1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 生物技術(shù)概論復(fù)習(xí)資料第二章 基因工程 1、基因工程按照人們的愿望，進行嚴密的設(shè)計，通過體外DNA重組，和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，有目的地改造生物種性，使現(xiàn)有的物種在較短的時間內(nèi)趨于完善，創(chuàng)造出符合人們意愿的產(chǎn)品。是在分子水平上對基因進行操作的復(fù)雜技術(shù)。是將外源基因（通過體外重組后導(dǎo)入受體細胞內(nèi)，使這個基因能在受體細胞內(nèi)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯表達的操作 ）2. 基因工程研究的理論依據(jù) （1）不同基因具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)。 （2）基因是可以切割的。 （3）基因是可以轉(zhuǎn)移的。 （4）多肽與基因之間存在對應(yīng)關(guān)系。 （5）遺傳密碼是通用的。 （6）基因可以通過復(fù)制把遺傳信息傳遞給下一代。 3.基

2、因工程基本操作路線p164.DNA變性 當溶解在溶液中的雙鏈DNA處于較高溫度時,，氫鍵斷開而解鏈成單鏈DNA，此過程稱為DNA變性。 5.DNA的復(fù)性 在高溫變性的DNA逐漸冷卻時，分開的兩條單鏈DNA有重新組合成雙鏈DNA的過程6.獲得目的DNA片段的主要途徑 （1）限制性內(nèi)切核酸酶酶切法。（2）PCR擴增法。（3）DNA片段的化學(xué)合成。7.限制性內(nèi)切核酸酶 是一類能識別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列，并在合適的反應(yīng)條件下使每條鏈一定位點上的磷酸二酯鍵斷開，產(chǎn)生具有5-磷酸基（-P）和3'-羧基（-OH）片段的內(nèi)切脫氧核糖核酸酶8.識別序列；限制性內(nèi)切核酸酶早雙鏈DNA上能識別的核苷酸

3、序列一般由4-6個核苷酸對組成9. PCR的基本原理 PCR反應(yīng)是模仿細胞內(nèi)發(fā)生的DNA復(fù)制過程進行的以DNA互補鏈聚合反應(yīng)為基礎(chǔ)通過靶DNA變性、引物與模板DNA一側(cè)的互補序列復(fù)性雜交、耐熱性DNA聚合酶催化引物延伸等過程的多次循環(huán)產(chǎn)生待擴增的特異性DNA片段。 10. DNA連接酶 催化雙鏈DNA 或RNA中并列的5-磷酸和3-羥基之間形成磷酸二酯鍵的酶。11. DNA連接酶化學(xué)合成 （1）合成引物（2）合成DNA寡核苷酸連桿（3）合成基因片段12.基因克隆載體能夠承載外源基因并將其帶入受體細胞得以穩(wěn)定維持的DNA分子。 13.基因克隆載體應(yīng)具備的條件 （1）在克隆載體合適的位置必須含有允

4、許外源DNA分子片段組入的克隆位點并且這樣的克隆位點盡可能地多即要有克隆位點。 （2） 克隆載體一般能攜帶外源DNA片段基因進入受體細胞或停留在細胞質(zhì)中進行復(fù)制既要有復(fù)制子。 （3） 克隆載體必須含有供選擇轉(zhuǎn)化子的標記基因。既具有選擇性標記基因。 （4） 克隆載體必須是安全的。 14.克隆子通常將攝取外源DNA分子并在其中穩(wěn)定維持的受體細胞稱為克隆子。把采用轉(zhuǎn)化方法獲得的克隆子叫做轉(zhuǎn)化子15. 轉(zhuǎn)化子 把采用轉(zhuǎn)化方法獲得的克隆子叫做轉(zhuǎn)化子16. 克隆子的篩選： （1）根據(jù)載體標記基因篩選克隆子。 （2）根據(jù)報道基因篩選克隆子。 篩選的主要步驟抗性篩選和藍白斑篩選、滯后質(zhì)粒篩選、酶切鑒定和PCR

5、鑒定、測序。第3章 細胞工程17.細胞工程應(yīng)用細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的方法,借助工程學(xué)的試驗方法或技術(shù)在細胞水平上研究改造生物遺傳特性和生物學(xué)特性以獲得,特定的細胞、細胞產(chǎn)品或新生物體的有關(guān)理論和技術(shù)方法的科學(xué)。 18. 細胞工程基本技術(shù)1. 無菌操作技術(shù)2. 細胞培養(yǎng)技術(shù)3. 細胞融合技術(shù)（制備原生質(zhì)體、誘導(dǎo)細胞融合、篩選細胞融合）19.植物組織培養(yǎng)是在無菌和人為控制外因營養(yǎng)成分、光、溫、濕的條件下培養(yǎng)和研究植物組織、器官，甚至進而從中分化、發(fā)育出整體的植株的技術(shù)。 20.植物組織培養(yǎng)的階段 (1)預(yù)備階段包括選擇合適的外植體除去病原菌及雜菌配制適宜的培養(yǎng)基。 (2)誘導(dǎo)去分化階段。 (3)

