1、菊花花瓣的組織培養摘要: 述菊花花瓣組織培養的備件、生長與分化情況及意義。關鍵詞: 菊花、花瓣、組織培養。前言： 植物組織培養的概念 是指在人工控制的條件下，將植物體的任何一部分，或器官、或組織，或細胞，進行離體培養，使之發育形成完整的植物體。所謂人工控制的條件，即營養條件和環境條件；植物體的任伺一部分是指根、莖、葉、花、果以及它們的組織切片和細胞。它的優越性在于：可以在不受其他部分干擾的情況下研究被培養部分的生長和分化規律。特點是：取材少，培養材料經濟；人為控制培養條件，不受自然條件影響；生長周期短，繁殖率高；管理方便，利于自動化控制。1植物組織培養與細胞培養開始于19世紀后半葉，當時植物細

2、胞全能性的概念還沒有完全確定，但基于對自然狀態下某些植物可以通過無性繁殖產生后代的觀察，人們便產生了這樣一種想法即能否將植物體的一部分在適當的條件下培養成一個完整的植物體，為此許多植物科學工作者開始了培養植物組織的嘗試。最初的問題仍然是集中在植物細胞有沒有全能性和如何使這種全能性表現出來。植物組織培養的理論基礎 是植物細胞的全能性（totipotency）。一個生活的植物細胞，只要有完整的膜系統和細胞核，它就會有一整套發育成一個完整植株的遺傳基礎，在一個適當的條件下可以通過分裂、分化再生成完整植株，這就是所謂的細胞全能性。2植物組織培養的基本方法 是材料選擇、培養基配置、接種與培養和最后的小苗

3、移栽。植物組織培養的應用 1、植物離體快速繁殖2、植物脫毒苗木培育3、植物新品種培育4、植物次生代謝產物生產6、人工種子5、植物種質資源的離體保存國內外研究進展 1 植物組織培養的光源研究 早在1991 年， 維斯康星大學的Bula 等利用以紅光660 nm 為發光中心的GAALAS LED 陣列及其輔助光藍色熒光燈， 栽培了GRAND Rapids lettace（lactucasativa L）， 這大概是世界上最早利用LED 作為光源進行植物栽培的試驗實例。經LED 光源處理的組培苗鮮重增量、碳酸酐酶活性以及葉綠素含量等明顯高于對照的日光燈處理組培苗。32 無糖組織培養技術研究 無糖組織

4、培養是日本千葉大學古在豐樹教授研究開發的一種新的植物組培技術。他首先研究發現容器中的小植株也具有光合自養能力， 從而考慮改變植株的營養方式以CO2作為植株的碳源， 同時改善植株的生理和能量代謝，使植株更好地發揮自身的光合能力，降低生產成本。 3 植物組織培養的新型培養容器研究 在傳統的組織培養中， 通常采用容積較小的培養容器以降低培養基中糖引起的污染， 一般情況下容器中的空氣流動性差，相對濕度高，CO2濃度低。為了增強培養容器內外的氣體交換、降低容器內的相對濕度， 近年來有不少學者研究了利用高分子膜材料制成的培養容器的有效性。41.實驗材料材料：在武漢市場購買的菊花，菊花花瓣呈黃色，取里層花瓣

5、切塊后接種于平底試管。2.菊花的外植體的制備2.1培養基是組織培養能否成功的關鍵，隨著研究工作的進展，培養基的種類越來越多，但其組成主要有：無機成分（大量元素：每升培養基中大于0.5mmol的元素；微量元素：每升培養基中小于0.5 m mol的元素）：硫酸鐵；乙二胺四乙酸二鈉鹽；乙二胺四乙酸鐵鈉鹽；硼酸；氯化鈷；碘化鉀；鉬酸鈉；無水氯化鈣；二水氯化鈣；干燥氯化鈣；硝酸鈣；N-泛酸鈣；磷酸三鈣；硫酸銅；硝酸胺；硝酸鉀；結晶硫酸鎂；硫酸亞鐵；磷酸二氫鉀；硫酸錳；硫酸鋅；磷酸二氫鈉；三氧化鉬；氯化鉀；氫氧化鉀；硫酸銨 。 有機成分：煙酸、肌醇、鹽酸硫胺素（VB1）、鹽酸吡哆醇（VB6）、甘氨酸、葉酸

