1、實驗一大黃中游離蒽醌的提取與分離和鑒定實驗編號：1日期：學時數：6學時地點：任課教師：實驗目的：掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法實驗原理：大黃中有多種游離蒽醌及其苷類，總含量約2-5%。主要有大黃 酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚以及它們的葡萄糖苷等。從大黃中提取分離游離蒽醌時，先用20%硫酸加熱使苷類水解，保留濾餅， 濾餅用乙醚加熱回流提取總蒽醌苷元（游離蒽醌），提取液作TLC鑒識。實驗對象：大黃主要儀器、試劑：電熱套、燒杯、20%硫酸、薄層硅膠G、0.5%CMC-Na 實驗操作步驟：酸水解：取大黃10g ,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml， 水浴上加熱3-4小時,抽濾,濾餅

2、水洗后自然干燥。鋪薄層硅膠G板:薄層硅膠G ：0.5%CMC-Na（1：3）實驗注意事項：加熱溫度不要太高。溶液保持微沸，防止藥渣炭化。不斷攪拌。后記：實驗一大黃中游離蒽醌的提取與分離和鑒定實驗編號：2日期：學時數：6學時地點：任課教師：實驗目的：1.掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。2. 掌握蒽醌類的色譜鑒別方法。實驗原理：大黃中有多種游離蒽醌及其苷類，總含量約2-5%。主要有大黃 酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚以及它們的葡萄糖苷等。從大黃中提取分離游離蒽醌時，先用20%硫酸加熱使苷類水解，保留濾餅， 濾餅用乙醚加熱回流提取總蒽醌苷元（游離蒽醌），提取液作TLC鑒識。實驗對象

3、：大黃濾餅主要儀器、試劑：電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、乙醚、硅膠薄層板、石油醚、乙酸乙酯實驗操作步驟:總羥基蒽醌苷元的提取：取干燥濾餅，放入100ml圓底燒瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3-4小時，得乙醚提取液。乙醚提取液經薄層層析檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚。薄層板為硅膠G-CMC-Na展開劑為石油醚（60-90 C）- 乙酸乙酯（7:3），直立展開。實驗注意事項：加熱回流時電熱套電壓小于 50v。控制點樣量，取石油醚（60-90 C） 7ml,乙酸乙酯3ml,混合均勻 注意點樣斑點位置。仔細觀察斑點、溶劑前沿移動距離。后記：結論：在可見光下可看到 4個斑點，Rf最大

4、的黃色斑點為大黃酚和 大黃素甲醚的混合物，其余 3個斑點依Rf由大到小分別為大黃素(橙色 斑點)，蘆薈大黃素(黃色斑點)，大黃酸(黃色斑點【實訓目的】1 、 能夠運用回流提取法對大黃中總蒽醌類化合物進行提取2、 能夠熟練運用 pH梯度萃取法對大黃中游離蒽醌進行分離.3、 正 確 判 斷 顯 色 反 應、 薄 層 色 譜 的 結 果【實訓原理】大黃中含有大黃素型游離蒽醌及其苷類，本實訓利用大黃中的蒽醌類化合物均可溶于乙醇而提取根據游離蒽醌及蒽醌苷在水和乙醚中溶解度的不同采用萃取方法分離游離蒽醌的分離是利用各羥基蒽醌類化合物酸性不同，采用 pH 梯度萃取法進行 【實訓材料】圓底燒瓶、冷凝管、研缽、

5、水浴鍋、分液漏斗、燒杯、三角瓶、表面皿、試管、層析缸、pH試紙薄層硅膠、CMC-Na大黃粗粉、95%乙醇、乙醚、鹽酸、三氯甲烷、5%KOH5%Na2CO35%NaHCO30.5%NaOH 新華色譜濾紙(20cm x 7cm)、苯-醋酸乙酯(8 : 2)、苯-甲醇(8 : 1)、甲苯、氨0.5%醋酸鎂、1%大黃酸三氯 甲烷溶液、1%大黃素三氯甲烷溶液、1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液【實訓步驟】1 、乙醇總提取物的制備游離蒽醌的提取 取大黃粗粉50g,置于500ml圓底燒瓶中，加95%乙醇以約高出生藥面為度，置水浴加熱回流23小時，趁熱抽濾.濾渣再以95%乙醇熱提二次，趁熱抽濾后合并三次乙醇提取液 .

