1、本電子版內(nèi)容如與中國環(huán)境出版社出版的標(biāo)準(zhǔn)文本有出入，以中國環(huán)境出版社出版的文本為準(zhǔn)。中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)GB 18466-2005醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn) Discharge standard of water pollutants for medical organization200507 27發(fā)布 20060101 實施國家環(huán)境保護(hù)總局國 家 質(zhì) 量 監(jiān) 督 檢 驗 檢 疫 總 局發(fā)布目錄前 言 .II 1 范圍 .1 2 規(guī)范性引用文件 .1 3 術(shù)語和定義 .1 4 技術(shù)內(nèi)容 .1 4.1 污水排放要求 .1 4.2 廢氣排放要求 .4 4.3 污泥控制與處置

2、.45 處理工藝與消毒要求 .4 6 取樣與監(jiān)測 .5 6.1 污水取樣與監(jiān)測 .56.2 大氣取樣與監(jiān)測 .76.3 污泥取樣與監(jiān)測 .77 標(biāo)準(zhǔn)的實施與監(jiān)督 .7 附錄 A .8附錄 B .15附錄 C .19附錄 D .21附錄 E.23附錄 F.25I前言為貫徹中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國水污染防治法、中華人民共和國海洋環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國大氣污染防治法、中華人民共和國傳染病防治法，加強(qiáng)對醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水、污水處理站廢氣、污泥排放的控制和管理，預(yù)防和控制傳染病的發(fā)生和流行，保障人體健康，維護(hù)良好的生態(tài)環(huán)境，制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水及污水處理站產(chǎn)生的廢氣和污泥的

3、污染物控制項目及其排放限值、處理工藝與消毒要求、取樣與監(jiān)測和標(biāo)準(zhǔn)的實施與監(jiān)督等。本標(biāo)準(zhǔn)自實施之日起，代替GB8978-1996污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)部分，并取代 GB18466-2001醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放要求。新、擴(kuò)、改醫(yī)療機(jī)構(gòu)自本標(biāo)準(zhǔn)實施之日起按本標(biāo)準(zhǔn)實施管理，現(xiàn)有醫(yī)療機(jī)構(gòu)在 2007 年 12 月 31 日前達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)要求。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A、附錄 B、附錄 C、附錄 D、附錄 E 和附錄 F 為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由國家環(huán)境保護(hù)總局科技標(biāo)準(zhǔn)司提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)委托北京市環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院和中國疾病預(yù)防控制中心起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國家環(huán)境保護(hù)總局 2005 年

4、 07 月 27 日批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由國家環(huán)境保護(hù)總局負(fù)責(zé)解釋。II1 范圍醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水、污水處理站產(chǎn)生的廢氣、污泥的污染物控制項目及其排放和控制限值、處理工藝和消毒要求、取樣與監(jiān)測和標(biāo)準(zhǔn)的實施與監(jiān)督。本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水、污水處理站產(chǎn)生污泥及廢氣排放的控制，醫(yī)療機(jī)構(gòu)建設(shè)項目的環(huán)境影響評價、環(huán)境保護(hù)設(shè)施設(shè)計、竣工驗收及驗收后的排放管理。當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的辦公區(qū)、非醫(yī)療生活區(qū)等污水與病區(qū)污水合流收集時，其綜合污水排放均執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)。建有分流污水收集系統(tǒng)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，其非病區(qū)生活區(qū)污水排放執(zhí)行 GB8978 的相關(guān)規(guī)定。2 規(guī)范性引用文件下列標(biāo)準(zhǔn)和本標(biāo)準(zhǔn)表 5、表 6 所

