1、壓可平膠囊溶出度測定方法的研究摘要 目的：建立壓可平膠囊中兩種主成分阿替洛爾和硝苯地平的溶出度測定方法。方法：采用小杯法，轉速為50 rmin-1，參照日本醫療用藥品品質情報集中的溶出度試驗條件并根據樣品實際情況作出相應調整，采用HPLC法分別考察壓可平膠囊在pH1.2的人工胃液（含0.5%十二烷基硫酸鈉溶液）、pH4.0醋酸鹽緩沖液（含0.5%十二烷基硫酸鈉溶液）、pH6.8磷酸鹽緩沖液（含0.25%十二烷基硫酸鈉溶液）及水（含0.25%十二烷基硫酸鈉溶液）中的體外溶出行為。結果：阿替洛爾、硝苯地平與壓可平膠囊中其他成分分離度良好，阿替洛爾、硝苯地平在1030gml-1濃度范圍呈良好線性關系

2、，兩者在不同溶出介質中回收率均在99%以上；壓可平膠囊中兩種主成分阿替洛爾和硝苯地平在四種不同的溶出介質中溶出度的均一性良好。結論：該方法簡便、準確, 重復性好, 可用于該膠囊的溶出度測定。關鍵詞：壓可平膠囊; 溶出度; 小杯法; 反相高效液相色譜法Study on dissolution test of Yakeping capsuleAbstract Objective:To establish a method of the dissolution test of two primary ingredients atenolol and nifedipine in yakepingcap

3、sule.Methods: Small glass - method was adopted,50 rmin-1.According to the dissolution test conditions in Japans“quality of medical drgs information set”and make appropriate adjustments in accordance with the actual situation of the sample,different yakeping capsule were inspected in pH1.2 solution（c

4、ontaining 0.5% twelve sodium dodecyl sulfate）,pH4.0 acetate buffer（containing 0.5% twelve sodium dodecyl sulfate）, pH6.8 phosphate buffer（containing 0.25% twelve sodium dodecyl sulfate）and water（containing 0.25% twelve sodium dodecyl sulfate）by HPLC.Results: The assay displayed a good linearity over

5、 the concentration range of 10 to 30 gml-1 for atenolol and nifedipine；the recovery of two components in different dissolution medium are all above 99%；the dissolution of different batches of yakeping capsule in 4 different dissolution media had the similar nature.Conclusion:The method is simple, ac

6、curate and reproducible for the dissolution determination of atenolol and nifedipine in yakeping capsule.Key words:yakeping capsule;dissolution;small glassmethod;RP- HPLC藥物溶出度檢查是評價制劑質量和工藝水平的一種有效手段,可以在一定程度上反映主藥的晶型、粒度、處方組成、輔料品種和性質以及生產工藝等的差異,也是評價制劑活性成分生物利用度和制劑均勻度的一種有效手段,在某種程度上能預示和區分同一種藥物生物利用度的差異,因此藥物溶出

7、度是藥品質量控制必須檢查的項目之一。壓可平膠囊是湖南省湘潭市城正街衛生院自制的一種中西結合降壓制劑（2004湘食藥制批010號），由三味藥物成分組成：丹參、阿替洛爾和硝苯地平，其中，丹參在處方中含量較大，而兩種西藥成分阿替洛爾和硝苯地平的規格較小，僅為4 mg/粒。兩種含量低的西藥成分（與高含量的中藥成分共存于膠囊中時）在人體內是否能有效溶出？目前，質量標準中對于該制劑還只限于測定崩解時限,該檢驗項目僅能反映藥物是否崩解, 而不能反映出藥物的生物利用度。本實驗參考日本“藥品品質再評價”工程在溶出度研究中所擬定的模擬人體消化道內體液的4種基本介質及相關文獻13，并根據壓可平膠囊處方成分的理化性質

8、對溶出介質進行適當調整，建立了適宜的溶出系統, 并采用高效液相色譜法測定壓可平膠囊中兩種西藥成分阿替洛爾和硝苯地平的體外溶出度, 為評價和控制壓可平膠囊的質量提供了依據。1 儀器與試藥1.1儀器 LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）；SPD-20AVP紫外檢測器；威瑪龍色譜工作站；Luna C18柱（4.6250 mm，5m）；ZRS-8G智能溶出儀（天津天大天發科技有限公司）；AUD-220型電子天平（日本島津公司）。1.2試藥 阿替洛爾對照品（中國食品藥品檢定研究院,純度：100%，批號：100117-200504）；硝苯地平對照品（中國食品藥品檢定研究院,純度：100%，批號：10