6、繼代增值階段。 (4)生根發(fā)芽階段。 (5)移栽成活階段。 21. 原生質(zhì)體是指那些已去除全部細胞壁的細胞。細胞外僅由細胞膜包裹，呈圓形要在高滲溶液中才能維持細胞的相對穩(wěn)定22. 原生質(zhì)體融合：指通過人為的方法，使遺傳性狀不同的兩個細胞的原生質(zhì)體進行融合，借以獲得兼有雙親遺傳性狀的穩(wěn)定重組子的過程。 方式：化學(xué)（聚乙二醇PEG）、物理（電刺激）、病毒（紡錘體毒素）23.人工種子的組成 人工種子即為人為制造的種子,它是一種含有植物胚狀體或芽、營養(yǎng)成分、激素以及其他成分的人工膠囊。它由人工種皮、人工胚乳、胚狀體三部分組成。 24. 淋巴細胞雜交瘤細胞產(chǎn)生單克隆抗體示意圖P7425. 淋巴細胞雜交瘤

7、細胞技術(shù)原理P7426. 克隆羊多莉示意圖:P7827. 干細胞及其種類：是動物（包括人）胚胎及某些器官中具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細胞，是重建、修復(fù)病損或衰老組織、器官功能的理想種子細胞。按分化潛能的大小，干細胞基本上可分為三種類型：1、全能性干細胞，2、多能性干細胞3、專一性干細胞 第四章 發(fā)酵工程28.發(fā)酵工程是一門將微生物學(xué)、生物化學(xué)和化學(xué)工程學(xué)的基本原理有機地結(jié)合起來利用微生物的生長和代謝活動來生產(chǎn)各種有用物質(zhì)的工程技術(shù)。 29. 發(fā)酵工程 主要內(nèi)容包括生產(chǎn)菌種的選育，發(fā)酵條件的優(yōu)化與控制，反應(yīng)器的設(shè)計及產(chǎn)物的分離、提純和精制等30. 初級代謝產(chǎn)物 初級代謝產(chǎn)物是指通過活動所產(chǎn)

8、生的、自身生長和所必需的，如、等31. 次級代謝產(chǎn)物 次級代謝產(chǎn)物是指生長到一定階段才產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜、對該生物無明顯生理功能，或并非是微生物和所必需的物質(zhì)，如、等。可能在細胞內(nèi)也可能排除體外32. 發(fā)酵技術(shù)特點 (1)數(shù)十個反應(yīng)可在設(shè)備中一次完成（2）反應(yīng)需求條件溫和，能耗低，設(shè)備簡單（3）原料常以以糖蜜、淀粉等糖水化合物為主（4）易生產(chǎn)復(fù)雜高分子化合物，可高度的選擇在復(fù)雜部位的反應(yīng)位置的反應(yīng)類型（5）發(fā)酵中需防雜菌污染，需嚴格對設(shè)備的處理和對空氣滅菌33. 發(fā)酵的種類：1.好氧性2.厭氧性3.兼性厭氧，根據(jù)培養(yǎng)基的不同：固體/液體培養(yǎng)基，發(fā)酵設(shè)備：敞口/密閉/淺盤/深層發(fā)酵34.發(fā)酵

9、的一般過程 （1）菌種制備包括菌種的分離、純化、選育、改造（2）種子擴大培養(yǎng)（3）發(fā)酵在無菌條件下對微生物進行無菌培養(yǎng)本階段微生物合成大量產(chǎn)物是整個發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)（4）下游處理通過離心沉降的物理方法或?qū)游龅幕瘜W(xué)方法得到純產(chǎn)品。 35.發(fā)酵方式 (1)分批發(fā)酵優(yōu)點:除了控制溫度和PH及通氣以外,不進行任何其他控制,操作簡單缺點:從細胞所處的環(huán)境來看,則有明顯改變。發(fā)酵初期營養(yǎng)物過多，可能抑制微生物的生長，而發(fā)酵的中后期又可能因為營養(yǎng)物質(zhì)減少而降低培養(yǎng)效率，從細胞增殖來看，初期細胞濃度低，增長慢，后期細胞濃度高，但營養(yǎng)物濃度過低也生長不快總的生產(chǎn)能力不是很高。 （2）連續(xù)發(fā)酵 優(yōu)點：可維持穩(wěn)定操作條件，利于生物新陳代謝，穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)率；機械化操作，減少對工作人員傷害；減少設(shè)備清洗率；延長儀器探頭使用壽命；易于操