1、聲波提取馬鞭草中黃酮類化合物的工藝研究    【摘要】     目的為充分利用馬鞭草植物資源，避免資源的浪費，探討馬鞭草黃酮類化合物的提取及鑒別方法。方法采用超聲波乙醇浸提法從馬鞭草中提取黃酮類化合物，對所提取的黃酮類化合物進行驗證，并用紫外分光光度法測定其含量。結(jié)果測得馬鞭草樣品中黃酮類化合物的總含量為8.36 mg/g，回收率為99.56%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取馬鞭草中黃酮類化合物的有效途徑。     【關(guān)鍵詞】

2、60; 超聲波提取 馬鞭草 黃酮類化合物    Extraction Technology of Flavonoids from Verbena officinalis L.by the Supersonic Wave MethodBIAN Jiesong,  DENG Bin,  WANG Cunchang,ZHANG Aihua,LIU Zhiwei1.Department of Chemistry and Life Science, Xiangnan University, Chenzhou, Hunan, 423000, Ch

3、ina; 2.College of Chemistry and Chemical Engineering, Jishou, University, Jishou Hunan 416000, China;3.Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co.Ltd,Taizhou 318000, ChinaAbstract：ObjectiveTo study the methods of extraction and identification of  flavonoids from verbena officinalis L. MethodsThe flavonoi

4、ds were extracted by ethanol as the solvent from Verbena officinalis L. with ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine and identify the flavonoids from Verbena officinalis L. Hunan.ResultsBy this method the contents of the flavonoids from Verbena officinalis L. was 8.36mg/g and the ra

5、te recovery was 99.56 %.ConclusionThis method is a pure physical process, and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavonoids from Verbena officinalis L.Key words：Ultrasonic wave treatment; Verbena officinalis L.; Flavonoids    馬鞭草Verbena officinalis L.又叫鐵馬鞭、自馬鞭、瘧馬

6、鞭，皆以穗類鞭鞘而得名。為馬鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物馬鞭草的全草或根。常生于河岸、草地、荒地、路邊、田邊及草坡等處，全國各地均有分布1。體內(nèi)富含糖、淀粉、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、黃酮、類胡蘿卜素等許多活性成分2。藥用部分為其全草或帶根全草，作為一種傳統(tǒng)的中草藥，具有清熱解毒、截瘧殺蟲、治痢、利水消腫、通經(jīng)散瘀等功效，被廣泛用于治療傷風(fēng)感冒、水腫、痢疾、黃疸等病癥3。現(xiàn)代研究還發(fā)現(xiàn)馬鞭草具有抗癌4、抗早孕5以及免疫調(diào)節(jié)作用6。    有文獻報道馬鞭草中黃酮類化合物的提取方法采用乙醇提取2， 但是，這種方法的提取效率仍然較低。近年來，超聲

7、技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報道79，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響10。超聲技術(shù)應(yīng)用于提取馬鞭草中黃酮類化合物的研究尚未見報道,本文報道用超聲波提取馬鞭草黃酮類化合物及鑒別。1 材料1.1 儀器  UV-752紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；AL104 電子天平（Mettler-Toledo儀器公司）；KQ-5

8、00DE型醫(yī)用超聲波清洗機（昆山超聲儀器有限公司）；F120型粉碎機（北京中儀金葉科技有限公司）；pH213型酸度計（上海雷磁儀器有限公司）；SHZ-D()循環(huán)水式真空泵（鄭州市亞榮儀器有限公司）。1.2 試劑95%乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、三氯化鋁、鎂粉、正丁醇、氨水、鹽酸、冰醋酸、乙酸鎂、醋酸乙酯(均為AR)；蘆丁標(biāo)樣(含量98%)由廣東藥學(xué)院藥物化學(xué)研究室提供；馬鞭草樣品采于湖南省吉首大學(xué)校園內(nèi)，并經(jīng)湖南省藥材公司李樹勝執(zhí)業(yè)藥師鑒定為Verbena officinalis L.全草。2 方法2.1 黃酮類化合物成分提取取新鮮馬鞭草，洗凈，晾干，粉碎。精密稱取馬鞭草粉末10.0 g

