1、針灸血清”對乳腺癌MCF               作者：李巖 郭剛 李彬 史秀芳  【摘要】目的：觀察針灸對乳腺癌細胞凋亡及細胞周期的影響。方法：針灸刺激雌性Wistar大鼠雙側足三里、三陰交、內關穴，抽取大鼠“針灸血清”分別與MCF7細胞混合培養，分為電針組、艾灸組和對照組。MTT法檢測細胞生長情況，72h后流式細胞技術檢測細胞凋亡率及Fas表達率。結果：MCF7細胞Fas表達率明顯增高，72h達57.70%；MCF7細胞生長受到明顯抑制，12h、2

2、4h、72h抑制率分別達17.55%、24.71%和31.85%；作用72h后的細胞凋亡率分別為1.07%、8.72%、10.18%,與艾灸組相近，均明顯高于對照組（P0.05）。結論：“針灸血清”作用于MCF7細胞可能通過增加Fas的表達率來誘導細胞凋亡。   【關鍵詞】針刺灸法乳腺腫瘤細胞凋亡細胞周期   The effect of acupunctural and moxibustional therapy on the apoptosis of breast cell MCF7   【ABSTRACT】Objective:To

3、 observe the effect on the apoptosis of breast cancer cell MCF7 with acupunctural and moxibustional therapy.Methods:Zusanli and Sanyinjiao neiguan in both sides of female Wistar mice were acupunctured and moxibusted.MCF7 cell was cultirated with the serum.To detecte the cytoxicity with MTT,and detec

4、te the apoptosic rate and Fas expression rate with flow cytometry after 72 hours.Results:The Fas expression was obviously increased upto 57.70% after 72h.The proliferation of MCF7 was inhibited remarkably.The inhibition rate were 17.55%,24.71% and 31.85% after 12h,24h and 72h.The apoptosic rate were

5、 8.72% and 10.18% after 72h,remarkably higher than the control group(P0.05).Conclusion:Acupunctural and moxibustional serum could increase Fas expression rate to inhibit proliferation of MCF7 cell and induce its apoptosis.   【KEY WORDS】AcupunctureMoxibustionBreast NeoplasmsApoptosisCell cy

6、cle   乳腺癌在我國的發病率不斷增高，尋找有效的治療方法具有深遠的意義1。針灸在一定程度上能抑制腫瘤的生長，對惡性腫瘤具有一定的治療作用，可緩解臨床癥狀，減輕放、化療后的副反應，改善機體免疫功能，提高患者的生活質量。針灸腧穴而采集的“針灸血清”是近年來針灸研究中提出的一種新的研究思路和方法。本文通過應用針灸血清培養乳腺癌細胞MCF7，觀察針灸對乳腺癌細胞凋亡情況及細胞周期的影響，為尋找針灸治療乳腺癌的途徑和方案以及為探討針灸抑瘤機制提供線索。   1  材料與方法   1.1  材料  乳腺癌細胞株M

7、CF7由山東中醫藥大學細胞室提供。雌性Wistar大鼠30只，體重250g左右，由山東大學醫學院動物實驗室提供。RPMI1640購自美國GIBCO公司，新生小牛血清購自杭州四季青生物工程材料研究所，二甲基亞砜分析純購自北京亞太精細化工公司，MTT購自SIGMA公司，Fas、異硫氫酸熒光素（FITC）標記的單克隆抗體IgG1及免疫陰性對照品IgG1FITC均為美國Pharmingen公司產品，由北京岳泰生物公司提供。FACScan型流式細胞儀為美國BD公司產品。   1.2  方法       &

8、#160;     2  結  果   2.1  針灸對細胞抑制率的影響  見表1。由表1可見，針灸大鼠血清對乳腺癌MCF7細胞的抑制率呈時間依賴性，電針組和艾灸組均能明顯抑制MCF7細胞增殖（P0.05），但電針組的抑制率高于艾灸組（P0.05）。表1  3組血清在不同時間段對MCF7細胞的抑制率（略）2.2  針灸對細胞凋亡和細胞周期變化的影響  見圖13，表2。各血清作用72h后，直方圖中均可見G0/G1期峰前的亞二倍體峰即凋亡峰，代表凋亡細胞群，以峰值高低代表凋亡細胞

9、的比例。圖1、2、3顯示對照組、艾灸組和電針組的凋亡率分別為1.07%、8.72%、10.18%。由表2可以看出，各血清作用72h后，S期和G2/M期細胞數均明顯減少（P0.05），對照組、艾灸組和電針組的凋亡率分別為1.07%、8.72%、10.18(P0.05)。針刺和艾灸都能抑制MCF7細胞增殖，且兩者差異沒有統計學意義（P0.05）。由表3可以看出，電針組和艾灸組大鼠血清對Fas的表達率明顯高于對照組（P0.05），但電針組與艾灸組對Fas表達率的影響差異無統計學意義（P0.05）。表2  3組MCF7細胞血清作用72h后細胞周期變化（略）表3  3組血清作用72h

10、后MCF7細胞Fas表達3  討  論   誘導腫瘤細胞凋亡是治療腫瘤的一種新的思路，而且治療腫瘤的有效性主要表現在腫瘤細胞生長抑制和/或誘導凋亡2，3。本實驗表明“針灸血清”能抑制乳腺癌MCF7細胞生長。“針灸血清”是近年來針灸研究中提出的一種新的研究方法，是指從針灸處理后的人或動物體上采集到的血清，作為效應物質加入到另一個反應系統中，同在體或離體器官組織、細胞或分子靶目標接觸，通過它們的功能或形態學的改變，直接地觀察針灸處理后的效應4，5。“針灸血清”研究方法可歸納為離體實驗和在體實驗兩大類。本實驗針灸大鼠血清離體作用于人的腫瘤細胞株，結果發現，針灸

11、刺激Wistar大鼠雙側足三里、三陰交、內關穴后的大鼠“針灸血清”能使MCF7細胞抑制率升高，說明可以抑制體外腫瘤細胞生長。與正常對照組比較，MCF7細胞S期和G2M期百分率均明顯降低，說明針灸血清能影響乳腺癌MCF7細胞增殖，抑制其生長。細胞凋亡在腫瘤發生、發展、轉化和治療過程中具有重要意義，許多抗腫瘤藥物是通過誘導細胞凋亡而發揮作用的。本實驗研究顯示，針灸刺激大鼠雙側足三里、三陰交、內關穴，此大鼠“針灸血清”能誘導乳腺癌MCF7細胞凋亡。其機制可能是針灸腧穴后，通過某種內在的生理調節機制，引起血清中Fas的表達率增高，從而誘導乳腺癌MCF7細胞凋亡，發揮抑制腫瘤的作用。針灸療法能促使經絡暢

12、通，氣血調和，改善機體免疫功能，可產生不同程度的類藥性作用。從這個角度講，似可把針灸穴位比喻為“藥物”，不具備藥的外在形態卻具有藥的某種作用實質，這是針灸療法最本質的特征之一。“針灸血清”可直接觀察其功能或實驗物形態學的改變，有利于拓寬針灸研究的領域，推動針灸作用及其機理研究，尋求一條治療惡性腫瘤的獨特道路。   參  考  文  獻   1唐漢鈞.乳腺癌的中醫臨床與實驗研究J.中醫藥學刊，2003，21（2）：168172.   2Elsmer E Williamson EA Zangand C,et al.Novel the rapeutic approach ligands for PPARa and retinoid receptors induce apoptosos in bcl2 positive human breast cancer cellsJ.Breast Cancer Res Treat,200