1、幾種用于創(chuàng)傷修復研究的動物模型創(chuàng)傷是整個醫(yī)學領(lǐng)域最重要的基本問題之一。創(chuàng)傷愈合的研究已愈來愈受到人們的重視，而其中建立符合臨床發(fā)病過程和建立符合影響創(chuàng)面愈合主要因素的動物模型又是研究創(chuàng)傷愈合機理與評價創(chuàng)傷修復藥物的基礎(chǔ)。現(xiàn)根據(jù)我們自己的工作實踐，并結(jié)合國外有關(guān)報道，介紹幾種用于創(chuàng)燒傷創(chuàng)面修復實用的動物模型。 一、急性創(chuàng)傷修復模型該類模型應(yīng)反映出創(chuàng)傷發(fā)病急、有明確致傷因素、創(chuàng)面為急性炎癥反應(yīng)以及愈合快等的特點。1. 皮膚切線傷模型利用利刀切割動物皮膚，產(chǎn)生線狀切口，可深至皮下。此類模型切口可選在動物背部脊柱兩側(cè)或腹部，長度以24cm為宜。如果給予縫合且無創(chuàng)面感染，可產(chǎn)生一期愈合。如果創(chuàng)面皮膚疏松

2、，收縮小，創(chuàng)口寬大，加之不縫合，可產(chǎn)生二期愈合。此類模型可用于測定愈合創(chuàng)面抗張力強度，不適宜作組織學與生化學指標觀測1，2。2. 皮膚切除傷模型此模型是利用特制打孔器(或利刀)將動物皮膚進行全層切除。皮膚創(chuàng)面形狀可選擇圓形(也有用方形)，直徑1.54cm,深至皮下。創(chuàng)傷部位以動物背部脊柱兩側(cè)各旁開2cm為宜。一般200250g大鼠背部可制造4個創(chuàng)面，大耳白兔背部可制造68個創(chuàng)面，而小型豬背部則可制造1012個創(chuàng)面。根據(jù)我們的經(jīng)驗，如選擇直徑1.8cm，面積2.54cm2的圓形全層皮膚切除創(chuàng)面，可觀察到在14天左右創(chuàng)面愈合的自然過程，與臨床上該類創(chuàng)面愈合時間一致。該模型可用于評價各種藥物對創(chuàng)面愈

3、合作用。可觀察的指標包括： 創(chuàng)面愈合面積、愈合時間、肉芽組織含量、病理、生化與分子生物學分析等3，4。3. 創(chuàng)面死腔或創(chuàng)傷室腔模型在切除(開)創(chuàng)面后人為地植入某種多孔材料，形成死腔。這種模型主要用于創(chuàng)面愈合機制研究，如在愈合早期收集間質(zhì)液進行創(chuàng)面代謝、細胞(生長)因子含量分析以及非粘附細胞記數(shù)等。在創(chuàng)面愈合中后期可取創(chuàng)面肉芽組織進行生化與分子生物學指標分析，如組化、原位雜交以及病理學分析等。當然，也可通過連接的導管向創(chuàng)面注射一些治療藥物或抗體等用于治療研究。植入的材料可選用海綿、尼龍網(wǎng)、含海綿的硅管以及多孔的Teflon管等。缺點是存在異物反應(yīng)，埋入物周圍有瘢痕形成以及缺乏再上皮化過程等2，5

4、。另外，如果在兔耳上打孔，將兩側(cè)封閉形成一個腔室，便可以用顯微鏡動態(tài)觀察組織再生過程，也可以從中獲取滲出液用于分析或向腔內(nèi)注藥6。4. 斷層皮創(chuàng)面愈合模型該模型是利用取皮刀切取一定厚度的皮膚，形成創(chuàng)面供修復研究之用，與治療燒傷創(chuàng)面取皮的供皮區(qū)一致。其特點是創(chuàng)面大小與深度可以人為控制，既可以取至真皮淺層(人皮膚為0.10.3mm)，也可以取至真皮深層(0.30.5mm)。該模型由于保留了部分真皮以及皮膚附屬器，故創(chuàng)面修復可從創(chuàng)面邊緣和創(chuàng)面基底部同時開始。這種模型可用于促修復藥物與敷料評價，也可用作皮膚移植實驗3。5. 燒(燙)傷創(chuàng)面愈合模型常用為有限面積的淺0和深0燙傷模型，可用恒溫恒壓電熱燙傷

5、儀或恒溫水浴燙傷儀制作。創(chuàng)面一般選在動物背部、圓形，根據(jù)動物大小可制作多個創(chuàng)面供研究。采用恒溫恒壓電熱燙傷儀在壓力1 kg,溫度80條件下作用皮膚6秒鐘可造成淺0燙傷，作用8秒鐘可造成深0燙傷，作用12秒可造成0燙傷。目前動物實驗中采用的用凝固汽油或沸水造成的030%體表面積(TBSA)燒(燙)傷模型，由于可引起全身反應(yīng)劇烈，創(chuàng)面感染與深度等不易控制，因而不太適用于創(chuàng)面修復研究。其他如用脈沖CO2激光、沸油以及乙醇等制作的模型也不太常用。該類模型既可用于研究燒傷創(chuàng)面愈合的病生過程，也可用于生長因子等促修復藥物的評價2，3。二、慢性創(chuàng)傷修復模型該類模型應(yīng)體現(xiàn)慢性難愈合創(chuàng)面發(fā)病機制的復雜性、多因素