6、、蔗糖、瓊脂粉。激素：生長素：IAA（吲哚-3-乙酸）、NAA（-萘乙酸）、2，4-N（2，4-二氯苯氧乙酸）等；細胞分裂素：6-BA（6-芐基腺嘌呤）、BAP（6-芐氨基嘌呤）、KT（激動素）、ZT（玉米素）等。 除上述必需成分外，還用到了瓊脂，使配制的培養基凝固，便于操作；本實驗選用MS基本培養基，6-BA、NAA兩種激素配，加入蔗糖的瓊脂固體培養基。 表2-1 MS培養基及其貯備液（mg/L）培養基 儲備液NH4NO31650 20×33000KNO3190038000CaCl2.2H2O4408800MgSO4.7H2O3707400KH2PO41703400KI0.8320

7、0×166H3BO36.21240MnSO4.4H2O22.34460ZnSO4.7H2O8.61720Na2MoO4.2H2O0.2550CuSO4.5H2O0.0255CoCl2.6H2O0.0255FeSO4.7H2O27.8 200×5560Na.EDTA.2H2O37.37460肌醇100200×20000煙酸0.5100煙酸吡哆醇0.5100鹽酸硫胺素0.120甘氨酸2400 2.2滅菌物品:平底試管8支,蒸餾水200ml,解剖刀一把,鑷子一把,平板8個,一套槍頭。 其他器材: 酒精燈,打火機,廢液缸,移液槍一套,籃筐，棉塞，棉線，超凈臺，稱量紙，錐形

8、瓶250ml，玻璃棒，報紙，剪刀，小刀，鑷子。2.3方法: 2.3.1 MS培養基的配制：先稱取瓊脂1.4g，蔗糖6g于250ml錐形瓶中，再加150ml蒸餾水，講錐形瓶在電爐上加熱溶解。溶解后在錐形瓶中加儲備液10ml，儲備液1ml，儲備液1ml，儲備液1ml，然后加水到200ml，用HCl或NaOH，調PH至5.8。最后趁熱分裝于9支平底試管，棉塞封口。2.3.2滅菌: 用高壓蒸汽滅菌鍋將上述物品滅菌,在121滅菌15min。2.3.3加激素和外植體的消毒： 在超凈工作臺上，趁熱在每支試管加30ul 6-BA和10ul NAA，取菊花花瓣,用自來水洗2-3次，置于小燒杯中，用體積分數為70

9、%的乙醇浸泡15-30s。用無菌水清洗2-3次后，用質量分數為2%的次氯乙酸鈉液中浸泡6-10min，用無菌水洗3-4次。于滅菌過的培養皿上切成0.5×0.5大小的方塊。接種到平底試管誘導培養基中。2.3.4菊花花瓣接種： 插入菊花瓣,要注意使花瓣的形態學下端接觸到培養基.每瓶接種23瓣,接種后將錐形瓶的瓶口在酒精燈火焰處轉動灼燒一遍。重新包扎封口，貼上標簽。2.3.5培養： 將接種后的8支平底試管放在30恒溫室培養。20天左右就可以形成愈傷組織。2.4后續： 收拾臺面，處理廢棄物。3.菊花的分化培養3.1試劑： 6-BA 2.0mg/ml,NAA 0.2mg/ml,儲備液 3.2滅

