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文檔簡介

1、牛磺酸對被動吸煙仔鼠小腦皮層NGF基因表達的干預作用【關鍵詞】 牛磺酸【摘要】 目的 探索牛磺酸對被動吸煙仔鼠所致腦損害的保護作用。方法 采用實驗吸煙的方法給予孕鼠被動吸煙;以仔鼠小腦皮層神經生長因子(NGF)蛋白變化為指標觀察牛橫酸對被動吸煙的影響。結果 吸煙組仔鼠小腦皮層NGF蛋白水平與對照組比較下降顯著(P<0.001),吸煙+牛磺酸組仔鼠與對照組比較差異無顯著性(P>0.05)。結論 被動吸煙可能是導致仔鼠小腦皮層NGF水平下降的因素;牛磺酸對被動吸煙所致仔鼠腦損害具有保護作用。 Key words taurine passive smoking nerve

2、 growth factor 被動吸煙可致仔鼠體格發育遲緩,學習記憶功能降低 1,2 。神經生長因子(Nerve growth factor NGF)是一種由118個氨基酸組成的蛋白質,具有調節神經元前體細胞增殖和分化的作用,調節中樞和外周神經元存活和軸突生長,還能調節成熟感覺神經元中P物質的CGRP的基因表達,并對效應神經元的化學、機械損傷的修復起重要作用 3 。牛磺酸(Taurine TAU)是一種含硫基的氨基酸,在哺乳類動物的腦內和非神經組織內有豐富的含量,其機制可能與膜的穩定、解毒、滲透調節、抗氧化、鈣離子流通的調節以及作為神經遞質和神經調質有關 4 。目前,TAU用于治療或預防被動吸

3、煙所致仔鼠損害的研究也未見報道。本實驗旨在探索牛磺酸對被動吸煙所致腦損傷的干預作用,以便為被動吸煙的胚胎損害和預防提供一些有價值的動物實驗資料。 1 材料與方法 1.1 動物分組及處理 選Wistar雌性大鼠21只(山西醫科大學動物室提供),體重150210g,隨機分為三組(每組7只):實驗1組(被動吸煙組);實驗2組(被動吸煙+牛磺酸組);正常對照組。三組大鼠均于受孕的第2天起進行處理直至自然分娩。實驗1組給予連續實驗性吸煙 1 ,每日吸煙前用0.65ml生理鹽水灌胃:實驗2組于每日吸煙前用牛磺酸500mg/kg灌胃;對照組不吸煙,每日用0.65ml生理鹽水灌胃。 1.2 方法 各組孕鼠分娩

4、的仔鼠分別為實驗1組50只,實驗2組51只,對照組46只。稱量體重后斷頭法處死,迅速分離出腦并稱重,在沸生理鹽水中煮5min,以滅活酶、保持神經肽的穩定。然后分離出小腦后加入1.0mol/L HCl1.0ml充分勻漿后倒入塑料指型管中,在室溫中放置100min,使生物活性肽充分溶解在酸中然后加入1.0mol/L NaOH1.0ml中和酸。4000r/min離心10min,取上清液,于-20冷藏待測。仔鼠小腦組織NGF含量用免疫放射測定法(radioimmunoassay RIA)(測量試劑:NGF-RIAODS2900,天津四方公司)。 1.3 統計學方法 所得數據以x±s表示,組間

5、比較采用統計學F檢驗,檢驗水準=0.05。 2 結果實驗1組仔鼠的體重、腦重和小腦NGF蛋白水平分別與對照組和實驗2組比較均顯著降低(P<0.001);實驗2組仔鼠的三項指標與對照組比較差異無顯著性(P>0.05)。結果見表1。 表1 各組仔鼠體重、腦重和小腦NGF蛋白的比較 (略) 3 討論被動吸煙可致胎兒宮內發育遲緩 5 (IUGR),可致仔鼠學習記憶功能降低 1,2 ,說明煙霧中的有毒物質能通過胎盤作用于發育期胚胎,不僅影響胚胎體格發育,同時影響神經系統發育。NGF是發現最早的神經營養因子,是維持交感神經元和感覺神經元生長、發育和功能所必需的營養因子。對胚胎腦

