1、氨基甲酸酯TW-PCD2000柱后衍生設備檢測方案書介紹農殘檢測方法主要有液相色譜法、光譜法、氣質聯用等，其中柱后衍生的高效液相法方法簡單、可靠、靈敏度高。泰特儀器衍生系統引進國外先進的溫度控制技術和關鍵的控制元器件，各項性能均能達到國外同類型儀器的指標，完全可以滿足農業部相關標準的要求。且性能價格比遠優于進口產品。柱后衍生原理背景氨基甲酸酯類農藥由于高效、經濟而被廣泛應用于蔬菜水果種植過程，但會對生態環境造成嚴重污染，并引發中毒。2004 年發布的我國農業標準NY/T 761 中，柱分離后在線水解生成的甲胺進行熒光衍生的檢測方法作為蔬菜和水果中氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法被采納。N-氨基甲

2、酸酯類化合物經反相色譜法分離，柱后在堿的條件下水分解生成甲胺。生成的甲胺與一級胺的熒光衍生化試劑O-苯二甲醛（OPA）反應，進行較高靈敏度的熒光檢測。氨基甲酸酯的一般結構是N-甲基取代氨基甲酸酯，有不同的成酯基團。結構分子式如圖圖中的10 種氨基甲酸酯的分離可用 5m C18 柱溫恒定、以水/甲醇梯度洗脫。其出峰順序根據其相對的疏水性。氨基甲酸酯（methiocarb）疏水性最強，最后被洗脫出來。分析過程：氨基甲酸酯首先被NaOH溶液在100水解形成醇、碳酸鹽、和甲胺。第二次反應中甲胺與鄰苯二甲醛（OPA）和親和試劑ThiofluorTM試劑反應形成一種高熒光的衍生物。注意：1-萘酚不需要衍生

3、也有熒光，胺甲萘水解后衍生也生成1-萘酚，但是兩者具有不同的保留時間。這一特點可被用于故障診斷。基本樣品制備下面是對蔬菜和水樣品的制備。更多的細節請參看EPA531.2 對飲用水的檢測，AOAC 對蔬菜的檢測。對蔬菜樣品的檢測用已睛提取氨基甲酸酯，用甲醇重新溶解，用0.45m 濾膜過濾對水樣品的檢測采樣標準EPA 采用標準1 加1.8mL ClorAC 緩沖液到60mL 樣品瓶（井水和河水見注釋）2 如果樣品被氯化，每60ml 樣品加入5mg 硫代硫酸鈉。3 將去氯化的樣品加入到樣品瓶中，密封并混勻。4 10儲存，4下運輸可保存28 天。樣品制備用0.45m 濾膜過濾2mL 樣品進樣量200-

4、400L對標準品和空白：將10mL ChorAC 用色譜純水稀釋至1000mL注釋：井水和河水中含有膠狀鐵離子。如果樣品未過濾便儲存，那么鐵離子只有在反應器遇到NaOH 時才又沉淀出來。所以推薦先用0.45m 濾膜過濾后再用ChlorAC 溶液保存。試劑制備氨基甲酸酯的分析需要兩中衍生試劑：水解試劑（NaOH）和鄰苯二醛注意：首次使用前必須對試劑瓶、管線和泵進行清洗，再用甲醇沖洗，以較少熒光背景。試劑1，水解試劑關掉氣源清洗試劑瓶并用甲醇沖洗，用蘸過甲醇的干凈紙巾擦拭吸取管。水解試劑不需要制備。直接將水解試劑（Cat No CB130）倒入試劑瓶中。蓋上瓶蓋，關閉進氣閥。水解試劑會一直很溫度注

5、意： 不推薦自己配制水解試劑，因為高純度的NaOH 很達到。試劑2：OPA 試劑1 將945mL OPA 稀釋劑（Cat No CB910）倒入試劑瓶，留5mL 第五步使用。2 蓋上瓶蓋，打開進氣閥，開啟氣源。使惰性氣體噴射滿全瓶。持續冒泡10 分鐘3 將100mgOPA（Cat NO O120）溶解于10mL 色譜純甲醇中。4 關閉氣源，打開瓶蓋。將OPA 溶液倒入已經去氧的稀釋液中。5 溶解2g ThiofluorTM（Cat NO 3700-2000）與第一步留下的5mLOPA 稀釋液中并倒入試劑瓶。6 蓋上瓶蓋，打開氣源，使其噴射幾分鐘后關閉進氣閥。輕輕搖動試劑瓶使其完全混勻。注意：不

