1、霉菌毒素的控制/檢測方法以及解決方案控制飼料原料中霉菌毒素的辦法控制飼料原料中霉菌毒素的辦法 農作物的耕種農作物的耕種: 種植對霉菌有抵抗力的品種種植對霉菌有抵抗力的品種 使用有效的昆蟲控制方法使用有效的昆蟲控制方法 維持好的灌溉系統維持好的灌溉系統 實行良好的耕作實行良好的耕作, 農作物輪換農作物輪換, 雜草控制雜草控制 收割時收割時: 適當的收割時間適當的收割時間 迅速降低水份迅速降低水份 除去多余的雑質除去多余的雑質 收獲后及儲藏收獲后及儲藏: 保護儲藏的原料保護儲藏的原料/產品不被水份產品不被水份, 昆蟲昆蟲, 及其它環境因素的侵害及其它環境因素的侵害 保存原料保存原料/產品在干燥干凈

2、的表面產品在干燥干凈的表面 測試所有要使用的原料的霉菌毒素測試所有要使用的原料的霉菌毒素 貯存桶及管路的定期清理貯存桶及管路的定期清理 先進先出先進先出 收獲后收獲后, 加工加工, 制造制造: 測試所有要使用的原料及成品的霉菌毒素測試所有要使用的原料及成品的霉菌毒素 監控加工過程以維持高品質的產品監控加工過程以維持高品質的產品 貯存桶及加工設備的定期清理貯存桶及加工設備的定期清理 依照依照GMP程序程序控制飼料原料中霉菌毒素的辦法 飼喂動物飼喂動物: 保存產品在干燥干凈的表面保存產品在干燥干凈的表面 先進先出先進先出 貯存桶及飼喂系統的定期清理貯存桶及飼喂系統的定期清理 水槽的定期清理水槽的定

3、期清理 墊料墊料控制飼料原料中霉菌毒素的辦法如何解決霉菌毒素的危害？如何解決霉菌毒素的危害？霉菌毒素的預防霉菌毒素的預防1 控制飼料原料的質量。關鍵在于嚴格控制控制飼料原料的質量。關鍵在于嚴格控制原料的含水量，一般要求玉米、高粱、稻原料的含水量，一般要求玉米、高粱、稻谷等的含水量應不超過谷等的含水量應不超過14%；大豆及其餅粕、；大豆及其餅粕、麥類、糠麩類、甘薯干、木薯干等的含水麥類、糠麩類、甘薯干、木薯干等的含水量應不超過量應不超過13%；棉籽餅粕、菜籽餅粕、向；棉籽餅粕、菜籽餅粕、向日葵餅粕、亞麻仁餅粕、花生仁餅粕、魚日葵餅粕、亞麻仁餅粕、花生仁餅粕、魚粉、骨粉及肉骨粉等的含水量應不超過粉

4、、骨粉及肉骨粉等的含水量應不超過12%。霉菌毒素的預防霉菌毒素的預防2 預防：預防： 使用優質防霉劑，預防原料或成品使用優質防霉劑，預防原料或成品飼料霉變。飼料防霉劑種類很多，目前使飼料霉變。飼料防霉劑種類很多，目前使用最廣泛的是丙酸及其鹽類（包括丙酸鈉、用最廣泛的是丙酸及其鹽類（包括丙酸鈉、丙酸鈣、丙酸銨和二丙酸銨）、山梨醇及丙酸鈣、丙酸銨和二丙酸銨）、山梨醇及其鹽類、雙乙酸鈉等是常用的防霉劑。飼其鹽類、雙乙酸鈉等是常用的防霉劑。飼料一旦污染應使用有效的霉菌毒素吸附劑。料一旦污染應使用有效的霉菌毒素吸附劑。霉菌毒素的控制霉菌毒素的控制1) 物理、化學處理法物理、化學處理法2）生物轉化法）生物