9、0338-200502）；壓可平膠囊（湖南省湘潭市城正街衛生院，批號：131005，140101，140307）；其他試劑均為國產分析純，水為超純水。2 方法與結果2.1 溶出試驗條件的選擇2.1.1 溶出度方法的選擇 在本品處方中, 阿替洛爾和硝苯地平含量較低, 在進行溶出度測定時考慮到含量測定方法的線性范圍和檢測靈敏度的要求, 故采用小杯法4，溶出介質體積為200 ml。溶出介質的配制1 水：純凈水；pH1.2的人工胃液：取氯化鈉2.0 g,加水適量溶解后,加鹽酸7 ml,再加水稀釋至1000 ml,混勻,即得;pH4.0醋酸鹽緩沖液:將0.05 molL-1醋酸溶液與0.05 molL-

10、1醋酸鈉溶液按16.4:3.6的比例混合，即得；pH 6.8磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀1.7 g和無水磷酸氫二鈉1.775 g,加水溶解并定容至1000 ml,即得。由于該制劑中的硝苯地平為親水性極差的化合物，所以本實驗選擇采用十二烷基硫酸鈉為表面活性劑，分別采用含有1 %，0.5 %，0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液5的四種介質（pH1.2, pH 4.0, pH6.8,水）200 ml為溶出介質進行實驗（由于阿替洛爾的水溶性較好，表面活性劑對其溶解影響不大，因此沒有考察表面活性劑對阿替洛爾溶出曲線的影響），不同添加量十二烷基硫酸鈉對硝苯地平溶出行為的影響結果見圖14。圖1 pH 1.2介質中

11、分別添加0.25 %， 圖2 pH 4.0介質中分別添加0.25 %，0.5 %，1 %十二烷基硫酸鈉的溶出曲線 0. 5%，1 %十二烷基硫酸鈉的溶出曲線Fig 1 Dissolution curve of pH 1.2 medium Fig 2 Dissolution curve of pH 4.0 mediumwere added twelve sodium dodecyl sulfate were added twelve sodium dodecyl sulfate0.25 %，0.5 %，1 % 0.25 %，0.5 %，1 %圖3 pH 6.8介質中分別添加0.25 %， 圖4

12、水介質中分別添加0.25 %，0.5 %，1 %十二烷基硫酸鈉的溶出曲線 0.5 %，1 %十二烷基硫酸鈉的溶出曲線Fig 3 Dissolution curve of pH 6.8 medium Fig 4 Dissolution curve of water mediumwere added twelve sodium dodecyl sulfate were added twelve sodium dodecyl sulfate0.25 %，0.5 %，1 % 0.25 %，0.5 %，1 %由圖1可知，在pH 1.2介質中十二烷基硫酸鈉的濃度對硝苯地平的釋放有一定的影響，當十二烷基硫酸

13、鈉的濃度由0.25 %增加到0.5 %時，硝苯地平的溶出量明顯增加，但當十二烷基硫酸鈉的濃度由0. 5 %增加到1 %時，硝苯地平的溶出量沒有明顯變化，按國家藥典委員會對國家藥品標準中溶出度及釋放度應用指導原則的修改建議指南和考察結果，當溶出介質為pH 1.2時，十二烷基硫酸鈉的添加量為0.5 %；由圖2可以看出，與在pH 1.0介質中的情況類似，在pH 4.0介質中，添加0.5 %十二烷基硫酸鈉介質的溶出曲線與添加1 %十二烷基硫酸鈉介質的溶出曲線很相似，硝苯地平在此兩種溶出介質中的釋放量明顯高于在添加量為0.25 %十二烷基硫酸鈉介質中的釋放量，同樣，當溶出介質為pH 4.0時，我們選擇0

14、.5 %為十二烷基硫酸鈉的最終添加量；由圖3可知，在pH 6.8介質中，添加了不同濃度十二烷基硫酸鈉的溶出曲線基本重合，可見，硝苯地平在三種不同濃度十二烷基硫酸鈉的溶出介質中的釋放行為十分類似，故選擇最低濃度0.25 %作為十二烷基硫酸鈉的最終添加量；從圖4可以看出，在水介質中十二烷基硫酸鈉的濃度對硝苯地平的釋放量非常敏感，我們選擇了最低濃度0.25 %作為最終的添加量。 轉速的選擇 根據國家藥品標準工作手冊中對溶出度的檢查與指導原則6,槳法以50 rmin-1 為主，其最能體現人體正常腸胃蠕動狀態，故選用50 rmin-1作為測定轉速。經過上述實驗篩選，確定最終的溶出試驗條件：溶出方式統一選

