1、苜蓿總皂苷提取物抗大鼠動脈粥樣硬化和降血脂的作用         11-04-26 13:39:00     編輯：studa20                 作者：邴飛虹 ，但漢雄，程靜，韓俊，李婧，廖一帆   【摘要】  目的研究苜蓿總皂苷提取物抗大鼠動脈粥樣硬化和降血脂

2、的作用。方法苜蓿總皂苷提取物組高、中、低劑量分別為0.7，0.35，0.18 g·kg-1，陽性組：絞股藍(lán)總苷片56 mg·kg-1，模型組：等體積蒸餾水，灌胃同時給予高脂飼料；對已造模的大鼠，按體重1.0 ml/100g灌胃，空白組：等體積蒸餾水，灌胃同時給予普通飼料；1次/d，連續(xù)給藥90 d。檢查血脂相關(guān)指標(biāo)、主動脈病變情況、主要臟器組織的情況。結(jié)果苜蓿總皂苷提取物使大鼠的血脂相關(guān)指標(biāo)、主動脈病變情況、重要臟器組織病變情況有不同程度的改善。結(jié)論苜蓿總皂苷提取物有抗大鼠動脈粥樣硬化和降血脂的作用。 【關(guān)鍵詞】  苜蓿總皂苷提取物； 大鼠； 動脈粥樣硬化； 降血

3、脂苜蓿為豆科植物紫苜蓿Medicago sativa L.或南苜蓿Medicago hispida Gaertn.的全草，是多年生草本植物。苜蓿總皂苷提取物不僅對于高脂血癥有治療作用，因其毒性低微，還可作為中老年人長期使用的保健品。苜蓿提取物在防治血脂代謝紊亂和抗動脈粥樣硬化方面有其獨到之處。本實驗主要進(jìn)行苜蓿總皂苷提取物抗大鼠動脈粥樣硬化和降血脂的作用研究，為該新藥的臨床試驗提供實驗依據(jù)。1  材料與儀器1.1  受試藥物苜蓿總皂苷提取物，批號：060828，061010，由廣東省中山市中健藥物研究所有限公司提供。用蒸餾水配制成36%，25%，14%的溶液，分別作為高、中

4、、低劑量組，4 保存?zhèn)溆谩?.2  試劑絞股藍(lán)總苷片，由廣州白云山和記黃浦中藥有限公司提供，批號：E6A003，規(guī)格：每片含絞股藍(lán)總苷20 mg，藥片粉碎后加蒸餾水配成所需濃度，4保存?zhèn)溆茫槐蜓踵奏て缮虾?fù)星朝暉藥業(yè)有限公司提供，批號：070901，規(guī)格：每片含丙硫氧嘧啶50 mg；維生素D3注射液，由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供，批號：080401，規(guī)格：7.5 mg/ml。總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)測定試劑盒，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒，批號分別為011M042、010M050，012L028，012L028，均由上海

5、名典生物工程有限公司提供；TXB2、PG6-ket、ET放免分析藥盒，批號分別為070820，070820，070820，均由北京北方生物技術(shù)研究所提供；膽固醇，由上海科瑞生物有限公司提供；戊巴比妥鈉，由北京化學(xué)試劑公司提供，批號：20071019；吐溫80，由天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司提供，批號：070706；丙二醇，由湖北大學(xué)化工廠提供，批號：930801；蛋黃乳液，稱取鮮雞蛋黃15g加生理鹽水配成75%的乳液；食用豬油，由宜昌雙匯食品有限責(zé)任公司提供。1.3  儀器Spctrumlab 53 power紫外分光光度計，上海棱光技術(shù)有限公司產(chǎn)品。TB-718E組織自動包埋機(jī)，湖北泰維

6、醫(yī)療科技有限公司提供。TC-120S組織自動脫水機(jī)，湖北泰維醫(yī)療科技有限公司提供。RM2135石蠟切片機(jī)，德國Leica公司產(chǎn)品。HM525冰凍切片機(jī)，德國Microm公司產(chǎn)品。GC-1200放射免疫計數(shù)器，中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實業(yè)總公司中佳光電儀器分公司生產(chǎn)。80-2B型臺式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。電子精密天平，奧豪斯公司。恒溫水浴鍋，北京市醫(yī)療設(shè)備廠提供。WH-1微型旋渦混合儀，上海瀘西分析儀器廠。1.4  動物Wistar大鼠，SPF級，體質(zhì)量（200±10）g，性別：雄性，由湖北省實驗動物研究中心提供，許可證號：SCXK（鄂）2003-0005；動物飼料：純系鼠