6、濃縮乙醇 提 取 液 ，得 到 乙 醇 總 提 取 物 .2 、 總游離蒽醌的提取，親脂性成分與親水性成分分離將乙醇總提取物浸膏加水適量混懸 ，加乙醚150ml于500ml分液漏斗中萃取，充分振蕩后放置，傾 出醚層，再加50ml乙醚振搖，放置，傾出醚層,同法操作6次,直至乙醚液呈色較淺時為止 ，合并乙醚液，乙 醚溶液含總游離蒽醌.3 、蒽醌單體的分離大黃酸的分離將含有游離蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中，加5%NaHCO水溶液20ml,振搖.放置分層,放出下層NaHCO3§液，置于另一三角瓶中，上層乙醚溶液留存于分液漏斗中，再加5%NaHCO溶液15ml萃取一次，每次振搖提取

7、后，放置分層時間應稍久，以免乙醚溶液混在下層水液中，影響分離效果.提取過程中,如乙醚揮發,可酌量補加合并NaHCO醍取液,注意其呈色,在攪拌下小心滴加鹽酸調pH23,觀察酸化過程中的呈色變化，析出物抽濾收集，干燥后稱重大黃素的分離留存在分液漏斗中的乙醚液 ,用5%Na2CO水溶液每次1520ml如上法相同萃取數次,直至提取液 呈色較淺時為止，約需67次，合并Na2CO3提取液，小心滴加鹽酸酸化至 pH23,放置待沉淀析出，抽濾收 集析出物經水洗滌，抽干移至表面皿上，干燥后稱重蘆薈大黃素的分離留存在分液漏斗中的乙醚液 ，用0.5%NaOH水溶液每次15ml萃取34次.乙醚溶液再以蒸餾水萃 取23

8、次,以洗去堿液合并NaOH和水的提取液，加鹽酸調pH23,放置.抽濾析出沉淀，收集沉淀，經水洗， 抽 干 移 至 表 面 皿 上 ， 干 燥 后 稱 重 大 黃 酚 和 大 黃 素-6-甲 醚 的 分 離留存的乙醚液，置圓底燒瓶中，回收乙醚,放置抽濾收集沉淀，經水洗，抽干移至表面皿上，干燥后 稱重4 、鑒定(1) 堿液試驗：分別取蒽醌化合物結晶少許 ，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數滴5%氫氧化鉀試劑振搖，溶液呈紅色(2) 醋酸鎂試驗：分別取各蒽醌化合物結晶少許 ，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數滴0.5%醋酸鎂試劑，產生橙、紅、紫等顏色薄層檢識吸 附 劑 ： 硅 膠CMC-Na 薄 層 板

9、樣 品： 各 蒽 醌 成 分 的 1% 三 氯 甲 烷 溶 液對照品:1%大黃酸三氯甲烷溶液;1%大黃素三氯甲烷溶液;1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液 展開劑：苯-醋酸乙酯 (8:2); 苯-甲醇(8:1)顯色：氨熏后觀察或噴 5%氫氧化鉀溶液后觀察 紙色譜檢識支 持劑：新 華 色 譜濾 紙(中 速、 20cm x 7cm) 樣 品 ： 各 蒽 醌 成 分 1% 三 氯 甲 烷 溶 液對照品：1%大黃酸三氯甲烷溶液;1%大黃素三氯甲烷溶液;1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液 展開劑：甲苯顯 色 劑 ：0.5% 醋 酸 鎂 甲 醇 溶 液【實訓思考】1、在實訓過程中采用pH梯度萃取法分離游離蒽醌，萃取過程中若

10、出現乳化現象，應如何處理 ？2、 大黃酚和大黃素甲醚結構相似，請設計分離方法3、實訓中應注意哪些安全問題？實驗二蘆丁的提取及鑒定實驗編號：1日期：學時數：8學時地點：新校區F樓6樓天然藥物化學實驗室任課教師：實驗目的：學習和掌握用堿提取一酸沉淀提取黃酮苷的原理和方法。實驗原理：槐米中有黃酮苷一蕓香苷（蘆丁），蕓香苷（蘆丁）是由槲皮 素與蕓香糖連接而成的二糖苷，能溶于熱水。本試驗采用堿提取 一酸沉淀 提取蕓香苷。實驗對象：槐米主要儀器、試劑：電熱套、燒杯、石灰水、PH式紙、抽濾瓶。實驗操作步驟:1.提取：槐花米一粉碎一堿水提取一加酸沉淀-放置一 粗品蘆丁 一精制一蘆丁 （純品）。2. 粉碎:稱槐