10、菌的物品： 平底試管8支,蒸餾水200ml,解剖刀一把,鑷子一把,平板9個,一套槍頭。 其他器材:酒精燈,打火機，用鑷子，廢液缸,移液槍一套, 籃筐，棉塞，棉線，報紙，超凈臺，稱量紙，錐形瓶250ml，玻璃棒。3.3方法： 3.3.1 MS培養基的配制：先稱取瓊脂1.4g，蔗糖6g于250ml錐形瓶中，再加150ml蒸餾水，講錐形瓶在電爐上加熱溶解。溶解后在錐形瓶中加儲備液10ml，儲備液1ml，儲備液1ml，儲備液1ml，然后加水到200ml，用HCl或NaOH，調PH至5.8。最后趁熱分裝于9支平底試管，棉塞封口.5 3.3.2 加激素和分化： 在無菌操作室中, 趁熱在每支試管加20ul

11、6-BA和20ul NAA。然后用鑷子取出圖4中的愈傷組織，在平板上，用滅菌的蒸餾水清洗三次。用小刀切成5×5mm的小塊，用鑷子放入平底試管里。立即在酒精燈火焰處灼燒管口后塞上棉塞，報紙包扎標記。 3.3.3培養： 將8支平底試管放在20培養室，光照下培養，直到發芽。3.4后續： 收拾臺面，處理廢棄物。4、結果與討論4.1圖片結果 4.1.1 菊花的誘導培養基 2周后 圖1 圖2 圖3 圖4 圖5 圖6 從上圖中可以發現圖6中的愈傷組織完全死亡，無明顯現象。圖2、3、4、5其他的生長良好,其中夾帶著少許綠色組織，生長較為緩慢。而圖4 則生長旺盛，脫分化出大量的愈傷組織，呈一團濃綠組織

12、。 4.1.2 菊花的分化組織基 2周后 圖7 圖8 圖9 可以清晰看出與7中的菊花分化組織生長良好,能夠看到有少許的小葉片.圖8試管中的菊花組織上有部分開始褐化，顏色較淡。 圖9為我們組萬同學試管，此為誘導培養基并沒有經過分化與生根培養，卻長成了一株完整的植株，由此可見該菊花的愈傷組織經誘導培養后有一定的幾率會形成完整植株。4.2討論 可以在實驗里看到了一些組織出現了褐化現象,其中褐變是指在組織培養過程中，培養材料向培養基中釋放褐色物質，致使培養基逐漸變成褐色，培養材料也慢慢變褐而死亡的現象?？紤]到實驗過程,可以發現褐化現象可能是以下的幾個方面造成的： （2）菊花的生理狀態 菊花的狀態不同，

13、接種后褐變程度不同。一般菊花的老化程度越高，其木質素的含量也越高，也就越容易褐變，成齡材料一般均比幼齡材料褐變嚴重。（4）培養基 在初代培養中，培養基中無機鹽濃度過高，會引起酚類物質大量產生，導致褐變。（5）光照 在采取菊花前，將接種后的初代培養的菊花在黑暗條件下培養，對抑制褐變發生也有一定的效果遮光抑制褐變的原因主要是由于氧化過程中，許多反應受酶系統控制，而酶系統活性受光照影響。但是，暗培養時間過長會降低外植體的生活能力，甚至引起死亡。（6）溫度 高溫促進酚氧化，培養溫度越高，褐變越嚴重，而低溫可抑制酚類化合物氧化，降低多酚氧化酶的活性，從而減輕褐變。在實驗途中可以有幾支試管傾倒在日光燈管上，造成了溫度過高。（7）培養時間 材料培養時間過長，會引起褐變物的積累，加重對培養材料的傷害。菊花隨著培養時間的延長，褐變程度會加劇，甚至在超過一定時間不進行轉接，褐變物的積累還會引起培養材料的死亡。從可以的實驗時間來看，可以的菊花的培養時間還不是很長，這個原因應該說是影響不大的。 6.實驗建議: 6.1 實驗注意事項： 1. 無菌操作是最為關鍵的，預備室的清洗、培養基的配制和滅菌，外植體初步處理和接種等工作要滅好菌。2.培養室要求光照、溫度控制，以利于外植體的生長、發育。3.在菊花組織培養中試劑的配制配方要熟記，避免不必要的錯誤。6.2 在實驗過程中老師可以控制