5、轉化法3）吸附法（霉菌毒素吸附劑）吸附法（霉菌毒素吸附劑）霉菌毒素的脫毒霉菌毒素的脫毒 物理化學方法？物理化學方法？方便性如何？方便性如何？適口性如何？適口性如何？吸附劑法吸附劑法 為了減少損失， 很多學者采用一些物質作為霉菌毒素的吸附劑來處理霉變飼料， 即在飼料中添加可以吸附霉菌毒素物質， 使毒素在經過動物腸道時不被動物所吸收， 直接排出體外。例如：甘露低聚糖，水合鋁硅酸鹽類，膨潤土，蒙脫石等。市場上霉菌毒素吸附劑產品主要類型市場上霉菌毒素吸附劑產品主要類型 黏土類吸附劑；黏土類吸附劑； 酵母細胞壁提取物；酵母細胞壁提取物； 酶解毒劑；酶解毒劑； 微生物解毒劑；微生物解毒劑； 中草藥制劑；中

6、草藥制劑； 硅及鋁 地球上最豐富的礦物質 不同的硅及鋁組合造成不同的粘土類粘土類吸附劑是自然礦產 粘土類吸附劑都帶負極 硅鋁酸鹽硅鋁酸鹽Aluminosilicates高嶺土高嶺土(1:1): 水合硅鋁酸鹽水合硅鋁酸鹽Al2(Si2O5)(OH)8 延展性差延展性差, 帶負極帶負極沸石粉沸石粉:水合硅鋁酸鹽水合硅鋁酸鹽Na2Al2Si3O10.2H2O 火山灰火山灰,可能污染許多礦物質及重金屬可能污染許多礦物質及重金屬 結構像蜂窩結構像蜂窩-分子篩分子篩, 可吸引大小適當帶負極的可吸引大小適當帶負極的分子分子 最常用在濾水器的濾芯最常用在濾水器的濾芯膨潤土膨潤土 (2:1):Montmoril

7、lonites, Sodium and calcium bentonites (Na,Ca)X(Al,Mg)2Si4O10(OH)2.nH2O 火山灰類的天然礦產火山灰類的天然礦產 水合鈣鈉硅鋁酸鹽水合鈣鈉硅鋁酸鹽 延展性比較好延展性比較好,吸水后膨脹吸水后膨脹 增加飼料流動性增加飼料流動性膨潤土如何吸附黃曲霉菌毒素膨潤土如何吸附黃曲霉菌毒素H2O: 高極性OOOOCH3OOAflatoxin B1膨潤土如何吸附黃曲霉菌毒素膨潤土如何吸附黃曲霉菌毒素Divalent InterlayercationsCa+Na+orOOOOOOCH3粘土類吸附劑的局限性粘土類吸附劑的局限性 添加劑量高添加劑量

8、高 (1-3%) 吸附力取決于分子大小及帶正價的分子吸附力取決于分子大小及帶正價的分子 只能吸附帶極性的黃曲霉毒素只能吸附帶極性的黃曲霉毒素 但是也吸附礦物質但是也吸附礦物質, 例如錳例如錳, 鋅鋅, 鎂鎂 (Chestnut et al. 1992), 銅及鈉銅及鈉 (Kramer 1993), 尤其是使用量尤其是使用量 0.5% 對吸附嘔吐毒素對吸附嘔吐毒素, T-2毒素毒素, 玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮 (Orr et al. 1988; Kubena et al. 1998), 赭曲霉毒素赭曲霉毒素A (Huff et al. 1992), 蛇形菌毒素蛇形菌毒素 (Kubena et a

9、l. 1993), 高羊茅毒素高羊茅毒素 (Chestnut et al. 1992)無效無效 可能有二惡英可能有二惡英(dioxins)及重金屬的污染及重金屬的污染 對環保有負面的影響對環保有負面的影響吸附劑法的缺陷吸附劑法的缺陷酶法分解霉菌毒素酶法分解霉菌毒素OOOOOOCH3OOOOOOCH3OHOOOOOOCH3OOOOOOCH3OHOO黃曲霉毒素 B1黃曲霉毒素 B2黃曲霉毒素 G1黃曲霉毒素 G2使用酶分解黃曲霉毒素一種酶可能可以分解所有的單端孢霉烯類毒素單端孢霉烯類毒素(Trichothecenes)O OC HC H3 3H HO OO HO HO OO HO HZearale

