1、試驗一 儀器的生疏、清點、洗滌、干燥和使用一、試驗目的1牢記和遵守化學試驗室規章、要求和平安守則。2認領、生疏試驗常用儀器。3把握常用玻璃儀器的洗滌和干燥方法。4. 把握容量瓶和移液管等儀器的正確使用方法及溶液的配制方法。二、試驗步驟1認領儀器按同學“試驗儀器配備清單”逐一生疏并檢查、清點所領儀器，要求生疏其名稱、規格、主要用途和使用留意事項。2儀器的洗滌和干燥（1）將一些常規儀器（試管、燒杯、錐形瓶、量筒等）先用自來水刷洗，然后用洗衣粉（去污粉）或肥皂液刷洗潔凈。用去污粉或洗衣粉刷洗儀器時，應先用水將儀器內外浸濕后倒出水，再蘸取少量去污粉或洗衣粉直接刷洗，再用水沖洗。其效果比用相應的水溶液刷

2、洗要好得多，簡潔達到清潔透亮，不掛水珠的要求。（2）將洗凈的試管、燒杯、錐形瓶等在氣流烘干器上烘干。3儀器的正確使用及溶液的配制（1）用水反復練習估量液體體積的方法直到嫻熟把握為止。取1 mL自來水，用小滴管滴入試管中，記錄滴數并計算一滴大約是多少毫升，登記1 mL在試管的大約位置。 （2）用量筒從試劑瓶中取出5、10、20 mL溶液至50 mL燒杯中。反復練習，直至嫻熟。（3）粗配0.02mol·L-1 NaCl溶液 計算粗配500mL 0.02mol·L-1 NaCl溶液所需NaCl固體的質量，粗稱所需質量的NaCl固體于250mL燒杯中，加入100mL水，用玻璃棒攪拌

3、使其溶解，將其轉入500mL試劑瓶中，再加入400mL水，搖勻即可。（4）將（2）配制溶液精確稀釋10倍 使用移液管移取25mL（2）配制的溶液于250mL容量瓶中，加水稀釋搖勻即可。反復練習，直至嫻熟把握容量瓶、移液管的使用。三、思考題1常用玻璃儀器可接受哪些方法洗滌？選擇洗滌方法的原則是什么？怎樣推斷玻璃儀器是否已洗滌潔凈？2有哪些方法用于常用玻璃儀器的干燥？烤干試管時為什么要始終保持管口略向下傾斜？帶有刻度的計量儀器為什么不能用加熱的方法干燥？3取用固體和液體時，要留意什么？ 試驗二 分析天平稱量練習一、試驗目的1學習分析天平的基本操作和常用稱量方法，為以后的分析試驗打好基礎。2經過稱量

4、練習后，要求達到：固定質量稱量法稱一個試樣的時間在8 min內；遞減稱量法稱一個試樣的時間在12 min內，傾樣次數不超過3次，連續稱兩個試樣的時間不超過15 min。3培育精確、整齊、簡明地記錄試驗原始數據的習慣，不行涂改數據，不行將測量數據記錄在試驗記錄本以外的任何地方，留意有效數字。二、試驗原理參見“試驗基本操作學問”部分。三、試劑與儀器1電子天平，臺秤，表面皿(1個)，稱量瓶(1個)，燒杯（2個，50 mL），牛角匙。2Na2SO4（粉末）。四、試驗步驟1遞減稱量法（差減法）稱取0.30.4 g Na2SO4試樣兩份。（1）取兩個潔凈、干燥的小燒杯，分別在分析天平上稱準至0.1 mg。

5、記錄為m0和m0。（2）取一個潔凈、干燥的稱量瓶，先在臺秤上粗稱其大致質量然后加入約1.2 g試樣。在分析天平上精確稱量其質量，記錄為m1；估量一下樣品的體積，轉移0.30.4 g試樣（約占試樣總體積的1/3）至第一個已知質量的空的小燒杯中，稱量并記錄稱量瓶和剩余試樣的質量m2。以同樣方法再轉移0.30.4 g試樣至其次個小燒杯中，再次稱量稱量瓶的剩余量m3。（3）分別精確稱量兩個已有試樣的小燒杯，記錄其質量為m1 和m2。（4）參照表1的格式認真記錄試驗數據并計算試驗結果。（5）若稱量結果未達到要求，應查找緣由，再作稱量練習，并進行計時，檢驗自己稱量操作正確、嫻熟的程度。表1 稱量練習記錄格