6、性以及創(chuàng)面本身存在感染與慢性炎癥反應(yīng)等特點。由于人與動物存在的顯著差別，因而要在動物身上復制出與人類完全一致的模型并不容易。因此，人們應(yīng)抓住影響模型復制的一個或幾個主要因素加以研究。1. 糖尿病(潰瘍)模型有兩種復制方法，一是選用患有遺傳性糖尿病的大小鼠(db/db鼠)人為造成創(chuàng)傷，在此基礎(chǔ)上研究愈合過程。由于這類動物飼養(yǎng)困難，成本高，不易獲得，故一般人們常采用復制人工糖尿病大鼠再加創(chuàng)傷進行復制。具體方法是將健康大鼠實驗前12小時禁食，定量飲水，實驗當日稱體重并測定血糖與尿糖后給動物從耳靜脈或尾靜脈推注3%四氧嘧啶(150mg/kg體重)。當動物血糖升至11mmol/L、尿糖大于20g/L，維

7、持1周以上并出現(xiàn)體重減輕、毛色黃、活動差等特征后可致傷動物背部(因自發(fā)性潰瘍較難形成，且不規(guī)范，難以量化，故必須人為造成創(chuàng)傷)。復制該類模型的要點是要經(jīng)常查血糖，使之始終保持在11mmol/L以上。該模型可用于研究糖尿病高血糖條件下創(chuàng)面愈合過程與特征，也可用于評價各種局部用藥對慢性難愈合創(chuàng)面的促修復作用7，8。2. 感染創(chuàng)面動物模型盡管慢性感染創(chuàng)面在人類十分常見，但要在動物上復制出類似的模型卻十分困難。一般認為細菌計數(shù)超過105個/g組織創(chuàng)面愈合將發(fā)生困難，但在動物細菌計數(shù)可能需要更高一些。我們曾在大鼠與兔背部創(chuàng)面涂以標準的金葡菌(106個/g組織)，盡管也觀察到了創(chuàng)面愈合延遲現(xiàn)象，但卻沒有出

8、現(xiàn)典型的創(chuàng)面慢性炎癥的病理學改變。其他如采用假單孢菌、葡萄球菌進行感染模型建立的實驗也有報告。該模型需定時計數(shù)創(chuàng)面細菌變化，可用于創(chuàng)面抗感染與促修復藥物評價3，9。3. 放射性潰瘍模型局部照射可殺死局部組織修復細胞而對外周循環(huán)細胞無殺傷性。劑量的選擇以最大限度抑制結(jié)締組織或上皮的增生為宜，如局部劑量過高可造成燒傷10，以射線照射為例，按其臨床經(jīng)過和病理變化可分為急性和慢性兩類。(1) 急性損傷是1次或多次大劑量照射皮膚局部所致。其病程經(jīng)歷脫毛(度)、紅斑(度)、水泡(度)和壞死潰瘍()度，約持續(xù)10周左右或更長。(2) 慢性損傷由小劑量長時間照射局部所致，也可見于急性皮膚放射損傷以后的延續(xù)，表

9、現(xiàn)為硬結(jié)性水腫、晚期放射性潰瘍及皮膚癌，持續(xù)數(shù)月或數(shù)年甚至數(shù)十年以上。通常在短時間內(nèi)人皮膚吸收劑量達6Gy以上可導致度損傷，816Gy照射可導致度損傷，1625Gy照射可導致導損傷，25Gy以上照射后可導致度損傷。4. 藥物所致局部皮膚壞死模型常用藥物為阿霉素，它是一種抗腫瘤化療藥物，局部注射后可造成真皮壞死和形成潰瘍。一般大鼠皮下注射25g/L,每個部位注射量從50500g開始，可注射46個部位，14天后可形成皮膚壞死，并伴有輕度持久的炎細胞浸潤，以中性粒細胞為主，形成的壞死焦痂可達50天以上。家兔模型的制作與大鼠類似，只是所需阿霉素的量要大些(每個壞死部位的總量為100200mg)。此外，

10、大鼠和兔皮下注射純蜘蛛毒(1015g)，幾小時后便可出現(xiàn)皮膚蒼白和風疹樣反應(yīng)，并逐漸出現(xiàn)出血、皮膚發(fā)黑、壞死等。此類模型適用于研究創(chuàng)傷愈合的基本病理生理過程，如炎細胞浸潤、細胞因子以及基質(zhì)成分改變等11。由于該模型創(chuàng)面存在大量壞死組織，故也可用于研究清創(chuàng)藥物或促修復藥物的作用。5. 缺血性皮瓣模型現(xiàn)有皮瓣較多，通常在鼠背制造任意皮瓣，其寬度為6.0cm1.5cm(含脂膜基層)，其蒂在尾部，以造成遠端部分組織缺血壞死。最近有人進行了改進，稱之為“H”型切口，使三面血流阻斷，其要點是使皮瓣基部與創(chuàng)面分離，否則血管會很快形成。另一改進是形成皮管，使血流從近端至遠端梯度變化12，13。此外，造成創(chuàng)面愈

11、合延遲或形成慢性難愈合創(chuàng)面的方法還有采用免疫抑制方法，如采用糖皮質(zhì)激素或造成動物營養(yǎng)不良，如缺乏VitA、VitC以及Zn等。如前所述，要在動物體制造慢性難愈合創(chuàng)面十分困難，目前我們所使用的許多動物慢性難愈合創(chuàng)面模型嚴格來講僅可稱之為創(chuàng)面愈合延遲，而非真正的慢性難愈合創(chuàng)面。作者單位：100037北京，解放軍第304醫(yī)院創(chuàng)傷研究室參考文獻1付小兵編著. 生長因子與創(chuàng)傷修復. 第一版，北京：人民軍醫(yī)出版社，1991，25-29.2Davidson JM. Animal models for wound repair. Arch Dermatol Res,1998,290:1-11.3付小兵，王德文

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