10、noneN NO OO HO HFusaric acidH O O CH O O CC O O HC O O HH H3 3C CC HC H3 3O OO OC HC H3 3O HO HO HO HO HO HN HN H2 2O OO OC O O HC O O HH O O CH O O CC HC H3 3Fumonisin B1需要同時含有多種的酶但是還有其他的但是還有其他的霉菌毒素霉菌毒素黃曲霉毒素萎蔫酸Penicillic AcidAlternariolFusariocinPenitremCitreoviridinFusarinsPhomopsin桔霉素Islanditoxin

11、Roridins環匹克尼酸LuteoskyrinRubratoxin嘔吐毒素串珠鐮刀菌毒素Slaframine蛇形菌毒素MonoacetoxyscirpenolDicoumarolNeosolaniolSlaframineStachbotryotoxinsErgotamine赭曲霉毒素SterigmatocystinErgo ToxinsOosporeinT-2毒素FumitremorgenPaspalitremsTremorgens煙曲霉毒素Patulin玉米赤霉烯酮 還有其他300多種, 可能還有數千種未知的霉菌毒素.酶分解霉菌毒素的局限性酶分解霉菌毒素的局限性酵母細胞壁提取物酵母細胞壁提

12、取物改性的葡聚糖利用酵母細胞壁內的葡萄糖甘露聚糖的化學結構與同樣屬于有機類的霉菌毒素的親和性，吸附霉菌毒素。類似于肥皂去油的原理，為表面親和吸附。 改性的葡聚糖的三維螺旋結改性的葡聚糖的三維螺旋結構構改性甘露聚糖改性甘露聚糖-黃曲霉毒素黃曲霉毒素黃曲霉毒素甘露聚糖其他毒素與它的吸附方式其他毒素與它的吸附方式乳酸菌對于霉菌毒素的作用乳酸菌對于霉菌毒素的作用 乳酸菌對于霉菌毒素的去除的作用是目前在食品和人類營養方面一個嶄新的課題。目前主要集中在黃曲霉毒素AFb1上。已經有大量研究證實了一些乳酸菌能夠很好去除黃曲霉毒素，可能還有其他毒素（參見隨附的參考文獻）。霉菌毒素檢測方法霉菌毒素檢測方法n飼料中

13、霉菌及霉菌毒素的檢測方法主要有目測法、 薄層色譜法(T LC) 、 高效液相色譜法(HP LC) 、 酶聯免疫法(E LISA) 、 放射免疫法(KIA)及氣相色譜法等。n快速試紙檢測法 薄層層析法薄層層析法(TLC)n T LC法是我國測定食品及飼料中霉菌毒素的國家標準方法是我國測定食品及飼料中霉菌毒素的國家標準方法之一法之一 ,其原理是針對不同的樣品其原理是針對不同的樣品 ,用適宜的提取溶劑將霉用適宜的提取溶劑將霉菌毒素從樣品中提取出來菌毒素從樣品中提取出來 ,經柱層析凈化經柱層析凈化 ,再在薄層板上層再在薄層板上層析展開、析展開、 分離分離 ,利用霉菌毒素的熒光性利用霉菌毒素的熒光性 ,

14、根據熒光斑點的根據熒光斑點的強弱與標準比較測定其最低含量。強弱與標準比較測定其最低含量。n T LC法由于設備簡單法由于設備簡單 ,易于普及易于普及 ,所以國內外仍在使用所以國內外仍在使用 ,但但該法樣品前處理繁瑣該法樣品前處理繁瑣 ,且提取和凈化效果不夠理想且提取和凈化效果不夠理想 ,提取液提取液中雜質較多中雜質較多 ,在展開時影響斑點的熒光強度在展開時影響斑點的熒光強度 ,而雙向展開雖而雙向展開雖避免了雜質干擾，但增加了操作步驟和時間避免了雜質干擾，但增加了操作步驟和時間(葉雪葉雪珠珠 ,2003) 。 液相色譜法液相色譜法(HPLC) HPLC法是近幾年發展起來的檢測霉法是近幾年發展起來