6、推薦自行配制OPA 稀釋液，因為硅酸鈉包含許多重金屬離子和不溶物質。它們將會沉淀在反應器和流通池中。一年的質保不包括此種污染帶來的損壞。OPA 試劑對氧敏感并會降解。當OPA 試劑瓶中充滿惰性氣體時，OPA 試劑的活性和保持2 周。柱后分析條件屏幕顯示：4位LED實際溫度顯示(紅色) 4位LED設定溫度顯示(綠色氨基甲酸酯分析推薦的柱后衍生條件，相關的HPLC條件參見樣品譜圖與梯度洗脫部分。試劑1：CB130,水解試劑（NaOH）試劑2：鄰苯二醛和ThiofluorTM 于CB190 稀釋液中泵1：流速：0.30ml/min泵2：流速：0.30ml/min反應器1：500L100反應器2：10

7、0L 室溫分析過程在最初條件下讓色譜柱平衡約20 分鐘注射10L 氨基甲酸酯測試混合液（或者一定體積的自制標準品），收集第一張譜圖。樣品譜圖與梯度洗脫以下峰名應用與本節的所有譜圖1 涕滅威亞砜 7 殘殺威2 涕滅威砜 8 卡巴呋喃3 草氨酰 9 胺甲萘4 甲氨叉威 10 1-萘酚5 3-羥基卡巴呋喃 11 氨基甲酸酯6 涕滅威 12 BDMC 內標物氨基甲酸測試混合物，10L 進樣，25cm，C8 柱（0840250）氨基甲酸測試混合物，0.25ppb，10L 進樣，25cm，C8 柱（0840250）0840250 柱（4.0mm ID×250MM）用于甲醇溶解樣品HPLC 流速：

8、0.8ml/min 柱溫37氨基甲酸測試混合物，10L 進樣，15cm，C18 柱（1846150）1846150 柱（4.6mm ID×150MM）用于甲醇溶解樣品HPLC 流速：1ml/min 柱溫42氨基甲酸測試混合物，10L 進樣，25cm，C18 柱（1846250）1846250 柱，（4.6mm ID×250MM）用于甲醇溶解樣品HPLC 流速：1ml/min 柱溫42完成分析之后，執行關閉程序，將氨基甲酸酯分析柱保存于100甲醇中。注意：保存OPA 試劑是應保留惰性氣體，關閉試劑瓶上藍色的試劑閥防止不使用時試劑虹吸。氨基甲酸酯分析的注意事項1.配制試劑過程中

9、要始終配帶手套，OPA 與ThiofluorTM 試劑會引起皮膚刺激。OPA 試劑為對氧敏感，不斷降解。得到最佳的靈敏度需新制溶液。在惰性氣體的保護下，OPA 試劑可以保存兩周。ThiofluorTM 具有強烈的吸濕性，一定要在密封性好的容器中保存。2.不推薦用戶自制OPA 稀釋劑，因為硼酸鈉（任何等級）包含著大量的重金屬離子污染物和不溶物質。這些不純物會沉淀在反應器和流通池中。由此造成的損壞不在保修范圍之中。3.使用色譜級的甲醇和水，防止產生基線漂移、鬼峰和基線噪音。4.推薦使用瓶裝的色譜級純水，特別是在系統剛開啟時。如果使用水凈化系統得到的水，要確保此水凈化系統經過了活性碳清除了有機物，并且活性碳柱芯必須安裝在離子交換柱芯的后面。（許多離子交換樹脂沒有去除對OPA 有影響的污染物而產生不可接受的熒光背景。）5.試劑瓶中的液體必須每隔3 到4 天更換一次以防止細菌的生長。6.測試混合物只能作為氨基甲酸酯的定性測定，不推薦將其作為校正使用。7.所有樣品必須通過0.45m 薄膜過濾。如果存在膠體，則需進一步過濾。8.水性樣品溶解于適合的緩沖溶液，具體細節參見EPA 531.2.9.甲醇溶解樣品，進樣10l。近樣量大降引起峰的變形。10.小體積水樣進樣（<20l），兩種分析柱均可以使用。當進樣體積大于300l，則只能使用25cm 的分析柱，并使樣品停留在泵頭