1、培養基適用性標準操作規程1 目的規范培養基適應性檢查的標準操作。2 范圍本規程適用于中華人民共和國藥典2010年版二部規定微生物限度檢查中成品培養基、 由脫水培養基或按處方配制的培養基均應進行培養基適用性檢査。3 責任3.1 本規程由質量保證中心主任指定人員起草。3.2 與本文件相關的部門負責人參與審閱，企業質量負責人批準本文件。3.3 質量控制中心負責具體實施本規程。4 內容4.1 依據4.1.1 藥品生產質量管理規范（2010年修訂）4.1.2 中華人民共和國藥典2010年版二部4.2 試驗用菌株及培養基試驗用菌株試驗用培養基菌液配制用培養基適用性檢查培養基適用性檢查對照培養基大腸埃希菌營

2、養肉湯培養基或營養瓊脂培養基營養瓊脂培養基對照營養瓊脂培養基金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌改良馬丁培養基或改良馬丁瓊脂培養基玫瑰紅鈉瓊脂培養基對照玫瑰紅鈉瓊脂培養基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基對照酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基黑曲霉改良馬丁瓊脂斜面培養基玫瑰紅鈉瓊脂培養基對照玫瑰紅鈉瓊脂培養基4.3 試驗用儀器設備4.3.1 恒溫培養箱（3035）、霉菌培養箱（2328）、蒸汽壓力滅菌器、凈化工作臺、電熱干燥箱、恒溫水浴鍋、振蕩器、電冰箱、天平4.3.2 錐形瓶、培養皿（9cm）、量筒、試管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）4.3.3 接種環、乙醇燈、乙醇棉球或碘伏棉球、

3、火柴、記號筆、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、白瓷盤。4.4 操作步驟 4.4.1 菌液的制備4.5.1.1 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中，于3035培養1824h。取3035培養1824h的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌營養肉湯新鮮培養物1ml，用 0.9%無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數50100cfu的菌懸液，備用。4.5.1.2 接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基上，于2328培養2448h。取于2328培養2448h的白色念珠菌新鮮培養物1ml，用0.9%無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋每1ml含菌數50100cfu的菌

4、懸液備用。4.5.1.3 接種黑曲霉菌的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基上，于2328培養57天，加入35ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含孢子數50100cfu的孢子懸液備用。4.4.2 菌液的計數（每種菌液制備2個平皿）大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液1ml（含菌數50100cfu）接種至營養瓊脂培養基上，3035培養48h，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml（含菌數50100cfu）接種至改良馬丁瓊

5、脂培養基上，2328培養72h，計數。4.4.3 適用性檢查實驗操作4.5.3.1 培養基的配制：按規定程序新鮮配制營養瓊脂（被檢培養基和對照培養基）、玫瑰紅鈉瓊脂（被檢培養基和對照培養基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂（被檢培養基和對照培養基），滅菌后備用。4.5.3.2 營養瓊脂培養基的適用性檢查取7個無菌平皿，分別接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌做空白對照，傾注對照營養瓊脂培養基，混勻，凝固后于3035倒置培養48h，計數。被檢培養基同法操作。4.5.3.3 玫瑰紅鈉瓊脂培養基的適用性檢查取5個無菌平皿，分別接種白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌做空白對照，傾注對照玫瑰紅鈉瓊脂培養基，混勻，凝固后于2328倒置培養72h，計數。被檢培養基同法操作。4.5.3.4 酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基的適用性檢查取3個無菌平皿，分別接種白色念珠菌2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌做空白對照，傾注對照酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基，混勻，凝固后于2328倒置培養72h，計數。被檢培養基同法操作。4.