15、的檢測霉菌毒素的方法，主要是用熒光檢測器菌毒素的方法，主要是用熒光檢測器檢測檢測 。在適宜的流動相條件下，采用。在適宜的流動相條件下，采用反相反相C18柱柱 ，使霉菌毒素同時分離。，使霉菌毒素同時分離。用用 HPLC 法檢測，最低檢出量法檢測，最低檢出量0. 08 ng ，回收率為，回收率為 92. 87 % 。該法快速。該法快速而準確而準確 ,但需要昂貴的儀器設備但需要昂貴的儀器設備 。 酶聯免疫法酶聯免疫法(ELISA)n ELISA 法是法是1971年提出的?；驹硎窃诤线m的年提出的?；驹硎窃诤线m的載體上載體上 ,酶標記抗體或抗原與相應的抗原或抗體形酶標記抗體或抗原與相應的抗原或抗

16、體形成酶標記的抗原抗體復合物成酶標記的抗原抗體復合物 ,在酶底物參與下在酶底物參與下 ,復復合物上的酶催化底物使其水解合物上的酶催化底物使其水解 ,氧化或還原成為另氧化或還原成為另一種帶色物質。可用分光光度計進行測定一種帶色物質。可用分光光度計進行測定 ,從而可從而可計算出參與反應的抗原和抗體的含量計算出參與反應的抗原和抗體的含量(楊利楊利國國 ,1998) 。該免疫學方法更實際。該免疫學方法更實際 ,其靈敏度與其靈敏度與 TLC 或或 HPLC 法相當或更高法相當或更高 ,因而具有更廣闊的因而具有更廣闊的應用前景。應用前景。n 該法由于快速、該法由于快速、 靈敏、靈敏、 準確、準確、 可定量

17、、可定量、 操作簡便、操作簡便、 無需貴重儀器設備無需貴重儀器設備 ,且對樣品純度要求不高等特性且對樣品純度要求不高等特性 ,特別適用于大批量樣品的檢測。特別適用于大批量樣品的檢測。金標快速試紙條檢測原理金標快速試紙條檢測原理l試劑含有被事先固定于膜上測試區（試劑含有被事先固定于膜上測試區（T）的）的AFB1-BSA偶聯物和被膠體金標記的抗偶聯物和被膠體金標記的抗AFB1特異性抗體。特異性抗體。l測試時，樣品滴入試劑盒孔內，如測試時，樣品滴入試劑盒孔內，如AFB1在樣品中濃度在樣品中濃度低于低于5ng/ml時，膠體金抗體不能與時，膠體金抗體不能與AFB1全部結合。這全部結合。這樣，膠體金抗體在

18、層析過程中會被固定在膜上的樣，膠體金抗體在層析過程中會被固定在膜上的AFB1-BSA偶聯物結合，在測試區（偶聯物結合，在測試區（T）內會出現一條）內會出現一條紫紅色紫紅色條帶。如果條帶。如果AFB1在樣品中濃度高于在樣品中濃度高于5ng/ml時，膠體金時，膠體金抗體與抗體與AFB1全部結合，從而在測試區（全部結合，從而在測試區（T）內因為競）內因為競爭反應不會與爭反應不會與AFB1-BSA偶聯物結合而不出現紫紅色偶聯物結合而不出現紫紅色條帶。條帶。檢測時間短，從樣品處理到檢測不到半小時。檢測時間短，從樣品處理到檢測不到半小時。采用無毒無害的乙酸乙酯為霉毒素提取劑，提取時短、采用無毒無害的乙酸乙酯為霉毒素提取劑，提取時短、溶劑易于去除，改變了傳統脫溶劑長且污染環境和危害溶劑易于去除，改變了傳統脫溶劑長且污染環境和危害操作人員的健康等缺點。操作人員的健康等缺點。不需紫外光源、專用檢測儀和專業人員，適用于現場和不需紫外光源、專用檢測儀和專業人員，適用于現場和基層單位?；鶎訂挝?。操作簡單、結果準確，可逐份檢測，故成本低。操作簡單、結果準確，可逐份檢測，故成本低。 試劑穩定，室溫保存，有效期長（至少一年半）。試劑穩定，室溫保存，有效期長（至少一年半）。 金標試紙法快速檢測的優勢金標試紙法快速檢測的優勢理想的霉菌毒素吸附劑理想的霉菌毒素吸附劑具有吸附不同種