1、正交設計法優選老鷹茶總皂苷的提取工藝研究陸維麗李俊周維晨程文明湯文建【摘要】目的對從老鷹茶中提取總皂苷的工藝進行優化。方式以齊墩果酸為對照品，香草醛-高氯酸法顯色，用紫外分光光度法在550nm處測定總皂甘含量。采納L9(34)正交設計，以老鷹茶總皂甘含量為考察指標，考察乙醇濃度、提取時刻、乙醇用量、提取次數4個因素對提取的阻礙。結果最正確提取工藝為80%乙醇，12倍量，回流提取3次，1h/次。結論該工藝經實驗重復性好，對進一步的工藝開發有較好的參考價值。【關鍵詞】老鷹茶總皂苷正交實驗紫外分光光度法老鷹茶系樟科木姜子屬毛豺皮樟LitseacoreanaLeve的葉，俗稱“白茶”，散布于云南、貴州

2、、四川、安徽等地。民間飲用說明老鷹茶具有解毒消腫、明目益思、生津止渴、解表防暑等功效，且無毒副作用，為藥食同源植物1，長期飲用有利于健康。老鷹茶中含有黃酮、皂苷、有機酸、香豆素和鞣質等成份，其中皂苷類成份含量豐碩2。研究老鷹茶的化學成份，對研究天然產物化學多樣性，和尋覓新的藥用成份具有重要意義。為了有效開發和利用資源，本文采納正交實驗對老鷹茶總皂苷的提取工藝進行了研究。1儀器與試藥儀器722S分光光度計；8453紫外-可見分光光度計(Agilent);電子天平BP211D(Sartorius);GSY-8電熱恒溫水浴鍋；EK-S5AB電熱真空干燥箱。試藥齊墩果酸標準品，購自中國藥品生物制品檢定

3、所；老鷹茶，2006-05購自安徽省寧國縣茶農，陰干備用，經植物學鑒定為樟科木姜子屬毛豺皮樟LitseacoreanaLeve的葉。試劑均為分析純，水為雙蒸餾水。2方式與結果標準曲線的制作3周密稱取經120干燥至恒重的齊墩果酸標準品mg,置于25ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，即得對照品溶液(每毫升含齊墩果酸標準品mg)。周密量取對照品溶液，ml于10ml試管中，抽干甲醇，加ml5%香草醛，ml高氯酸，搖勻于60c水浴中加熱15min,冷卻，加冰醋酸5ml,搖勻。以相應試劑做空白，在8453紫外-可見分光光度計上進行全波長掃描，最大吸收波長為(入maR550nm。按分光光度法在550nm波優勢測

4、定吸光度。(Y)為縱坐標，對照品濃度(X)為橫坐標畫圖，得回歸線性方程Y=4,r=9,線性范圍：73mgL-1提取溶劑的選擇水提取法周密稱取老鷹茶5g，加水50ml，在水浴上加熱回流提取1h，趁熱過濾，共提取2次，洗滌殘渣，歸并濾液和洗滌液，蒸干溶劑。固體水溶后，正丁醇萃取，萃取液過氧化鋁柱，搜集流出液，定容至200ml容量瓶中，搖勻，待用。乙醇提取法周密稱取老鷹茶5g，加80%乙醇50ml，在水浴上加熱回流提取1h，趁熱過濾，共提取2次，洗滌殘渣，歸并濾液和洗滌液，蒸干溶劑。固體水溶后，正丁醇萃取，萃取液過氧化鋁柱，搜集流出液，定容至200ml容量瓶中，搖勻，待用。樣品中總皂苷的含量測定周密

5、量取供試品溶液ml，按標準曲線方式進行操作，測定吸光度值，由回歸方程計算樣品中總皂苷的含量。結果見表1。表1提取溶劑與含量的關系（略）正交實驗設計與結果依照藥材性質和生產實際要求，擬定阻礙浸出成效的4個要緊因素，即A為乙醇濃度（）,B為乙醇用量（倍體積），C為提取時刻（h/次），D為提取次數，每一個因素選擇3個水平，編制因素水平表見表2。表2因素水平（略）稱取適量老鷹茶干燥粗粉9份，按正交實驗設計的工藝進行提取，以老鷹茶提取物中總皂苷含量為考核指標，對正交實驗結果進行方差分析見表34。表3正交實驗（L934）直觀分析（略）表4方差分析（略）依照分析結果可知，各個因素對老鷹茶總皂苷提取成效的阻礙

6、程度依次為A（乙醇濃度）>D（提取次數）>C（提取時刻）>B（乙醇用量），且對提取成效阻礙有統計學意義的因素是因素A（乙醇濃度）。綜合直觀分析和方差分析的結果，老鷹茶總皂苷理想的提取工藝方案是A3B3C1D3即用12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。提取工藝的驗證明驗為進一步考察上述最正確工藝的穩固性和合理性，按該工藝條件進行重復性實驗3次，別離測定老鷹茶總皂苷的含量。結果見表5。測定的結果均等于或優于正交實驗表中的任何一組，重復性好，RSD=%(n=3)。說明該工藝穩固可行。表5最正確工藝的驗證明驗(略)3討論香草醛-高氯酸法顯色體系最大吸收波長在550nm處，該顯色體系呈色穩固，但由于老鷹茶粗提物中有色物質的干擾，粗提物須通過氧化鋁脫色。樣品脫色后顯色在近550nm處有最大吸收，因此該顯色體系可用于老鷹茶總皂苷含量測定。由正交實驗的直觀分析和方差分析結果可知，從總皂苷這一指標來看，因素A(乙醇濃度)的阻礙最大，不同性最為顯著；老鷹茶總皂苷的最正確提取工藝為12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。本實驗優選出的工藝簡單，操作容易，穩固性好。【參考文獻】1李延松.老鷹茶資源調查與開發利用J.貴州茶葉,1995,4