1、果蠅唾液腺染色體的觀察一、 實驗目的1)練習剖取果蠅三齡幼蟲唾液腺的方法。2)掌握制作果蠅唾液腺染色體標本的技術3)觀察果蠅唾液腺染色體的形態特征。 二、實驗原理1） 果蠅三齡幼蟲的唾液腺細胞處于永久早期，染色體解旋呈伸展狀態在幼蟲發育過程中細胞核中的DNA多次復制，但細胞、細胞核不分裂。復制后的染色單體DNA不分開，這種現象叫做核內有絲分裂，從而形成了多線染色體。加之唾液腺細胞中同源染色體互相靠攏在一起呈現一種聯會狀態，而使其比一般體細胞中的染色體粗10002000倍，長100200倍。2） 唾腺位于幼蟲體前1/3-1/4處，所以左手持解剖針按壓住蟲體前端三分之一的部位，固定幼蟲，右手持解剖

2、針扎住幼蟲頭部口器部位，適當用力向右拉唾腺腺體隨之而出。如圖。3）由于在唾液腺細胞中8條染色體之間以著絲粒互相連結在一起形成染色盤或異染中心和同源染色體之間的假聯會，經堿性染料染色后，可以觀察到一個染色較深的染色盤和以染色盤為中心向外輻射出的5條染色體臂。在這些染色體臂上可以看到染色深淺不同，被稱做明帶、暗帶的橫紋，這些橫紋的位置，寬窄、數目都具有物種的特異性。不同物種，不同染色體的不同部位形態位置是固定的。因此根據染色體各條臂帶紋特征和各條臂端部帶紋特征能準確識別各條染色體。在染色體臂上還可看到某些帶紋通過染色體的解旋、膨大形成的疏松區和巴爾比尼氏環，其富含轉錄出來的RNA，因此不著色，是基

3、因活動的區域。在個體發育的不同階段，疏松區或巴爾比尼氏環在染色體上出現的部位不同，據此研究基因的表達，開展各種染色體變異的研究等等。三、 器具和生物實驗生物：果蠅的三齡幼蟲；器具：雙筒解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針，載玻片、蓋玻片實驗試劑： 醋酸洋紅染液、蒸餾水、lNHCI。四、 實驗步驟1） 準備發育充足、肥大的三齡幼蟲（選擇在低溫下（16°C-18°C培養下，充分發育但尚未化蛹但活動十分活躍的幼蟲）；2） 剝離唾腺：在一干凈的載玻片上滴一滴蒸餾水，選擇行動遲緩、肥大、爬在瓶壁上即將化蛹的三齡幼蟲，置于載玻片上。每只手各持一個解剖針在解剖鏡下進行操作。由于果蠅的唾腺位于幼蟲

4、體前1/3-1/4處，所以左手持解剖針按壓住蟲體前端三分之一的部位，固定幼蟲，右手持解剖針扎住幼蟲頭部口器部位，適當用力向右拉唾腺腺體隨之而出；3） 解離：在唾腺組織上滴一滴1NHCl，解離1-2min ，以松軟組織；4） 吸去HCl，用水沖洗2-3次，滴加醋酸洋紅染液染色10min，染色時間不可過長，否則背景也著色。之后蓋上干凈的蓋片，并覆一層濾紙。將片子放在實驗臺上，用大拇指用力壓住。（注意不要使蓋片移動）；5） 鏡檢：先用低倍鏡進行觀察，找到分散好的染色體再轉用高倍鏡進行觀察；6） 整理實驗器材，處理廢物； 五：實驗現象 多線染色體六：實驗問題1：在實驗過程中要注意什么？。答：1)取果蠅

5、幼蟲時一定要取粗大的；2）一定要加蒸餾水，否則唾液腺容易干，影響其正常形態，進而影響觀察。但水不可加太多，否則幼蟲會漂浮而且活躍。如水多了，請再剝離唾腺前吸走些，唾腺剝離后請勿吸水，以防將唾腺一起吸走。3)清除脂肪組織時要量力而行；在實驗中，我發現如果嚴格按照實驗步驟所寫剝離唾液腺，撕裂后唾液腺將與脂肪分離，得到較干凈的唾液腺，很少脂肪干擾。4）盡可能的保留完整的唾液腺5)染色液勿過多，否則壓片時唾腺易隨染色液漂走。如染色時間到后，染色液已干，應再少加些染色液，再蓋上蓋波片，避免氣泡產生。6)染色時間不要太長，否則背景會著色，影響觀察效果。7)用吸水紙吸取液體時，一定要注意不要將唾液腺吸走。2：本次實驗為什么沒有成功？ 答：1）沒有找到足夠大的