6、式稱量編號m稱瓶試樣/gm稱出試樣/gm1 m2 ms1 m2 m3 ms2 m空燒杯/g m燒杯試樣/gm燒杯中試樣/gm0 m1ms1m0m2ms2偏差/mg2固定質量稱量法稱取0.5000g Na2SO4試樣兩份。稱量方法如下：（1）將一潔凈干燥的表面皿放到天平秤盤上；（2）待天平示數穩定后，按清零去皮重鍵，至天平示數為0.0000g；（3）用藥匙緩慢將藥品放到表面皿上，直至天平示數與需要質量全都為止；（4）準時記錄數據。（5）另取一表面皿再重復上述操作。五、思考題1用分析天平稱量的方法有哪幾種？固定質量稱量法和遞減稱量法各有何優缺點？在什么狀況下選用這兩種方法？2在試驗中記錄稱量數據應

7、準至幾位？為什么？3使用稱量瓶時，如何操作才能保證試樣不致損失？試驗三 滴定操作練習一、試驗目的1學習并把握滴定分析常用儀器的洗滌和正確使用方法。2通過練習滴定操作，初步把握甲基橙、酚酞指示劑終點的確定。二、試驗原理0.1 mol·L-1 HCl溶液（強酸）和0.1 mol·L-1 NaOH（強堿）相互滴定時，化學計量點的pH為7.0，滴定的pH突躍范圍為4.39.7，選取在突躍范圍內變色的指示劑，可保證測定有足夠的精確度。甲基橙（簡寫為MO）的pH變色范圍是3.1（紅）4.4（黃），酚酞（簡寫為pp）的pH變色范圍是8.0（無色）9.6（紅）。在指示劑不變的狀況下，肯定濃

8、度的HCl溶液和NaOH溶液相互滴定時，所消耗的體積之比值VHCl/VNaOH應是肯定的，即使轉變被滴定溶液的體積，該體積比也不變。借此，可以檢驗滴定操作技術和推斷終點的力量。三、儀器與試劑1量筒（10 mL），試劑瓶（500 mL，1000mL），燒杯（250 mL），堿式滴定管（50 mL），酸式滴定管（50 mL），移液管（25 mL）。2HCl溶液（6 mol·L-1），固體NaOH，甲基橙溶液（1 g·L-1），酚酞指示劑（2 g·L-1，乙醇溶液）。四、試驗步驟1溶液配制（1）0.1 mol·L-1 HCl溶液 用量筒量取約8.5 mL 6

9、mol·L-1 HCl溶液，倒入裝有約490 mL水的1 L試劑瓶中，加水稀釋至500 mL，蓋上玻璃塞，搖勻。（2）0.1 mol·L-1 NaOH溶液 稱取NaOH固體2 g于250 mL燒杯中，加入蒸餾水使之溶解，稍冷后轉入試劑瓶中，加水稀至500 mL，用橡皮塞塞好瓶口，充分搖勻。2酸堿溶液的相互滴定（1）用0.1 mol·L-1 NaOH溶液潤洗堿式滴定管23次，每次用510 mL溶液潤洗。然后將NaOH溶液倒入堿式滴定管中，排出堿管尖嘴的氣泡，將滴定管液面調整至0.00刻度。（2）用0.1 mol·L-1鹽酸溶液潤洗酸式滴定管23次，每次用5

10、10 mL溶液，然后將鹽酸溶液倒入滴定管中，排出酸管尖嘴的氣泡，將液面調整到0.00刻度。（3）在250 mL錐瓶中加入約20 mL NaOH溶液，2滴甲基橙指示劑，用酸管中的HCl溶液進行滴定操作練習。練習過程中，可以不斷補充NaOH和HCl溶液，反復進行，直至操作嫻熟后，再進行（4）、（5）、（6）的試驗步驟。（4）從堿管放出體積在2025 mL范圍內的NaOH溶液于錐形瓶中，把握放液速率為每秒約34滴，加入2滴甲基橙指示劑，用0.1 mol·L-1 HCl溶液滴定至溶液由黃色變為橙色。登記讀數。平行滴定三份。數據按下列表格記錄。計算體積比VHCl /VNaOH，要求相對偏差在&