5、列分析方法標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范所含條文在本標(biāo)準(zhǔn)中被引用即構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文，與本標(biāo)準(zhǔn)同效。當(dāng)上述標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范被修訂時，應(yīng)使用其最新版本。GB8978 污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)GB3838 地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB3097 海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB16297大氣污染物綜合排放標(biāo)準(zhǔn)HJ/T55大氣污染物無組織排放監(jiān)測技術(shù)導(dǎo)則HJ/T91地表水和污水檢測技術(shù)規(guī)范3 術(shù)語和定義本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義。3.1 醫(yī)療機(jī)構(gòu) medical organization指從事疾病診斷、治療活動的醫(yī)院、衛(wèi)生院、療養(yǎng)院、門診部、診所、衛(wèi)生急救站等。3.2 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水medical organization wastewater指醫(yī)療機(jī)構(gòu)門診、病房、

6、手術(shù)室、各類檢驗室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出的診療、生活及糞便污水。當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)其他污水與上述污水混合排出時一律視為醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水。3.3 污泥sludge指醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水處理過程中產(chǎn)生的柵渣、沉淀污泥和化糞池污泥。3.4 廢氣 waste gas指醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水處理過程中產(chǎn)生的有害氣體。4 技術(shù)內(nèi)容4.1 污水排放要求 傳染病和結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放執(zhí)行表 1 的規(guī)定。 縣級及縣級以上或 20 張床位及以上的綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)和其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放執(zhí)行表 21的規(guī)定。直接或間接排入地表水體和海域的污水執(zhí)行排放標(biāo)準(zhǔn)，排入終端已建有正常運(yùn)行城鎮(zhèn)二級污水處理廠的下水道的污水，執(zhí)行預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)。

7、縣級以下或 20 張床位以下的綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)和其他所有醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水經(jīng)消毒處理后方可排放。 禁止向 GB3838I、II 類水域和 III 類水域的飲用水保護(hù)區(qū)和游泳區(qū)，GB3097 一、二類海域直接排放醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水。帶傳染病房的綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)，應(yīng)將傳染病房污水與非傳染病房污水分開。傳染病房的污水、糞便經(jīng)過消毒后方可與其他污水合并處理。采用含氯消毒劑進(jìn)行消毒的醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水，若直接排入地表水體和海域，應(yīng)進(jìn)行脫氯處理，使總余氯小于 0.5mg/L。表 1傳染病、結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放限值（日均值）序號12345 PH67891011121314151617181920控制項目糞大腸菌群數(shù)（MPN/L

8、）腸道致病菌腸道病毒結(jié)核桿菌化學(xué)需氧量（COD）濃度（mg/L）最高允許排放負(fù)荷（g/床位）生化需氧量（BOD）濃度（mg/L）最高允許排放負(fù)荷（g/床位）懸浮物（SS）濃度（mg/L）最高允許排放負(fù)荷（g/床位）氨氮（mg/L）15動植物油（mg/L）5石油類（mg/L）5陰離子表面活性劑（mg/L）色度（稀釋倍數(shù)）30揮發(fā)酚（mg/L）0.5總氰化物（mg/L）總汞（mg/L）0.05總鎘（mg/L）0.1總鉻（mg/L）1.5六價鉻（mg/L）0.5總砷（mg/L）0.5標(biāo)準(zhǔn)值不得檢出不得檢出不得檢出6-96060 202020200.5210052122232425總鉛（mg/L）1.

9、0總銀（mg/L）0.5總(Bq/L) 1總(Bq/L) 10總余氯1）2（mg/L）（直接排入水體的要求）0.5注：1）采用含氯消毒劑消毒的工藝控制要求為：消毒接觸池的接觸時間1.5h，接觸池出口總余氯 6.5-10 mg/L。 2）采用其他消毒劑對總余氯不作要求。表 2綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)和其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放限值（日均值）序號1234 pH567891011控制項目糞大腸菌群數(shù)（MPN/L）腸道致病菌腸道病毒化學(xué)需氧量（COD）濃度（mg/L）最高允許排放負(fù)荷（g/床位）生化需氧量（BOD）濃度（mg/L）最高允許排放負(fù)荷（g/床位）懸浮物（SS）濃度（mg/L）最高允許排放負(fù)荷（g/床位）