15、擇小杯法，轉速為50 rmin-1，溶出介質量200 ml；溶出介質中表面活性劑十二烷基硫酸鈉的添加量分別為：pH 1.2（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液）, pH 4.0（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液）, pH 6.8（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液）,水（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液）。2.2 溶出度測定方法的建立色譜條件 流動相：甲醇-水-磷酸（70：40：0.11），流速為1.0 ml.min-1，檢測波長為237 nm，進樣體積為10l。在此色譜條件下測定對照品、壓可平膠囊樣品及陰性樣品, 色譜圖見圖5, 待測指標成分與其他成分分離度良好。0.05.010.015.0min0

16、25mAU4123A0.05.010.015.0min025mAU4123BC圖 5 對照品（A）、樣品（B）和陰性樣品（C）的高效液相色譜圖Fig 5 Chromatograms of reference substances( A) , sample( B) and negative sample(C)1、2 陰性樣品（negative sample） 3、阿替洛爾（atenolol） 4、硝苯地平（nifedipine） 線性實驗分別精密稱取阿替洛爾、硝苯地平對照品各約20mg，置100ml量瓶中，用以上四種溶出介質溶解并稀釋至刻度，即得對照品儲備液，精密量取對照品儲備液適量，用溶出介質

17、稀釋制成濃度為10,15,20,25,30 gml-1的溶液，精密量取上述溶液各10 ul,分別進樣分析。記錄色譜圖，以阿替洛爾、硝苯地平的濃度（C）為橫坐標，以相應的峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸，阿替洛爾、硝苯地平在1030 gml-1的濃度范圍內線性關系均良好，結果見表1。表1 標準曲線試驗結果Table 1 results of standard curve介質（medium）成分(ingredients)標準曲線(linear equation)相關系數(correlation)pH 1.2pH 4.0pH6.8水（water）阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedip

18、ine）阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedipine）阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedipine）阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedipine）A=395218C3175.3A=513257C2831.7A=402117C3327.8A=495572C3585.4A=415892C4781.5A=524681C3317.2A=423416C5713.1A=534921C2781.50.99960.99980.99970.99990.99950.99980.99960.9999 回收率試驗 精密稱取阿替洛爾對照品與硝苯地平對照品適量，分別用以上四種溶出

19、介質溶解制成20 gml-1的對照品溶液，另取相當于1/2粒的陰性樣本量（包括囊殼），置100 ml量瓶中，分別加以上四種溶出介質振搖溶解并稀釋至刻度，配制相當于標示量80 %(16 gml-1)，100 %( 20 gml-1)，120 %( 24 gml-1)的溶液，每個濃度各三份，搖勻，用0.45 um的微孔濾膜濾過，精密量取各續濾液10 ul進樣分析，計算分別為按外標法以峰面積計算阿替洛爾、硝苯地平的平均回收率，結果表明，各溶出介質中回收率試驗結果均良好，見表2。表2 壓可平膠囊在不同溶出介質中回收率試驗結果Table 2 results of recovery test in 4 m

20、ediums for yakeping capsule介質（medium）成分(ingredients)平均回收率（%）（average recovery）RSD(%)(n=9)16 gml-1 20 gml-1 24 gml-1pH 1.2pH 4.0pH 6.8水(water)阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedipine）阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedipine）阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedipine）阿替洛爾（atenolol）硝苯地平（nifedipine）99.52% 99.73% 99.67%99.72% 99.45% 99.38

21、%99.29% 99.65% 99.72%99.57% 99.62% 99.36%99.43% 99.55% 99.61%99.59% 99.32% 99.63%99.58% 99.69% 99.35%99.68% 99.39% 99.77%0.730.650.470.510.670.720.630.59 精密度試驗 量取用以上四種溶出介質稀釋制成的20 gml-1的阿替洛爾、硝苯地平對照品溶液分別連續進樣6次，每次10l,記錄色譜圖，計算各組峰面積的RSD,阿替洛爾和硝苯地平在四種介質（pH 1.2, pH 4.0, pH 6.8,水）中的峰面積RSD分別為0. 3 %和0.5 % , 0.