11、#177;0.3以內。（5）用移液管吸取25.00 mL濃度為0.1 mol·L-1的 HCl溶液于250 mL錐瓶中，加23滴酚酞指示劑，用0.1 mol·L-1 NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色，靜置30s不褪色即為終點。平行測定三份，要求三次之間所消耗NaOH溶液的體積的最大差值不超過±0.04 mL。3數據記錄與處理（1）HCl溶液滴定NaOH溶液（指示劑：甲基橙） 滴定序號記錄項目VNaOH / mLVHCl / mLVHCl / VNaOH平均值VHCl / VNaOH相對偏差/相對平均偏差/（2）NaOH溶液滴定HCl溶液（指示劑：酚酞） 滴定序號記錄

12、項目VHCl / mLVNaOH / mLn次間VNaOH 最大確定差值/mL五、思考題1配制NaOH溶液時，應選用何種天平稱取試劑？為什么？2能否接受直接法配制精確濃度的HCl和NaOH溶液？為什么？3在滴定分析試驗中，為何要用滴定劑潤洗滴定管、用待移取的溶液潤洗移液管？錐形瓶是否也要用滴定劑潤洗？為什么？4HCl與NaOH反應生成NaCl和水，為什么用HCl滴定NaOH時以甲基橙作為指示劑，而用NaOH滴定HCl溶液時使用酚酞（或其它適當的指示劑）？試驗四 容量儀器的校準一、試驗目的1了解容量儀器校準的意義和方法。2初步把握稱量法和相對校準法分別校準滴定管、容量瓶和移液管。二、試驗原理滴定

13、管、移液管和容量瓶是試驗中常用的玻璃量器，它們的精確度是試驗測定結果精確程度的前提，國家對這些量器作了A、B級標準規定（參考§4.8）。對精確度要求較高的分析測試，應使用經過校準的儀器。校準的方法有稱量法和相對校準法。稱量法的原理是，用分析天平稱量被校量器中量入或量出的純水的質量，再依據測定溫度下純水的密度，計算出被校量器的實際容量。由于玻璃的熱脹冷縮，在不同溫度下，各量器的容積也不同。各種量器上標出的刻度和容量，是在標準溫度20時量器的標稱容量。但是，在實際校準工作中，容器中水的質量是在室溫下和空氣中稱量的。因此必需考慮以下因素的影響：（1）空氣浮力對質量的影響；（2）水的密度受溫

14、度的影響；（3）玻璃容器的容積受溫度的影響。為了便利計算，綜合考慮了上述的影響，可得出20容量為1L的的玻璃容器，在不同溫度時所盛水的質量（見表5-14-1）。例如：某支25 mL移液管在18放出的純水質量為24.921 g；密度為0.99751 g·mL-1，計算該移液管在18時的實際容積。則這支移液管的校正值為24.98 mL-25.00 mL-0.02 mL。表5-14-1 不同溫度下1L水的質量（在空氣中用黃銅砝碼稱量）t /m /gt /m /gt /m /g101112131415161718998.39998.33998.24998.15998.04997.92997.

15、78997.64997.51192021222324252627997.34997.18997.00996.80996.60996.38996.17995.93995.692829303132333435995.44995.18994.91994.64994.34994.06993.75993.45需要特殊指出的是：校準不當和使用不當都是產生容量誤差的主要緣由，其誤差甚至可能超過允差或量器本身的誤差。因而在校準時務必正確、認真地進行操作，盡量減小校準誤差。凡是使用校準值的，其校準次數不應少于兩次，且兩次校準數據的偏差應不超過該量器容量允許的1/4，并取其平均值作為校準值。有時，在試驗中只要求兩