10、氨氮（mg/L）動植物油（mg/L）石油類（mg/L）陰離子表面活性劑（mg/L）排放標(biāo)準(zhǔn)不得檢出不得檢出6-9606020202020預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)5006-92502501001006060-20205155-5 1012色度（稀釋倍數(shù)）-3013揮發(fā)酚（mg/L）1.00.514總氰化物（mg/L）0.50.515161718總汞（mg/L）總鎘（mg/L）總鉻（mg/L）六價鉻（mg/L）0.050.11.50.50.050.11.50.53192021222324總砷（mg/L）總鉛（mg/L）總銀（mg/L）總(Bq/L) 1總(Bq/L) 10總余氯1）2）（mg/L）0.51.00

11、.5110-0.50.51.00.5注：1）采用含氯消毒劑消毒的工藝控制要求為：一級標(biāo)準(zhǔn)：消毒接觸池接觸時間1h，接觸池出口總余氯 3-10 mg/L。二級標(biāo)準(zhǔn)：消毒接觸池接觸時間1h，接觸池出口總余氯 2-8 mg/L。 2）采用其他消毒劑對總余氯不作要求。4.2 廢氣排放要求污水處理站排出的廢氣應(yīng)進(jìn)行除臭除味處理，保證污水處理站周邊空氣中污染物達(dá)到表 3 要求。 傳染病和結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)對污水處理站排出的廢氣進(jìn)行消毒處理。表 3污水處理站周邊大氣污染物最高允許濃度序號12345控制項目氨（mg/m3）1.0硫化氫（mg/m3）0.03臭氣濃度（無量綱）10氯氣（mg/m3）0.1甲烷（指處

12、理站內(nèi)最高體積百分?jǐn)?shù) %）標(biāo)準(zhǔn)值1%4.3 污泥控制與處置 柵渣、化糞池和污水處理站污泥屬危險廢物，應(yīng)按危險廢物進(jìn)行處理和處置。 污泥清淘前應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測，達(dá)到表 4 要求。表 4醫(yī)療機(jī)構(gòu)污泥控制標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)類別糞大腸菌群數(shù)(MPN/g)腸道致病菌腸道病毒結(jié)核桿菌蛔蟲卵死亡率（%）傳染病醫(yī)療機(jī)構(gòu)結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)綜 合 醫(yī) 療 機(jī) 構(gòu) 和其它醫(yī)療機(jī)構(gòu)5 處理工藝與消毒要求100100100不得檢出-不得檢出-不得檢出->95>95>955.1 醫(yī)療機(jī)構(gòu)病區(qū)和非病區(qū)的污水，傳染病區(qū)和非傳染病區(qū)的污水應(yīng)分流，不得將固體傳染性廢物、各種化學(xué)廢液棄置和傾倒排入下水道。45.2 傳染病醫(yī)療機(jī)構(gòu)

13、和綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)的傳染病房應(yīng)設(shè)專用化糞池，收集經(jīng)消毒處理后的糞便排泄物等傳染性廢物。5.3 化糞池應(yīng)按最高日排水量設(shè)計，停留時間為 24-36h。清掏周期為 180-360d。5.4 醫(yī)療機(jī)構(gòu)的各種特殊排水應(yīng)單獨(dú)收集并進(jìn)行處理后，再排入醫(yī)院污水處理系統(tǒng)。 低放射性廢水應(yīng)經(jīng)衰變池處理。 洗相室廢液應(yīng)回收銀，并對廢液進(jìn)行處理。 口腔科含汞廢水應(yīng)進(jìn)行除汞處理。 檢驗室廢水應(yīng)根據(jù)使用化學(xué)品的性質(zhì)單獨(dú)收集，單獨(dú)處理。 含油廢水應(yīng)設(shè)置隔油池處理。5.5 傳染病醫(yī)療機(jī)構(gòu)和結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水處理宜采用二級處理+消毒工藝或深度處理+消毒工藝。5.6 綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放執(zhí)行排放標(biāo)準(zhǔn)時，宜采用二級處理+消毒工藝或深

