞的數，均高于移植腎存活不到1年組；存活4年以上組的肥大細胞數，明顯高于存活1年4年組(P0.01)，提示肥大細胞可能參與了腎移植的慢性排斥反應過程。超微結構研究表明，排斥腎中肥大細胞的基本特征是：細胞漿顆粒呈多樣性，電子密度減低，有的形成空泡狀。一種細胞核較大，染色質疏松；另一種細胞核較小，且染色質濃聚。前種細胞核的類型按LiQiu-Yn的報道3，考慮為幼稚型。結合形態及超微結構分析，排斥腎中的肥大細胞存在著不同的類型，這些不同類型的細胞與其所處的功能狀態存在著一定的關系。雖然肥大細胞在循環中數量極少，據報道小鼠約為12個/105有核細胞4，且為未成熟型，但其

14、分布甚廣，幾乎遍布全身各處，包括結締組織、粘膜組織及各個臟器?，F已發現，其所合成分泌的各種介質和細胞因子(如組織胺、肝素和腫瘤壞死因子等)與許多疾病的發病機理有關。尤其在纖維性硬化疾病中，已證明肥大細胞及其產物與組織纖維化密切相關5。在肺移植后的排斥反應機理研究中，也證明有肥大細胞的參與6。本研究觀察到，在慢性排斥腎中有較多的肥大細胞，且隨移植后時間的延長呈增加趨勢，提示腎移植慢性排斥反應時，組織纖維化的病理改變可能系肥大細胞及其釋放的介質和細胞因子所致，但此研究只是初步觀察的結果。關于肥大細胞的作用方式及其與它免疫細胞之間的相互關系還需進一步研究。作者簡介：劉亞革，女，53歲，主任醫師。沈陽

15、市沈河區文化路83號，Tel.(024)23844039作者單位：劉亞革，曹建平，姜志明：沈陽軍區總醫院，醫學實驗科；王世賢，孫文利：病理科；向軍；劉龍：泌尿外科，沈陽，110015參考文獻1朱有華，閔志廉.腎移植慢性排斥反應的研究現狀.中華器官移植雜志，1997:18；61632凌啟波著.實用病理特殊染色和組織技術.廣東高等教育出版社，廣州：1989:1421453Li Qiu-yan, Ahmad AR, Macaulay MA, et al. The relationship of mast cells and their secreted products to the volume

16、of fibrosis in posttransplant hearts. Transplantation, 1992; 53:1047 1051 4Middleton E, Reed CE, Ellis EF, et al. Allergy. third edition. St.Louis, The C.V. Mosby Company. 1988: 108 5Schaffer FL, Weg VB. Mast cells eosinophils and fibrosis. Clin Exp Allergy, 1997; 27:64 70 6Buvry A, Garbarg M, Dimtriadon V, et al. Phenotypi