16、種容器之間有肯定的比例關系，而無需知道它們各自的精確容積，這時可用相對校準法進行校正。例如，用25 mL移液管移取蒸餾水，注入潔凈且倒立晾干的100 mL容量瓶中，轉移4次后，觀看容量瓶瓶頸處水的彎月面下緣是否剛好與刻線相切。若不相切，應作一記號為標線，以后此移液管和容量瓶配套使用時就用校準的標線。為了更全面、具體了解容量儀器的校準，可參考JJG196-920常用玻璃量器檢定規程。三、儀器與試劑1分析天平，滴定管（50 mL），容量瓶（50 mL），移液管（10 mL），錐形瓶（50 mL，帶磨口玻璃塞）。2蒸餾水。四、試驗步驟1滴定管的校準（稱量法）取一只洗凈并且外表干燥的帶磨口玻璃塞的錐形

17、瓶，放在分析天平上稱量，得空瓶質量m瓶，記錄至0.001 g。再向一洗凈的滴定管中裝滿純水，將液面調至0.00 mL刻度處，從滴定管向錐形瓶中放出肯定體積（記為V）如5.00 mL的純水，蓋緊塞子，稱出“瓶+水”的質量m瓶+水，m瓶+水與m瓶之差即為放出水的質量m水。用上述方法稱量表5-14-3 中所列的刻度間的m水，并測量水溫，查表5-14-1得該溫度下水的密度，即可計算滴定管各部分的實際容量V20。重復校準一次，兩次相應區間的水質量相差應小于0.02 g，求出平均值，并計算校準值V（V20-V0）。以V0為橫坐標，V為縱坐標，繪制滴定管校準曲線。現將一支50 mL滴定管在水溫21校準的部分

18、試驗數據列于表1。表1 50 mL滴定管校正表（水溫21，0.99700g·mL-1）V0/mLm瓶+水/gm瓶/gm水/gV20/mLV校正值/mL0.005.0034.14829.2074.9414.96-0.040.0010.0039.31729.31510.00210.03+0.030.0015.0044.30429.35014.95415.000.000.0020.0049.39529.43419.96120.02+0.020.0025.0054.28629.38324.90324.98-0.02移液管和容量瓶也可用稱量法進行校準。校準容量瓶時，只需稱準至0.01 g即可。

19、表2 50mL滴定管校正表（水溫 ， g·mL-1）V0/mLm瓶/gm瓶+水/gm水/gm水(平均)/gV20/mLV校正值/mL0.0010.000.0020.000.0030.000.0040.000.0050.002移液管和容量瓶的相對校準取一只洗凈且晾干的50 mL容量瓶，用潔凈的10 mL移液管移取10mL純水5次于容量瓶中，觀看液面的彎月面下緣是否恰好與刻線上邊緣相切，若不相切且間距超過1mm，則用膠布在瓶頸上另作標記，以后試驗中，此移液管和容量瓶配套使用時，應以新標記為準。五、思考題1容量瓶校準時為什么需要晾干？在用容量瓶配制標準溶液時是否要晾干？2在實際分析工作中如

20、何應用滴定管的校準值？3分段校準滴定管時，為什么每次都要從0.00 mL開頭？4試寫出以稱量法對移液管（單刻線吸量管）進行校準的簡要步驟。試驗五 食品中總酸的測定（見課本）一、酸堿摘定法 1.目的與要求 了解食品酸度測定的試驗原理及意義。 依據試驗結果的分析，簡述影響試驗精確性的因素。 2.試驗原理食品中的酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、草酸、醋酸等有機酸，其電離常數Ka均大于10-8，可以用強堿標準溶液直接滴定試樣中的酸，以酚酞為指示劑確定滴定終點。按堿液的消耗量計算食品中的總酸含量。測定結果包括了未離解的酸的濃度和已離解的酸的濃度。3.儀器與試劑（1）儀器酸堿滴定裝置；分析天平，感量分別為0. 0

21、00lg及0.00lg；組織搗碎機；研缽。（2）試驗用水試驗用水應符合GB/T 6682規定的二級水規格或蒸餾水，使用前應經煮沸，冷卻。（3）試劑Na0H標準滴定溶液 0. lmol/L1%酚酞溶液 稱取1g酚酞，溶于60mL 95%乙醇中，用水稀釋至100mL。4.試驗步驟（1）樣品預處理固體樣品。取有代表性的固體樣品至少200g，用搗碎機搗碎至均勻，置于密閉玻璃容器內。固、液樣品。取按比例組成的固、液樣品至少200g，用研缽或用組織搗碎機搗碎，混勻后置于密閉的玻璃容器內。含二氧化碳的液體樣品。至少取200g樣品至500mL燒杯中，置于電爐上，邊攪拌邊加熱至微沸騰，保持2min，冷卻，稱量，