22、 5 %和0.7 % , 0. 9 %和0.8 %, 0. 7 %和0.9 %, 表明本方法精密度良好。 穩定性試驗 取回收率試驗中濃度為20 gml-1的阿替洛爾、硝苯地平對照品溶液，室溫放置，分別在0, 2, 4, 6, 8, 24 h進樣10 l,記錄色譜峰面積，阿替洛爾、硝苯地平在四種介質（pH 1.2, pH 4.0, pH 6.8,水）中的峰面積RSD分別為1. 2 %和1.0 % , 1. 3 %和1.1 % , 1. 2 %和1.5 %, 1. 1 %和1.3 %,表明阿替洛爾與硝苯地平在各溶出介質中24 h內基本穩定。 濾膜的干擾試驗 取阿替洛爾、硝苯地平對照品溶液，考察經濾

23、膜（0.45 m）過濾前后的峰面積變化情況，結果表明濾膜沒有干擾。2.2.7 陰性干擾試驗取按壓可平膠囊工藝方法制備缺阿替洛爾、硝苯地平的壓可平膠囊1粒（含膠囊殼），分別加以上四種溶出介質200 ml，在37 水浴中超聲（200 w,45 kHz）10 min，放冷，用0.45 m的微孔濾膜濾過，取續濾液10 l進樣分析，記錄色譜圖，結果表明，各溶出介質條件下陰性樣本均不干擾本品溶出度的測定。 溶出度試驗 取本品，照溶出度測定法中國藥典2010年版二部附錄XC第三法4，分別以pH 1.2的人工胃液（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液）、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液）、p

24、H 6.8磷酸鹽緩沖液（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液）及水（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液）200 ml為溶出介質，轉速為50 rmin- 1，依法操作，于第5，10，15，30，45，60 min分別取樣5 ml（并及時補充相應介質5 ml），用0.45 m微孔濾膜濾過，按“”項下色譜條件測定阿替洛爾、硝苯地平的溶出量，分別繪制溶出曲線。2.2.9 溶出曲線的均一性 取壓可平膠囊樣品6粒, 照溶出度試驗方法,每個溶出杯中加入1 粒膠囊進行試驗, 考察溶出均一性。計算累計阿替洛爾、硝苯地平溶出量與時間的溶出曲線,結果在四種溶出介質中，6粒膠囊樣本中的兩種西藥成分溶出度RSD均小于2 ，表

25、明樣品溶出度的均一性良好，見圖6、7。A B C D圖6 壓可平膠囊中阿替洛爾的溶出曲線Fig 6 The dissolution curves of atenolol in yakeping capsuleA. pH 1.2（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate） B. pH 4.0（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate）C. pH 6.8（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.25 % twel

26、ve sodium dodecyl sulfate） D. 水（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate） A B C D圖7 壓可平膠囊中硝苯地平的溶出曲線Fig 7 The dissolution curves of nifedipine in yakeping capsuleA. pH 1.2（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate） B. pH 4.0（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.5

27、% twelve sodium dodecyl sulfate）C. pH 6.8（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate） D. 水（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液(containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate）2.2.10 樣品溶出度檢測 取3批樣品進行溶出度試驗（批號：131005，140101，140307），兩種成分在四種不同的溶出介質中的累計溶出數據（平均值）見表25。表 2 樣品的溶出度測定結果（介質：pH 1.2（含0.5 %十二烷基硫酸

28、鈉溶液），n=3）Table 2 results of dissolution determination(medium :pH 1.2 (containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate), n=3)批號(Lot No.)阿替洛爾溶出度（%）(dissolution result of atenolol) (%)硝苯地平溶出度（%）(dissolution result of nifedipine) (%)13100514010114030781.2%0.379.5%0.580.9%0.776.5%0.477.2%0.376.9%0.6表 3 樣品

29、的溶出度測定結果（介質：pH 4.0（含0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液），n=3）Table 3 results of dissolution determination(medium :pH 4.0 (containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate), n=3)批號(Lot No.)阿替洛爾溶出度（%）(dissolution result of atenolol) (%)硝苯地平溶出度（%）(dissolution result of nifedipine) (%)13100514010114030782.1%0.580.6%0.381.7%0.

30、680.1%0.381.5%0.482.4%0.7表 4 樣品的溶出度測定結果（介質：pH 6.8（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液），n=3）Table 4 results of dissolution determination(medium :pH 6.8 (containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate), n=3)批號(Lot No.)阿替洛爾溶出度（%）(dissolution result of atenolol) (%)硝苯地平溶出度（%）(dissolution result of nifedipine) (%)13100514010114030781.6%0.380.5%0.782.3%0.580.7%0.481.9%0.682.1%0.4表 5 樣品的溶出度測定結果（介質：水（含0.25 %十二烷基硫酸鈉溶液），n=3）Table 5 results of dissolution determination(medium :water (containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate), n=3)批號(Lot No.)阿替洛爾溶出度（%