14、度處理+消毒工藝；執(zhí)行預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)時宜采用一級處理或一級強(qiáng)化處理+消毒工藝。5.7 消毒劑應(yīng)根據(jù)技術(shù)經(jīng)濟(jì)分析選用，通常使用的有：二氧化氯、次氯酸鈉、液氯、紫外線和臭氧等。采用含氯消毒劑時按表 1、表 2 要求設(shè)計。 采用紫外線消毒，污水懸浮物濃度應(yīng)小于 10 mg/L，照射劑量 30-40mJ/cm2,照射接觸時間應(yīng)大于 10s 或由試驗確定。 采用臭氧消毒，污水懸浮物濃度應(yīng)小于 20 mg/L，臭氧用量應(yīng)大于 10mg/L,接觸時間應(yīng)大于 12min 或由試驗確定。6 取樣與監(jiān)測6.1 污水取樣與監(jiān)測 應(yīng)按規(guī)定設(shè)置科室處理設(shè)施排出口和單位污水外排口，并設(shè)置排放口標(biāo)志。 表 1 第 16-22

15、項，表 2 第 15-21 項在科室處理設(shè)施排出口取樣，總、總在衰變池出口取樣監(jiān)測。其它污染物的采樣點(diǎn)一律設(shè)在排污單位的外排口。 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水外排口處應(yīng)設(shè)污水計量裝置，并宜設(shè)污水比例采樣器和在線監(jiān)測設(shè)備。監(jiān)測頻率 糞大腸菌群數(shù)每月監(jiān)測不得少于 1 次。采用含氯消毒劑消毒時，接觸池出口總余氯每日監(jiān)測不得少于 2 次（采用間歇式消毒處理的，每次排放前監(jiān)測）。 腸道致病菌主要監(jiān)測沙門氏菌、志賀氏菌。沙門氏菌的監(jiān)測，每季度不少于 1 次；志賀氏菌的監(jiān)測，每年不少于 2 次。其他致病菌和腸道病毒按 6.1.3.3 規(guī)定進(jìn)行監(jiān)測。結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)根據(jù)需要監(jiān)測結(jié)核桿菌。 收治了傳染病病人的醫(yī)院應(yīng)加強(qiáng)對腸道致病

16、菌和腸道病毒的監(jiān)測。同時收治的感染上同一種腸道致病菌或腸道病毒的甲類傳染病病人數(shù)超過 5 人、或乙類傳染病病人數(shù)超過 10人、或丙類傳染病病人數(shù)超過 20 人時，應(yīng)及時監(jiān)測該種傳染病病原體。 理化指標(biāo)監(jiān)測頻率：pH每日監(jiān)測不少于 2 次，COD 和 SS 每周監(jiān)測 1 次，其他污染物每季度監(jiān)測不少于 1 次。5采樣頻率：每 4 小時采樣 1 次，一日至少采樣 3 次，測定結(jié)果以日均值計。 監(jiān)督性監(jiān)測按 HJ/T91 執(zhí)行。 監(jiān)測分析方法按表 5 和附錄。 污染物單位排放負(fù)荷計算見附錄 F。表 5水污染物監(jiān)測分析方法序號123456789控制項目糞大腸菌群數(shù)沙門氏菌志賀氏菌結(jié)核桿菌總余氯化學(xué)需氧

17、量(COD)生化需氧量(BOD)懸浮物(SS)氨氮測定方法多管發(fā)酵法N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法重鉻酸鹽法稀釋與接種法重量法蒸餾和滴定法測定下限（mg/L）方法來源附錄 A附錄 B附錄 C附錄 EGB11898GB11897GB11914 30GB74882GB119010.2GB7478GB74791011 動植物油石油類比色法紅外光度法紅外光度法0.05GB/T164880.1GB/T164880.112陰離子表面活性劑亞甲藍(lán)分光光度法GB74940.0513色度稀釋倍數(shù)法GB1190314 pH 值15總汞玻璃電極法冷吸收分光光度法雙硫腙分