22、用煮沸過的水補至煮沸前的質量，置于密閉玻璃容器中。不含二氧化碳的液體樣品。充分混合均勻，置于密閉玻璃容器內。（2）測定試液的制備液體樣品。若總酸含量小于或等于4g/kg，將試樣用快速濾紙過濾。收集濾液，用于測定。若總酸含量大于4g/kg，稱取1050g樣品，用煮沸過的水定容至250mL，過濾。收集濾液，用于測定。固體、半固體樣品。稱取均勻樣品1050g,精確至0.00lg，置于燒杯中。用約80煮沸過的水150mL將燒杯中的內容物轉移到250mL容量瓶中，置于沸水浴中煮沸30min（搖動23次，使試樣中的有機酸全部溶解于溶液中），取出，冷卻至室溫，用煮沸過的水定容至250mL。用快速濾紙過濾，收

23、集濾液，用于測定。 （3）樣品測定 精確吸取試樣濾液2550mL，使之含0.0350.07g酸，置于250mL錐形瓶中，加水4060mL及0.2mL 1%的酚酞指示劑，用0. lmol/L NaOH標準溶液滴定至微紅色且30s不褪色。記錄消耗0. lmol/L NaOH標準滴定溶液的體積(V1)。同一被測樣品須測定兩次。用水代替樣品做空白試驗，操作相同。記錄消耗NaOH標準滴定溶液的體積(V2)。（4）試驗數據記錄見表6-5。表6-5 數據記錄表項目第一次其次次第三次平均值滴定時取樣體積/mL滴定樣品消耗NaOH溶液的體積V1 / mL空白試樣消耗NaOH溶液的體積V2 / mL5.結果計算

24、(6-2)式中，X為樣品中總酸的含量，g/kg（或g/L）；c為NaOH標準滴定溶液的濃度，mol/L； V1為滴定樣品時消耗NaOH標準滴定溶液的體積，mL； V2為空白試樣消耗NaOH標準滴定溶液的體積，mL； m為樣品質量或體積，g（或mL）； F為試樣的稀釋倍數；K為酸的換算系數：蘋果酸0.067、乙酸0.060、酒石酸0.075、檸檬酸0.064、檸檬酸（含一分子結晶水）0.070，乳酸0. 090、草酸0.045、鹽酸0. 036、磷酸0. 049。 計算結果精確到小數點后兩位。6.留意事項此方法適用于果蔬制品、飲料、乳制品、飲料酒、蜂產品、淀粉制品、谷物制品和調味品等食品中總酸的

25、測定，但不適用于有顏色或渾濁不透亮的試樣，建議它們改用pH電位法測定。對于酸度值較低的食品，測定時可使用0.05mo1/L NaOH標準滴定溶液或0.0lmol/L NaOH標準滴定溶液（用時當天稀釋配制）。一般要求滴定時消耗的氫氧化鈉標準滴定液不少于5mL，最好在1015mL。 一樣品，兩次測定結果之差，不得超過兩次測定平均值的2%。 般狀況下，柑橘、檸檬及柚子其總酸以檸檬酸計；葡萄（汁）以酒石酸計；仁果、蘋果、桃、李等以蘋果酸計；鹽漬發酵的制品、肉、魚、家禽及乳品以乳酸計；醋漬及以醋酸發酵制品，以醋酸計；果汁型固體飲料以結晶水檸檬酸計；菠菜以草酸計。試驗六 鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（條件試

26、驗和試樣中鐵合量的測定）一、試驗目的1學習如何選擇吸光光度分析的最佳試驗條件。2把握鄰二氮菲吸光光度法測定鐵的原理及方法。3學會繪制吸取曲線和標準工作曲線的方法。4把握分光光度計的結構和使用方法。二、試驗原理吸光光度法測定鐵的理論依據是朗伯一比耳定律。假如固定比色皿厚度，測定有色溶液的吸光度，則溶液的吸光度與濃度之間有簡潔的線性關系，可用標準曲線法進行定量分析。接受吸光光度法測定物質的含量時，通常要經過取樣、顯色及測量等步驟。顯色反應受多種因素的影響，為了使被測離子全部轉變為有色化合物，應當通過條件試驗確定顯色劑用量、顯色時間、顯色溫度、溶液酸度及加入試劑的挨次等。本試驗在測定試樣中鐵含量之前