9、，加100 ml 95%乙醇，超聲波提取2 h，抽濾。濾渣再加100 ml 95%乙醇，超聲波提取2 h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩58 ml為止，放置100 ml容量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，得待測樣品溶液。2.2 測定方法依據(jù)以蘆丁為對照品測定馬鞭草中黃酮類化合物的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。3  結(jié)果3.1  定量實驗-黃酮類化合物的含量測定3.1.1  波長的選擇取樣品溶液適量，在0.5 ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比

10、液在400700 nm波長范圍測定螯合物的吸光度，螯合物于502 nm 波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取蘆丁對照液 (0.10mg/ml) 0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.50 ml，搖勻，靜置5 min；再加10%硝酸鋁溶液0.50 ml，搖勻，靜置5 min；再加4%氫氧化鈉溶液5.00 ml，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，以試劑作空白，于502 nm處測吸光度。結(jié)果見表1。根據(jù)表1得回歸方程：A=-1.233 6×10-

11、2+15.011C，r=0.999 8。表1  紫外可見分光光度計測定蘆丁對照液吸光度值（略）3.1.3 提取物含量的測定精密吸取樣品液0.5 ml，置10 ml容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備操作測定吸光度A=0.615，根據(jù)回歸方程：A=-1.233 6×10-2+15.011C，計算樣品中黃酮類化合物的含量為8.36 mg/g。3.1.4 回收實驗精密量取樣品液1.0 ml，加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對照品1.0 ml (0.1 mg/ml)，同“3.1.3”方法操作測定吸光度，求出平均回收率為99.56%。3.2 定性實驗-黃酮類化合物的鑒別3.2.1 顏色反應(yīng)乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點在

12、濾紙上，滴加1%乙酸鎂（指質(zhì)量濃度）的甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液2 ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴(1次加入)，在泡沫處呈紫紅色。三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%三氯化鋁（指質(zhì)量濃度）的乙醇溶液，吹干，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏2.0 min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。3.2.2 紙層析取樣品溶液15 l點在濾紙上。用正丁醇醋酸水=415 為展開劑，上行

13、展開3.0 h，取出晾干。噴1%氯化鋁的乙醇溶液，吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。4 討論黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價值。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它衍生物還有黃烷醇、查爾酮、雙氫黃(醇)、雙黃酮、異黃酮、花色苷、橙酮及新黃酮類等10。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，進入脂肪組織，進而體現(xiàn)出諸多功能，如消除疲勞、保護血管、防止動脈硬化、擴張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抵抗脂肪氧化、抗擊衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞等功能。此外，黃酮類化合物還具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、

14、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用11。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然、低毒、綠色、可再生等特點備受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用已越來越引起人們的注目。我國馬鞭草資源十分豐富，分布也極為廣泛。本實驗結(jié)果表明，馬鞭草體內(nèi)富含黃酮類化合物，采用超聲波乙醇浸提法，可以達(dá)到省時、高效、節(jié)能的目的，提取效率高于傳統(tǒng)方法，樣品的平均回收率達(dá)99.56 %；而且利用該法提取、純化得到的黃酮類化合物，其產(chǎn)率和純度均很高；再者本方法采用全物理過程，無任何污染，因此是一條理想的提取黃酮類化合物途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。   

15、0;【參考文獻】  1張立衛(wèi)，羅玉梅. 馬鞭草臨床應(yīng)用近況J. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，23(3)：351.2陳改敏，張建業(yè)，洪廣峰，等. 馬鞭草中總黃酮的含量測定J. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006,23(8)：798.3肖培根. 新編中藥志，第3卷M. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2002：32.4焦中秀，徐小晶，周菁，等. 馬鞭草醇提液對絨毛膜癌JAR細(xì)胞增殖的影響J.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1999，25(5)：378.5張濤，謝虹，李萬. 馬鞭草提取物抗大鼠早孕作用的實驗研究J.中國中醫(yī)藥科技, 2001, 8(5)：313.6劉玉琴. 中西醫(yī)結(jié)合治療女性免疫不孕645例效果分析J.中原醫(yī)刊，2004, 31(18)：32.7嚴(yán)偉，李淑芬，田松江. 超