1、原發(fā)性高血壓患者外周血白介素-6基因表達及意義【摘要】 目的： 觀察原發(fā)性高血壓患者外周血白介素-6（IL-6）基因表達，初步探討其與原發(fā)性高血壓的關系及其意義。方法: 用放射免疫法測定62例原發(fā)性高血壓患者和30例正常對照者外周血IL-6蛋白含量，用逆轉錄聚合酶鏈反應法檢測外周血單個核細胞中IL-6 mRNA表達。結果： 與對照組比較，原發(fā)性高血壓組患者外周血IL-6蛋白水平及外周血單個核細胞中IL-6 mRNA表達均顯著增高（P<0.01）。結論： IL-6可能參與了原發(fā)性高血壓的病理生理過程，外周血單個核細胞的IL-6 mRNA表達上調可能是原發(fā)性高血壓患者外周血IL-6蛋

2、白水平升高的機制之一。 【關鍵詞】 白細胞介素6； 基因表達； 高血壓； 血液Abstract Objective: To observe the expression changs of interleukin-6 (IL-6) in peripherial blood of patients with essential hypertension (EH), and to probe the relationgship between IL-6 mRNA level and EH. Methods: The concentrations of circulating IL-6 of 62

3、EH patients (group EH) and 30 normal people (group CN) were measured by using radioimmunoassay, and the expression of mRNA of IL-6 in mononuclear cells was measured with reverse transcription polymerase chain reaction. Results: The concentration of protein IL-6 in peripherial blood and IL-6 mRNA in

4、mononuclear cell of group EH were significantly higher than those of group CN (P<0.01). Conclusions: IL-6 might participate the patho-physiology process of EH.; Up-regulating expression of IL-6 mRNA may be one of the mechanisms increasing protein IL-6 in peripherial blood of EH patient.Key wo

5、rds interleukin-6；gene expression; hypertension；blood 原發(fā)性高血壓(essential hypertension,EH)是以體循環(huán)動脈壓升高為主要表現的臨床綜合征，嚴重危害人類健康，但其發(fā)病機制及某些病理過程仍未完全闡明。近年來研究提示，炎癥介質在EH發(fā)生發(fā)展的不同階段發(fā)揮了重要作用，但目前針對炎癥介質基因表達方面的檢測與分析尚少見。2007年2月12月檢測62例EH患者外周血白介素-6（interleukin-6,IL-6）蛋白水平及單個核細胞IL-6 mRNA的表達，探討外周血IL-6的變化與EH的關系。1 對象與方法1.1 對象及分組

6、按中國高血壓防治指南（2005年修訂版）制定的標準，選取心血管科住院和門診新診斷或未經正規(guī)降壓治療的EH患者62例，同時選取正常的健康體檢者30例作為對照組。排除繼發(fā)性高血壓、經冠狀動脈造影確診合并冠心病者、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血癥、感染、嚴重肝腎疾病、自身免疫性疾病及腫瘤性疾病、近期有手術或外傷史等影響IL-6水平的患者。1.2 方法1.2.1 主要試劑和儀器人淋巴細胞分離液（上海捷瑞），Trizol試劑（美國Invitrogen），焦炭酸二乙酯（瑞興），逆轉錄試劑盒（Promega），PCR試劑盒（Promega），100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DN

7、A Marker（天根生化），人IL-6放射免疫分析藥盒（天津九鼎）；ULT-1386-3三洋-80 低溫冰箱(日本)，5745臺式冷凍離心機(德國)，Eppendorff centrifuge 5810R 高速離心機，Amersham核酸蛋白分析儀，PCR儀（PE geneAmp PCR System 2400）（Perkin Elmer），DNA成像分析儀（Gel Doc EQ）（Bio-Rad），酶標儀（ELx800）（Bio-Tek公司）。引物設計由上海生物工程公司合成：IL-6上游引物5' -GAGGAGACTTGCCTGGTGAA -3'，下游引物5' -A

8、TCTGAGGTGCCCATGCTAC -3'；action上游引物5'-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT -3'，下游引物5'-GGGCACGAAGGCTCATCATT -3'。1.2.2 標本采集受檢者空腹12 h，次日清晨采集肘正中靜脈血8 ml，其中4 ml置普通生化管中，室溫靜置2 h，自然凝固后，1 000 r/min，離心10 min，收集上清液置于-80 冰箱保存待測；另4 ml置于EDTA抗凝試管中搖勻后即刻置4 冰箱冷存，6 h內提取RNA。1.2.3 外周血IL-6蛋白含量測定用保存待測的血清，嚴格依照IL-6放射免疫分析藥