27、，先做部分條件試驗，以便初學者把握確定試驗條件的方法。條件試驗的簡潔方法是：變動某試驗條件，固定其余條件，測得一系列吸光度值，繪制吸光度某試驗條件的曲線，依據曲線確定某試驗條件的適宜值或適宜范圍。吸光光度法測定鐵的含量所用的顯色劑較多，有鄰二氮菲（又稱鄰菲啰啉，菲繞林）及其衍生物、磺基水楊酸、硫氰酸鹽、5-Br-PADAP等。其中鄰二氮菲分光光度法的靈敏度高，穩定性好，干擾簡潔消退，是目前普遍接受的一種方法。在pH為2 9的溶液中，Fe2+與鄰二氮菲（Phen）生成穩定的橘紅色絡合物Fe(Phen)32+：（橘紅色）上述反應的lgK穩21.3，摩爾吸光系數5081.1×104 L&#

28、183;mol-1·cm-1。鐵含量在0.16g·mL-1符合比爾定律。而Fe3+ 與鄰二氮菲作用形成藍色絡合物，穩定性較差，因此在實際應用中常加入還原劑使Fe3+還原為Fe2+，常用的還原劑是鹽酸羥胺：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl 2Fe2+ + N2+ 4H+ + 2H2O + 2Cl-測定時，酸度高，反應進行較慢；酸度太低，則Fe2+ 易水解，因此本文接受pH 5.06.0 的HAc-NaAc緩沖溶液，可使顯色反應進行完全。Bi3+，Cd2+，Hg2+，Zn2+及Ag+等離子與鄰二氮菲作用生成沉淀，干擾測定。試驗證明，相當于鐵質量40倍的Sn2+，A

29、l3+，Ca2+，Mg2+，Zn2+，SiO32-，20倍的Cr3+，Mn2+，VO3-，PO43-，5倍的Co2+，Ni2+，Cu2+等離子不干擾測定。本法測定鐵的選擇性雖然較高，但選擇試樣時仍應留意上述離子的影響。三、儀器與試劑1分光光度計，50 mL容量瓶8個（或比色管8支）。2鐵標準溶液：100g·mL-1，精確稱取0.8634g 分析純NH4Fe(SO4)2·12H2O置于200 mL燒杯中，加入20 mL 6 mol·L-1 HCl溶液和少量水，用玻璃棒攪拌使其溶解，然后定量轉移至1 L容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。3鐵標準溶液：10g·

30、;mL-1，用移液管吸取10 mL l00g·mL-1鐵標準溶液于100 mL容量瓶中，加入2 mL 6 mol·L-1 HCl溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。4鄰二氮菲（1.5 g·L-1），鹽酸羥胺（100 g·L-1，用時配制），NaAc（1 mol·L-1），NaOH（l mol·L-1），HCl（6 mol·L-1）。四、試驗步驟1條件試驗試驗（1）吸取曲線的繪制 取兩個50 mL容量瓶（或比色管），用吸量管分別加入0.0 mL和1.0 mL 100g·mL-1鐵標準溶液，1 mL鹽酸羥胺溶液，搖勻。再加

31、入2 mL 鄰二氮菲（Phen），5 mL NaAc溶液，用水稀釋至刻度，搖勻。放置10min后，用1 cm比色皿，以試劑空白（即0.0 mL鐵標準溶液）為參比溶液，在440560 nm之間，每隔10 nm測一次吸光度，在最大吸取峰四周，每隔5nm測量一次吸光度。在坐標紙上，以波長為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制A-吸取曲線。從吸取曲線上選擇測定Fe的適宜波長，一般選用最大吸取波長max。（2）顯色劑用量的選擇取7個50 mL容量瓶（或比色管），用吸量管精確吸取1.0 mL 100g·mL-1鐵標準溶液加入各容量瓶中，然后加入 l mL鹽酸羥胺溶液，搖勻。再分別加入0.1 mL，0.