18、光光度法0.00010.002GB6920GB7468GB746916揮發(fā)酚蒸餾后 4-氨基安替比林分光光度法硝酸銀滴定法0.002 GB74900.25GB74861718總氰化物總鎘異煙酸-吡唑啉酮比色法吡啶-巴比妥酸比色法原子吸收分光光度法（螯合萃取法）雙硫腙分光光度法0.0040.0020.0010.001GB7486GB7486GB7475GB747119202122232425總鉻六價鉻總砷總鉛總銀總總高錳酸鉀氧化二苯碳酰二肼分光光度法二苯碳酰二肼分光光度法二乙基二硫代氨基甲酸銀分光光度法原子吸收分光光度法（螯合萃取法）雙硫腙分光光度法火焰原子吸收分光光度法鎘試劑 2B 分光光度法

19、厚源法蒸發(fā)法0.004 GB74660.0040.007 GB74850.01GB74750.01GB74700.03GB119079 0.01GB11908EJ/T10750.05Bq/LEJ/T90066.2 大氣取樣與監(jiān)測 污水處理站大氣監(jiān)測點(diǎn)的布置方法與采樣方法按 GB16297 中附錄 C 和 HJ/T55 的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。 采樣頻率，每 2h 采樣一次，共采集 4 次，取其最大測定值。每季度監(jiān)測一次。 監(jiān)測分析方法按表 6。表 6大氣污染物監(jiān)測分析方法序號12345控制項目氨硫化氫臭氣濃度（無量綱）氯氣甲烷測定方法次氯酸鈉-水楊酸分光光度法氣相色譜法三點(diǎn)比較式臭袋法甲基橙分光光度法

20、氣相色譜法方法來源GB/T14679GB/T14678GB/T14675HJ/T30CJ/30376.3 污泥取樣與監(jiān)測 取樣方法，采用多點(diǎn)取樣，樣品應(yīng)有代表性，樣品重量不小于 1kg。清掏前監(jiān)測。 監(jiān)測分析方法見附錄 A、附錄 B、附錄 C、附錄 D 和附錄 E。7 標(biāo)準(zhǔn)的實施與監(jiān)督7.1 本標(biāo)準(zhǔn)由縣級以上人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門負(fù)責(zé)監(jiān)督實施。7.2 省、自治區(qū)、直轄市人民政府對執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)不能達(dá)到本地區(qū)環(huán)境功能要求時，可以根據(jù)總量控制要求和環(huán)境影響評價結(jié)果制定嚴(yán)于本標(biāo)準(zhǔn)的地方污染物排放標(biāo)準(zhǔn)。7A1 儀器和設(shè)備附錄A（規(guī)范性附錄）醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水和污泥中糞大腸菌群的檢驗方法A1.1高壓蒸汽滅菌

21、器。A1.2干燥滅菌箱。A1.3培養(yǎng)箱：37。A1.4恒溫水浴箱。A1.5電爐。A1.6天平。A1.7滅菌平皿。A1.8滅菌刻度吸管。A1.9酒精燈A2 培養(yǎng)基和試劑A2.1乳糖膽鹽培養(yǎng)液A2.1.1 成分蛋白胨 20g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽） 5g乳糖 5g0.4溴甲酚紫水溶液 2.5mL蒸餾水 1000mLA2.1.2制法將蛋白胨、豬膽鹽及乳糖溶解于 1000mL 蒸餾水中，調(diào)整 pH 到 7.4，加入指示劑，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115下滅菌 20min。貯存于冷暗處備用。A2.2三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液A2.2.1 成分蛋白胨 60g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽） 15g乳糖 15g0

22、.4溴甲酚紫水溶液 7.5mL蒸餾水 1000mLA2.2.2制法制法同附錄 。A2.3伊紅美蘭培養(yǎng)基（EMB 培養(yǎng)基）A2.3.1成分蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氫二鉀 2g 瓊脂 20g 2伊紅水溶液 20mL 0.5美藍(lán)水溶液 13mL8蒸餾水 1000mL A2.3.2制法將瓊脂加到 900mL 蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白胨，混勻使溶解，再加入蒸餾水補(bǔ)足至 1000mL，調(diào)整 pH 至 7.27.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，混勻，定量分裝于燒瓶內(nèi)，115滅菌 20min。作為儲備培養(yǎng)基貯存于冷暗處備用。臨用時，加熱融化儲備培養(yǎng)基，待冷至60左右，根據(jù)燒瓶