11、米40克，粉碎。3. 堿提:在1000ml燒杯中加入500ml蒸餾水，加熱煮沸后，將槐米粗粉投入，繼續直火煮沸2-3分鐘，在攪拌下，加入石灰乳，調PH8-9,加熱保持微沸30分鐘，趁熱過濾收集，濾渣加160ml蒸餾水，加入 石灰乳，調PH8-9,同上操作再提一次，濾液合并，濾渣棄去。4. 酸沉:將濾液在60-70 C,小心加濃HCL調PH3-4,放6小時以上，析出沉淀。實驗注意事項：堿提時加入石灰乳調PH8-9,不要太高。 溶液保持微沸。 酸化時將濾液在60-70 C,小心加濃HCL調PH3-4,不要太低。后記：實驗二蘆丁的提取及鑒定（精制）實驗編號：2日期：學時數：8學時地點：新校區F樓6樓

12、天然藥物化學實驗室任課教師：實驗目的：粗品蘆丁的精制實驗原理：粗品蘆丁能溶于熱水，去除不溶性雜質，最后用甲醇重結晶。實驗對象：粗品蘆丁主要儀器、試劑：電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、甲醇實驗操作步驟：精制：粗品蘆丁放在1000ml燒杯中，加500ml蒸餾水，加熱煮沸，至全部溶解，趁熱抽濾，濾液放冷，即析出黃色沉淀，待沉淀完全后，抽濾，收集沉淀，干燥。用甲醇重結晶，得精品蘆丁。實驗注意事項：（1）用甲醇重結晶時加熱回流時電熱套電壓小于 50v（2）粗品蘆丁全部溶解，趁熱抽濾。（3）重結晶時甲醇的用量應適當，用量過多，則結晶不易析出；用量過少，又會帶入較多的雜質。后記：實驗二蘆丁的提取及鑒定實驗編號：3

13、日期：學時數：8學時地點：新校區F樓6樓天然藥物化學實驗室任課教師：實驗目的：（1）蘆丁的水解，鑒定；（2）掌握黃酮類成分的主要性質及黃酮苷、苷元和糖的鑒定方法。實驗原理：，實驗對象：精品蘆丁主要儀器、試劑：電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、甲醇、正丁醇、醋酸、葡萄糖、鼠李糖、鹽酸、鎂粉、醋酸鎂、醋酸鉛、氧氯化鋯、三氯化鋁實驗操作步驟：1.水解：取1克蘆丁加1%HSQ100ml與燒杯中，加熱微沸，30分鐘，開始為澄清，逐漸析出黃色針狀結晶，待沉淀完全后，抽濾，收 集沉淀，水解母液留作糖的紙層析鑒定。2.蘆丁、槲皮素的鑒定：（1） 糖的檢出圓形濾紙層析取水解蘆丁的濾液20ml，加Ba（QH歸細粉中和至p

14、H7,濾除生成的BaSQ 白色沉淀，濾液在水浴上小心濃縮近干（約 1ml）注意防止炭化，加甲醇 5ml,作為檢識糖的樣品溶液。展開劑：正丁醇-醋酸-水（4-1-5上層）。對照品：葡萄糖、鼠李糖（各 2mg分別溶于2ml甲醇中）展開方式：徑向展開顯色劑：苯胺鄰苯二甲酸鹽試劑（或，鄰苯甲酸苯胺），噴霧后，105C 加熱35分鐘，有糖處顯棕色或棕紅色斑點。（2）化學方法鑒別黃酮類成分a. 鹽酸-鎂粉反應b. 醋酸鎂反應c. 醋酸鉛沉淀反應d. 氧氯化鋯e. 點滴反應圓形濾紙層析點樣量不要太多實驗注意事項：糖的檢出后記:實驗三氧化苦參堿的提取分離與純制實驗編號：1實驗日期：實驗地點：任課教師：學時數：