32、3 mL，0.5 mL，0.8 mL，1.0 mL，2.0 mL，4.0 mL Phen和5 mL NaAc溶液，以水稀釋至刻度，搖勻。放置10 min。用1cm比色皿，以蒸餾水為參比溶液，在選擇的波長（max）下測定各溶液的吸光度。以所取Phen溶液體積V為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制A-V曲線。得出測定鐵時顯色劑的最適宜用量。（3）顯色時間的選擇取一個50 mL容量瓶（或比色管），用吸量管精確加入l.0 mL 100g·mL-1鐵標準溶液，1 mL鹽酸羥胺溶液，搖勻。再加入2 mL Phen，5 mL NaAc溶液，以水稀釋至刻度，搖勻。馬上用1 cm比色皿，以蒸餾水為參比溶液

33、，在選定的波長（max）下測量吸光度。然后依次測量放置5 min，10 min，30 min，60 min，90 min，120 min后的吸光度。以時間t為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制A-t曲線。得出鐵與鄰二氮菲顯色反應完全所需要的適宜時間。2鐵含量的測定（1）標準曲線的繪制取6個50 mL容量瓶（或比色管），用吸量管分別加入0.0 mL，2.0 mL，4.0 mL，6.0 mL，8.0 mL，10.0 mL 10 g·mL-1鐵標準溶液， l mL鹽酸羥胺溶液，搖勻。再加入2 mL Phen，5 mL NaAc溶液，搖勻。用水稀釋至刻度，搖勻后放置10 min。用1 cm比色皿

34、，以試劑空白為參比溶液（該顯色體系的試劑空白為無色溶液，在條件試驗中用蒸餾水作參比溶液，操作較為簡潔。），在所選擇的波長（max）下，測量各溶液的吸光度。以含鐵量為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制A-Fe含量標準曲線。在繪制的標準曲線上，查出某一鐵濃度適中的標準溶液所對應的吸光度，計算Fe2+-Phen絡合物的摩爾吸光系數。（2）試樣中鐵含量的測定精確吸取1.0 mL試液于50 mL容量瓶（或比色管）中，按上述標準曲線相同條件和步驟，測量其吸光度。從標準曲線上查出其相應的鐵含量，然后計算出試液中鐵的含量（單位為g·mL-1）。五、思考題1從試驗測得的吸光度求鐵含量的依據是什么？如何求得

35、？2試擬出一簡潔步驟，用吸光光度法測定水祥中的全鐵（總鐵）和亞鐵的含量。3吸光光度法進行測量時，為何使用參比溶液，參比溶液選用的原則是什么？試驗七 亞硝酸鹽含量的測定 （見課本） 一、目的與要求1.學習肉制品中食品添加劑亞硝酸鹽的檢測方法。2.把握鹽酸萘乙二胺法的基本操作技術。二、試驗原理樣品經沉淀蛋白質、除去脂肪后，在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合生成紫紅色化合物，顏色的深淺與亞硝酸鹽含量成正比，其最大吸取波長為538nm，可測定吸光度并與標準比較定量。三、儀器與試劑 1.儀器721型分光光度計；比色管、各種移液管及常用玻璃儀器；小型絞肉機。2.試劑（1）

36、飽和硼砂溶液 溶解5g硼酸鈉(Na2B4O7·10H2O)于100mL熱水中，冷卻后備用。（2）硫酸鋅溶液 溶解30g硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)于100mL水中。（3）對氨基苯磺酸溶液(0.4%) 溶解0. 4g對氨基苯磺酸于100mL 20%鹽酸中，避光保存。（4）鹽酸萘乙二胺溶液(0.2%) 溶解0. 2g鹽酸萘乙二胺于100mL水中，避光保存。（5）亞硝酸鈉標準溶液 精確稱取0.1000g亞硝酸鈉（硅膠干燥劑中干燥24h），加水溶解，移入500mL容量瓶，并稀釋至刻度，混勻，臨用前吸取5. 00mL于200mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，此溶液每毫升相當5g亞硝酸