23、內(nèi)培養(yǎng)基的容量，加入一定量的已滅菌的 2伊紅水溶液和 0.5美藍(lán)水溶液，充分搖勻（防止產(chǎn)生氣泡）。傾注平皿備用。A2.4乳糖蛋白胨培養(yǎng)液A2.4.1 成分蛋白胨 10g牛肉膏 3g乳糖 5g氯化鈉 5g1.6溴甲酚紫乙醇溶液 1mL蒸餾水 1000mLA2.4.2制法將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于 1000mL 蒸餾水中，調(diào)整 pH 到 7.27.4，加入 1.6溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115下滅菌 20min。貯存于冷暗處備用。A2.5革蘭氏染色液A2.5.1結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫 1g95乙醇溶液 20mL1草酸銨水溶液 1000mL將結(jié)晶紫溶于乙

24、醇中，然后與草酸銨水溶液混合。A2.5.2革蘭氏碘液碘 1g碘化鉀 2g蒸餾水 300mL將碘與碘化鉀混合，加入蒸餾水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸餾水至 300mL。A2.5.3脫色液95乙醇。A2.5.4沙黃復(fù)染液沙黃 1g95乙醇 2g蒸餾水 90mL將沙黃溶于 95乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。A2.6染色法染色的基本步驟為：1）涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環(huán)取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；2）干燥：在室溫中使自然干燥；3）固定：將涂片迅速通過火焰 23 次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；4）染色：滴加結(jié)晶紫染色液，染色 1min，水洗；5）媒染：滴加

25、革蘭氏碘液，作用 1min，水洗；6）脫色：滴加 95乙醇脫色，約 30s，水洗；7）復(fù)染：滴加復(fù)染液，復(fù)染 1min，水洗。9革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。注：亦可用 1：10 稀釋的石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染劑，復(fù)染時間為 10s。A3 檢驗程序檢驗程序見圖 A.樣品處理：確定樣品接種量發(fā)酵試驗：將樣品接種于乳糖膽鹽培養(yǎng)液44、培養(yǎng)24h平板分離：將產(chǎn)酸發(fā)酵管液接種于EMB 37、培養(yǎng)1824h鑒定：挑取可疑菌落革蘭氏染色、鏡檢鑒定：挑取革蘭氏陰性無芽孢桿菌接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液44、培養(yǎng)24h計數(shù)：根據(jù)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陽性管數(shù)查MPN表檢驗結(jié)果報告圖 A污水、污泥中糞大腸菌群

26、檢驗程序A4 操作步驟A4.1樣品準(zhǔn)備A4.1.1污水污水樣品應(yīng)至少取 200mL，使用前應(yīng)充分混勻。根據(jù)預(yù)計的污水樣品中糞大腸菌群數(shù)確定污水樣品接種量。糞大腸菌群數(shù)量相對較少的接種量一般為 10mL、1mL、0.1mL。糞大腸菌群數(shù)較多時接種量為 1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。接種量少于 1mL 時，水樣應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗使用。接種量為 0.1mL、0.01mL時，取稀釋比分別為 1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。1:10 稀釋樣品的制作方法為：吸取 1mL 水樣，注入到盛有 9mL 滅菌水的試管中，混勻，制成 1:

27、10 稀釋樣品。因此，取 1mL1:10 稀釋樣品，等于取 0.1mL 污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。注 1：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用 5硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。A4.1.2污泥污泥樣品應(yīng)至少取 200g，使用前應(yīng)充分混勻。10根據(jù)預(yù)計的污泥樣品中糞大腸菌群數(shù)量確定污泥樣品接種量。糞大腸菌群數(shù)量相對較少的污泥樣品接種量一般為 0.1g、0.01g、0.001g。糞大腸菌群數(shù)量較多時接種量為 0.01g、0.001g、0.0001g 或 0.001g、0.0001g、0.00001g 等。污泥樣品應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗使用。接種量0.1g、0.01g、0.00