6、組織而言,NGF可促進腦干細胞的生長,影響腦干細胞向不同神經元的分化,刺激神經纖維的定向生長,調節神經遞質合成,參與細胞凋亡,幾乎滲透到神經系統發育的各個方面和整個過程。Levi-Montalcini證實,NGF對交感、感覺及中樞膽堿能神經有營養作用 6 ,其不僅能促進交感神經元的長期存活,使交感神經節增大 7 。還能誘導多種酶的合成,使微管相關蛋白磷酸化,導致微管快速裝配,維持軸突生長 8 。將NGF注入胚胎小鼠或初生小鼠體內,會使感覺和交感神經節比正常增大數倍,單個的神經元變大,內質網、神經微絲和神經微管等細胞器也增多。將NGF注入新生大鼠腦隔區、海馬和新皮質時,這些部位膽堿能神經元的cA

7、MP活性明顯升高,表明NGF對腦細胞正常發育和其功能和維持有明顯效應。小腦既是頭、肢體、軀干姿勢控制的重要中樞,又是啟動、協調學習和運動執行的重要中樞。且大鼠胚胎期小腦內NGF蛋白及NGFmRNA水平均較高,選擇小腦NGF蛋白水平可反應不同發育階段NGF蛋白水平,其含量降低可能是被動吸煙所致腦損傷的原因之一。可見,NGF在腦內分泌的改變可影響腦發育的相關環節,導致腦發育遲緩和腦損傷 10 。 牛磺酸(Taurine,TAU)又稱為牛黃膽堿、牛膽素,是一種結構簡單、具有多種生物學活性的游離氨基酸,對維持人體正常生理功能有重要作用。研究人員通過實驗表明,牛磺酸廣泛分布于人體各組織器官,尤以腦組織濃

8、度最高。胚胎腦組織中牛磺酸濃度比成年腦組織高34倍,出生后迅速降低,但發育成熟的腦中牛磺酸含量僅次于谷氨酸 11 。生長發育中的動物及新生兒腦中牛磺酸含量顯著高于成年動物腦中該物質的含量。牛磺酸存在于大腦皮層、小腦及嗅球等區域,可促進腦細胞內DNA、RNA的合成,增加膜的磷酯酰乙醇胺含量和腦細胞對蛋白質的利用率,是一種神經介質、神經調節因子、滲透調節因子及抗氧化劑,并參與學習和記憶的調節,對中樞神經系統的功能有重要的調節作用。在動物大腦生長發育中扮演神經營養和神經保護因子作用 12 。Chen等人在胚胎神經細胞培養研究中證明,加入牛磺酸可增加神經元DNA和蛋白質的合成代謝,促進細胞的增殖和分化

9、 13 。 本實驗中被動吸煙+牛磺酸組仔鼠的體重、腦重及小 腦內NGF水平與對照組比較差異無顯著性。說明牛磺酸對被動吸煙仔鼠的腦損傷具有保護作用。可能通過改變某些蛋白質的基因表達,阻止或逆轉神經元發生凋亡,從而達到對神經元的保護作用。但其機制仍需進一步探討。參考文獻 1 馬太芳,郭賢熙,李芳蘭,等.孕鼠被動吸煙對仔鼠學習記憶的影響.山西醫科大學學報,1999,30(4):299-300. 2 馬太芳,郭賢熙,李芳蘭,等.被動吸煙對大鼠子代記憶功能和c-fos基因表達的影響.山西醫科大學學報,2000,31(6):486-487. 3 蘇剛.神經生長因子在神經再生中的作用研究進展.實用兒科臨床雜

10、志,2003,18(2):138. 4 饒志仁,島田昌一,遠山正彌,等.牛磺酸轉運體的cDNA在大鼠腦內的分布.解剖學報,1997,28(1):10-14. 5 何耀.被動吸煙的現狀和相關研究的國內外進展.中國健康教育,1999,15(6):9. 6 Levi-Montalcini R.The nerve growth factor thirty-five years later.Science,1987,237:1154-1162. 7 Chun LY,Paul HP.Role of nerve growth factor in the development of rat sympathe

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