9、盒說明書的步驟操作。1.2.4 人血單個核細胞中RNA提取和逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR） 淋巴細胞分離液提取外周血中單個核細胞后，按照說明書的步驟提取總RNA，再按逆轉錄試劑盒說明書步驟合成cDNA，并用PCR技術擴增目的片段。PCR產物用1.5% 瓊脂糖凝膠電泳，溴乙錠顯色。測定各條帶灰度值，以-actin為內參，用IL-6與-actin的灰度比值定量IL-6。1.3 統(tǒng)計學處理采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行數據分析處理，數據以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗。以P0.05為差異顯著，P0.01為差異極顯著。貴陽醫(yī)學院學報 33卷 6期張玲玲等 原發(fā)性高血壓患者外周血白

10、介素-6基因表達及意義2 結果EH組和正常對照組間的年齡、性別、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇、空腹血糖和外周血白細胞比較，無統(tǒng)計學差異（見表1）。 EH患者外周血IL-6水平及單個核細胞IL-6 mRNA表達的變化見表2，與對照組比較，EH組外周血IL-6蛋白水平及單個核細胞IL-6 mRNA表達均顯著增高（P0.01)。表1 EH組及對照組的基本資料（略）表2 EH患者及對照組外周血IL-6水平（略）注：與對照組比較,（1）P0.01。3 討論原發(fā)性高血壓的發(fā)病機制及某些病理過程至今尚未完全闡明，有學者研究發(fā)現高血壓與炎癥有關，提示炎癥可能在高血壓的發(fā)病機制中起重

11、要作用1。IL-6是一種參與免疫和炎癥反應的多功能促炎細胞因子，體內單核細胞或巨噬細胞、內皮細胞等均可分泌IL-6。IL-6作為重要的炎性細胞因子之一，在心血管系統(tǒng)中的作用越來越受到重視。本研究顯示，原發(fā)性高血壓組患者外周血IL-6蛋白水平明顯高于對照組，提示IL-6可能參與了原發(fā)性高血壓的病理生理過程。因此，積極探索控制炎癥的方法可能是原發(fā)性高血壓病治療的前景策略之一。原發(fā)性高血壓患者外周血IL-6升高的機制尚不十分明了。近年來雖已有研究發(fā)現原發(fā)性高血壓患者外周血Ang、IL-6、內皮素-1等細胞因子水平增高，并認為細胞因子可能與原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展相關26，但針對原發(fā)性高血壓患者在外周血

12、單個核細胞中的IL-6 mRNA表達水平方面的檢測與分析少見報道。本研究顯示，與對照組比較，原發(fā)性高血壓組外周血單個核細胞中IL-6 mRNA表達顯著增高，提示外周血單個核細胞的IL-6 mRNA表達上調可能是導致原發(fā)性高血壓患者外周血IL-6蛋白含量升高的一個因素。IL-6可能通過以下機制影響原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展：(1)升高血管平滑肌細胞內Ca2+濃度，引起血管收縮；(2)使白細胞流變學特性發(fā)生改變，易黏附于血管內皮細胞，增加血管阻力；(3)從多種途徑促進血管平滑肌細胞增生、增殖，導致血管重構；(4)損傷血管內皮；(5)IL-6還可能與多種高血壓危險因素協(xié)同促進高血壓的發(fā)生和發(fā)展7。【參考

13、文獻】 1Sesso HD,Buring JE,Rifai N, et al.C-reactive protein and the risk of developing hypertensionJ. JAMA,2003(290):2945-2951.2Chae CU,Lee RT,Rifai N,et al. Blood pressure and inflammation in apparently healthy menJ. Hypertension,2001(38):399-403.3Parissisj T,Korovesis S,Giazitzogloue E,et al .Plasma

14、 profiles of peripheral monocyte related inflammatory markers in patients with arterial hypertension : correlations withplasma endothelin-1J.Int J Cardiol , 2002(1) :13221.4Luft FC. Angiotensin, inflammation, hypertension, and cardiovascular diseaseJ. Curr Hypertens Rep,2001(3):61-67.5Oshchepkova EV,Dmitriev VA,Titiov VN,et al.The activity of nonspecific inflammation in hype