28、1g的稀釋樣品制作方法如下：取 20g 污泥樣品，加入到三角燒瓶中，加滅菌水使成 200mL，混勻，制成1:10 稀釋樣品。吸取 1:10 稀釋樣品 1mL，注入到盛有 9mL 滅菌水的試管中，混勻，制成 1:100稀釋樣品。按同法制成 1:1000 稀釋樣品。接種 1mL1:10、1:100、1:1000 稀釋樣品等于接種0.1g、0.01g、0.001g 污泥樣品。注 1：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污泥，應(yīng)在采樣后立即用 5硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。A4.2發(fā)酵試驗將樣品接種于裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管（內(nèi)有小倒管）中，44培養(yǎng) 24h。樣品接種體積以及管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積根據(jù)以下條件

29、確定：樣品為污水時，取三個接種量、每個接種量的樣品分別接種于 5 個試管內(nèi)，共需 15 個試管。試管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應(yīng)根據(jù)接種量確定。若接種量為 10mL，吸取 10mL樣品接種于裝有 5mL 三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量為 1mL 時，吸取 1mL 樣品接種于裝有 10mL 普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量少于 1mL 時，吸取 1mL 稀釋樣品接種于裝有 10mL 普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)。樣品為污泥時，取三個接種量、每個接種量的稀釋樣品分別接種于 3 個試管內(nèi)，共需 9個試管。9 個試管中，各裝有 10mL 乳糖膽鹽培養(yǎng)液。各個試管接種稀釋樣品體積均

30、為 1mL。A4.3平板分離大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時培養(yǎng)液變色、產(chǎn)氣時小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。經(jīng) 24h 培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸的試管內(nèi)培養(yǎng)液分別劃線接種于 EMB 培養(yǎng)基上。置于 37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 1824h。A4.4鑒定挑選可疑糞大腸菌群菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢。可疑菌落有：1）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；2）紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；3）淡紫紅色，中心色較深的菌落。上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取上述典型菌落 13 個接種于盛有 5mL 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內(nèi)，置于 44培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h。產(chǎn)酸產(chǎn)氣試管為糞大腸菌群陽性管。A5計數(shù)根據(jù)證實有糞大腸菌群存在的陽

31、性管數(shù)，查表 A1 或 A2 可得 100mL 污水或 1g 污泥中糞大腸菌群 MPN 值。由于表 A1 和表 A2 是按一定的三個 10 倍濃度差接種量設(shè)計的（污水接種量為 10mL、1mL和 0.1mL，污泥接種量為 0.1g、0.01g 和 0.001g），當(dāng)采用其他三個 10 倍濃度差接種量時，需要修正表內(nèi) MPN 值，具體方法如下：表內(nèi)所列污水（污泥）最大接種量增加 10 倍時表內(nèi) MPN 值相應(yīng)降低 10 倍；污水（污泥）最大接種量減少 10 倍時表內(nèi) MPN 值相應(yīng)增加 10 倍。如污水接種量改為 1mL、0.1mL 和 0.01mL時，A1 表內(nèi) MPN 值相應(yīng)增加 10 倍。

32、其它的三個 10 倍濃度差接種量的 MPN 值相應(yīng)類推。由于 A1 表內(nèi) MPN 值的單位為每 100mL 污水樣品中 MPN 值，而污水以 1L 為報告單位，因此需將查 A1 表得到的 MPN 值乘上 10，換算成 1L 污水樣品中的 MPN 值。11接種表 A1污水中糞大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表（污水樣品接種量為 5 份 10mL 水樣，5 份 1mL 水樣和 5 份 0.1mL 水樣）陽性管數(shù)每陽性管數(shù)每陽性管數(shù)接種接種100mL接種接種接種100mL接種接種接種每100mL100mL水樣10mL水樣0.1mL水樣水樣中MPN100mL水樣10mL水樣0.1mL水樣水樣中MPN10