37、鈉。（6）材料午餐肉或臘腸。四、測定步驟1.樣品中亞硝酸鈉的提取稱取2.50g經絞碎混勻的樣品于50mL燒杯中，加硼砂飽和溶液6.3mL,攪拌均勻。以70左右的熱水約150mL將樣品全部洗入250mL容量瓶中，置沸水浴加熱15min。取出冷卻至室溫，一面轉動，一面滴加1.3mL硫酸鋅溶液以沉淀蛋白質，加水至刻度，混勻，放置30min。 除去上層脂肪，用濾紙過濾，棄去最初20mL,濾液備用。2.樣品測定取6支25mL比色管，編號，按表6-11挨次加入各試劑及操作。加水至25.00mL,混勻，靜置15min，用2cm比色皿，以零號管調整零點，于波長538nm處測吸光度，記錄。繪制標準曲線。以亞硝酸

38、鈉量(ug)為橫坐標，與其對應的吸光度為縱坐標繪制標準曲線。用樣品提取濾液的吸光度，在以上亞硝酸鈉標準曲線上查出亞硝酸鈉的量(g) 。表6-11 加入試劑挨次及結果記錄管號012345NaNO2標準溶液體積/mL00.200.400.600.80相當于NaNO2量/g01234樣品提取濾液體積/mL20.000.4%對氨基苯磺酸溶液體積/mL1.001.001.001.001.001.00混勻35min0.2%鹽酸萘乙二胺溶液體積/mL0.500.500.500.500.500.50吸光度五、結果計算 X= (6-13)式中，X為樣品中亞硝酸鹽的含量，mg/kg;；A為測定用濾液中亞硝酸鈉的含

39、量，g；m為樣品的質量，g； 20/250為測定用樣液體積(mL)/試樣處理液總體積(mL) 。六、留意事項1.本法適用于肉制品中硝酸鹽的測定。其方法是把沉淀蛋白質、除脂肪的溶液通過鎘柱，使其中的硝酸根離子還原成亞硝酸根離子，按此法測得總量B減去試樣中亞硝酸鹽含量C，即得試樣中硝酸鹽(以硝酸鈉計)含量。硝酸鹽(以硝酸鈉計)含量(g/kg)=(B-C)×l.232 (6-14)式中，1.232為亞硝酸鈉換算為硝酸鈉的系數。2.樣品提取時，也可用亞鐵氰化鉀溶液2.5mL和乙酸鋅溶液2.5mL代替1.3mL硫酸鋅溶液，以沉淀蛋白質，配法如下。（1）亞鐵氰化鉀溶液稱取106g亞鐵氰化鉀K4F

40、e(CN)6·3H2O,溶于水并稀釋至1000mL。 （2）乙酸鋅溶液稱取220g乙酸鋅Zn(CH3COO)2·2H2O，加30mL冰醋酸溶于水，并稀釋至1000mL。3.本法與國標方法大同小異，只是用試驗室現有的25mL比色管，全部試劑相應削減。4.當亞硝酸鹽含量高時，過量的亞硝酸鹽可以將偶氮化合物氧化變成黃色，而使紅色消逝，這時可以實行先加入試劑，然后滴加樣液，從而避開亞硝酸鹽過量。七、思考題1.本試驗中參比溶液的作用?2.為什么要對食物中亞硝酸鹽的含量進行測定? 試驗八 食品中水分活度值的測定集中法（見課本） 1.目的與要求 學習水分活度值測定的意義及試驗原理。 把握

41、康威集中法測定水分活度值的操作方法。圖6-2 康威集中皿A 內室；B外室；C玻璃蓋；D鋁皿或玻璃皿 2.試驗原理 樣品在康威微量集中皿的密封和恒溫條件下，分別在Aw較高和較低的標準飽和溶液中集中平衡后，依據樣品質量的增加（在較高AW標準溶液中平衡）和削減（在AW較低標準溶液中平衡），以樣品質量增減為縱坐標，各種標準飽和溶液Aw值為橫坐標，繪出樣品質量隨溶液AW值變化的曲線，從而計算樣品的水分活度值。 3.儀器與試劑 （1）儀器康威微量集中皿。構造如圖6-2所示。 圓形小鋁皿或玻璃皿。盛放樣品用，直徑為2528mm，深度為7mm。分析天平。感量0.0001g。（2）標準試劑溶液配制標準試劑飽和溶液，其在25時的AW值如表6-2所示。表6-2 標準水分活度試劑及其在25時的