15、2+8實驗目的：掌握滲漉法和離子交換法提取生物堿的方法和原理實驗原理：1.生物堿溶于酸水2.陽離子交換樹脂提取、分離生物堿實驗對象：苦參主要儀器、試劑：滲漉筒、燒杯、玻璃棒陽離子交換樹脂柱、陽離子交換樹脂、pH試紙、培養皿0.5%鹽酸、碘化鉍鉀、蒸餾水主要操作步驟：總堿的提取：（1）酸水提取：稱取250g風干粉碎的苦參中加入適量0.5%的鹽酸液，使 其浸沒藥料，充分濕潤，放置一小時。將如上酸水浸泡好的藥材及溶液裝入滲 漉筒，待全部加完，繼續補充加入 0.5%的鹽酸液，浸過藥面，放置過夜（此步 驟在實驗前一天提前完成）。繼續加入0.5%的鹽酸液或蒸餾水，（當滲漉液的酸性過大，改加蒸餾水滲 漉，將

16、滲漉液的pH控制在3-4之間）以1mL/min的流速進行滲漉，收集滲漉液 約3750MI,到滲漉液生物堿反應微弱為止。（2）交換：將上述滲漉液pH控制在3-4之間，上柱交換，流速自快至慢， 流出液要經常以碘化鉍鉀檢查，如發現有未被交換的生物堿流下時，可調整流 速繼續進行交換，待滲漉液全部通過樹脂后，把樹脂倒入燒杯中，用蒸餾水洗 滌數次，除去非陽離子雜質，然后濾干，放入大培養皿中自然干燥。實驗注意事項：裝滲漉筒時，藥材應壓實，盡趕空氣，滲漉筒切勿走干。當滲漉液的酸性過大，改加蒸餾水滲漉，將滲漉液的pH控制在3-4之間。如發現有未被交換的生物堿流下時，可調整流速繼續進行交換。離子交換樹脂柱切勿走干

17、。后記：（教學體會、學生對教學內容的反應等）實驗編號：2實驗日期：學時數：8實驗地點：任課教師：實驗目的：學習索氏提取器的使用方法實驗原理：1.生物堿堿化后，溶于氯仿2.索氏提取器氯仿連續提取將生物堿從陽離子交換樹脂上洗脫下來實驗對象：交換了生物堿的陽離子交換樹脂主要儀器、試劑：索氏提取器、燒杯、水浴鍋陽離子交換樹脂、圓底燒瓶、冷凝管、漏斗、濾紙濃氨水、氯仿、丙酮主要操作步驟：總堿的提取：（1）總堿洗脫：將晾干后的樹脂放入燒杯中，加濃氨水20mL充分攪勻，使濕潤度合 適，（樹脂充分膨脹，但又無不吸收的過剩水份溢出）蓋好，靜置20分鐘后，裝入索氏提取器中，用300mL氯仿在水浴上回流洗脫，至 提

18、盡生物堿為止。回收氯仿，盡力抽干。殘剩物用2-3倍量丙酮溶解， 盡快出現結晶，放置一定時間，過濾，得氧化苦參堿粗晶，（實際是 總堿）用丙酮重結晶一次，得精品。實驗注意事項：加濃氨水20mL充分攪勻，使濕潤度合適，使樹脂充分膨脹，但又無不吸 收的過剩水份溢出。索氏提取器使用時要小心，易碎裂。后記：（教學體會、學生對教學內容的反應等）實驗編號：3實驗日期：學時數：8實驗地點： 任課教師： 實驗目的：學習使用AbQ薄層、柱層析法分離鑒定生物堿的方法 實驗原理：生物堿可以采用ALQ薄層、柱層析法分離 實驗對象：總堿粗品，AhO薄層，AI2Q柱層析主要儀器、試劑：層析柱、棉花、點滴板、試管、玻璃板、毛細管、Al2Q、碘化鉍鉀、圓底燒瓶、冷凝管、漏斗、濾紙甲醇、氯仿、丙酮主要操作步驟：氧化苦參堿的分離與純制：取一根洗凈干燥的1:45的層離柱，在下端塞一點棉花，倒入一些氯仿，使 棉花濕潤，并放出氯仿液，以趕盡氣泡后，緩緩加入30g氧化鋁，以氯仿作媒介濕法裝柱，最后加入拌有200mg氧化苦參堿精品，薄層檢查兩個點的少量氧 化鋁，再放入一點棉花，先用 30mL氯仿，后用氯仿：甲醇（99： 1 ）的混合溶