33、0mL水樣10mL水樣0.1mL水樣水樣中MPN0 0 0 0 2 0 0 5 4 0 0 130 0 1 2 2 0 1 7 4 0 1 170 0 2 4 2 0 2 9 4 0 2 210 0 3 5 2 0 3 12 4 0 3 250 0 4 7 2 0 4 14 4 0 4 300 0 5 9 2 0 5 16 4 0 5 360 1 0 2 2 1 0 7 4 1 0 170 1 1 4 2 1 1 9 4 1 1 210 1 2 6 2 1 2 12 4 1 2 260 1 3 7 2 1 3 14 1 1 3 310 1 4 9 2 1 4 17 4 1 4 360 1 5

34、11 2 1 5 19 4 1 5 420 2 0 4 2 2 0 9 4 2 0 220 2 1 6 2 2 1 12 4 2 1 260 2 2 7 2 2 2 14 4 2 2 320 2 3 9 2 2 3 17 4 2 3 380 2 4 11 2 2 4 19 4 2 4 440 2 5 13 2 2 5 22 4 2 5 500 3 0 6 2 3 0 12 4 3 0 270 3 1 7 2 3 1 14 4 3 1 330 3 2 9 2 3 2 17 4 3 2 390 3 3 11 2 3 3 20 4 3 3 450 3 4 13 2 3 4 22 4 3 4 520

35、3 5 15 2 3 5 25 4 3 5 590 4 0 8 2 4 0 15 4 4 0 340 4 1 9 2 4 1 17 4 4 1 400 4 2 11 2 4 2 20 4 4 2 470 4 3 13 2 4 3 23 4 4 3 540 4 4 15 2 4 4 25 4 4 4 620 4 5 17 2 4 5 28 4 4 5 690 5 0 9 2 5 0 17 4 5 0 410 5 1 11 2 5 1 20 4 5 1 480 5 2 13 2 5 2 23 4 5 2 560 5 3 15 2 5 3 26 4 5 3 640 5 4 17 2 5 4 29 4

36、 5 4 720 5 5 19 2 5 5 32 4 5 5 8112接種100mL水樣陽性管數(shù)接種10mL水樣接種0.1mL水樣每100mL水樣中MPN接種100mL水樣陽性管數(shù)接種10mL水樣接種0.1mL水樣每100mL水樣中MPN接種100mL水樣陽性管數(shù)接種10mL水樣接種0.1mL水樣每100mL水樣中MPN1 0 0 2 3 0 0 8 5 0 0 231 0 1 4 3 0 1 11 5 0 1 311 0 2 6 3 0 2 13 5 0 2 431 0 3 8 3 0 3 16 5 0 3 581 0 4 10 3 0 4 20 5 0 4 761 0 5 12 3 0 5

37、 23 5 0 5 951 1 0 4 3 1 0 11 5 1 0 331 1 1 6 3 1 1 14 5 1 1 461 1 2 8 3 1 2 17 5 1 2 631 1 3 10 3 1 3 20 5 1 3 841 1 4 12 3 1 4 23 5 1 4 1101 1 5 14 3 1 5 27 5 1 5 1301 2 0 6 3 2 0 14 5 2 0 491 2 1 8 3 2 1 17 5 2 1 701 2 2 10 3 2 2 20 5 2 2 941 2 3 12 3 2 3 24 5 2 3 1201 2 4 15 3 2 4 27 5 2 4 1501 2 5 17 3 2 5 31 5 2 5 1801 3 0 8 3 3 0 17 5 3 0 791 3 1 10 3 3 1 21 5 3 1 1101 3 2 12 3 3 2 24 5 3 2 1401 3 3 15 3 3 3 28 5 3 3 1801 3 4 17 3 3 4 32 5 3 4 2101 3 5 19 3 3 5 36 5 3 5 2501 4 0 11 3 4 0 21 5