7、料，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實驗動物學(xué)部提供；動物飼養(yǎng)條件：室溫2025，濕度40%60%，籠具及墊料定期清洗更換。2  方法2.1  造模取雄性大鼠50只，每只大鼠右下肢肌肉注射維生素D3 3×105 U/kg，并給予高脂飼料（2%膽固醇，0.5%膽酸鈉，3%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，94.3%基礎(chǔ)粉末飼料，維生素D3粉劑1.25×106 U/kg）。7 d后行球囊損傷手術(shù)。另取10只作為空白對照，給予普通飼料。    球囊損傷手術(shù)：動物用戊巴比妥鈉（35 mg/kg體重）腹腔麻醉，仰臥固定，皮膚消毒，正中切開頸部皮膚，

8、分離左側(cè)頸總動脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，插入球囊，進(jìn)入約8 cm，球囊內(nèi)注入0.2 ml生理鹽水，向回拉動34 cm，放水再進(jìn)入約8 cm，注水、回拉，共3次。拔出球囊，層縫合皮下組織、皮膚。消毒切口皮膚，切口處灑適量注射用青霉素粉劑。術(shù)后連續(xù)7 d給予肌肉注射青霉素，切口處用碘酒消毒。2.2  分組及給藥術(shù)后按體重隨機(jī)分為5組。高劑量組：苜蓿總皂苷提取物0.7 g/kg；中劑量組：苜蓿總皂苷提取物0.35 g/kg；低劑量組：苜蓿總皂苷提取物0.18 g/kg；陽性組：絞股藍(lán)總苷片56 mg/kg；模型組：等體積蒸餾水，灌胃同時給予高脂飼料；另設(shè)空白組：等體積蒸餾水，灌胃同時給予普通飼料。按

9、體質(zhì)量1.0 ml/100 g灌胃，1次/d，連續(xù)給藥90 d。2.3  取樣及檢測指標(biāo)末次給藥后，禁食不禁水12 h，斷頭取血，3 000 r/min離心15 min，分離血清。用紫外分光光度計測定血清總膽固醇(TCH ，PAP法)，甘油三酯（TG，PAP法）和高密度脂蛋白（HDL-C，PTG-Mg2+ -PAP法）的含量；并計算低密度脂蛋白（LDL-C）的含量和動脈粥樣硬化指數(shù)（AI）。    分離主動脈，縱行切開，0.9%生理鹽水沖洗干凈，蘇丹染色，照相，以百分率法算出斑塊面積占動脈壁總面積的百分率，按分級法統(tǒng)計主動脈病變級別。計量資料以組間t檢驗

10、進(jìn)行統(tǒng)計比較，等級資料以秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計比較，百分率以卡方檢驗。主動脈斑塊分級標(biāo)準(zhǔn)：0級-內(nèi)膜表面光華，無奶油色變化，即無斑塊；0.5級-內(nèi)膜有廣泛的奶油色或乳白色變化，但無凸出于表面的斑塊；1級-有明顯的奶油色凸起斑塊，面積小于3mm2；2級-斑塊面積大于3 mm2；3級-有許多大小不等的斑塊，有的融合成片，大塊的斑塊面積超過3 mm2；4級-動脈內(nèi)膜表面幾乎為全為融合的斑塊所覆蓋。    主動脈用10%福爾馬林溶液固定36 h后，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，在切片機(jī)上橫斷面制成5 m厚連續(xù)切片。HE染色片隨機(jī)選取10個視野測定主動脈內(nèi)膜厚度，內(nèi)膜/中膜厚度比值。&

11、#160;   分離心臟，用10%的福爾馬林固定，再將心臟橫切成3塊，每塊冰凍切片至少2片，用蘇丹及蘇木素染色，每個切片一般都觀察10個動脈斷面并按下列標(biāo)準(zhǔn)分級：0級-動脈內(nèi)膜無脂質(zhì)浸潤；0.5級-動脈內(nèi)膜有輕度脂質(zhì)浸潤；1級-內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/4；2級-內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2；3級-內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2以上；4級-斑塊幾乎堵塞整個管腔。    分離肝臟、腎臟，10%福爾馬林溶液固定36 h后，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，在切片機(jī)上橫斷面制成5 m厚連續(xù)切片，HE染色，鏡檢。3  結(jié)果3.1  苜蓿總皂苷提取物對血脂的影響高、中劑量組使高脂血癥大鼠的血清TCH、TG、LDL-C水平明顯下降，而HDL-C水平明顯上升，AI明顯下降，與模型組比較有顯著性差異（P0.0