1、產黃青霉生長曲線的測定一、實驗目的1、掌握測定生長繁殖的基本原理與幾種方法。2、掌握微生物的典型生長曲線。二、實驗原理測定微生物生長繁殖的方法主要可分為兩大類。一）測生長量法，適用于一切微生物。 1、直接法：包括測體積法、稱干重法等。 2、間接法：包括比濁法、生理指標法。二）計量繁殖數法，只適用于單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子。 1、直接法：比例記數法、血球計數板法。2、間接法：液體稀釋法、平板菌落計數法等。產黃青霉是工業上用于發酵生產青霉素的重要絲狀真菌，其發酵產物在臨床應用和醫藥工業中占有極其重要的地位。菌絲量是菌體細胞內部生長信息最直接的反映，是微生物發酵過程中重要的生化參數

2、。青霉素發酵過程中菌體量的測定，對于其動力學研究和建模控制都具有很重要的意義。根據菌絲量可以確定合適的補料量、供氧量和合適的生長環境，以及合適的提取時機，從而有利于大量生產抗生素。當少量純種單細胞微生物接種到恒容積的液體培養基中后，在適宜的溫度、通氣等條件下，它們的群體就會有規律的生長起來。如果以細胞數目的對數值作縱坐標，以培養時間為橫坐標，就可以畫出一條有規律的曲線，這就是微生物的典型生長曲線根據微生物的生長速率常數，即每小時的分裂代數的不同哦，般可把典型生長曲線粗分為延滯期、指數期、穩定期和衰亡期等四個時期。三、實驗材料1、菌種產黃青霉 (Pencillium chrysogenum)。2

3、、培養基發酵培養基各組分：乳糖22.5g,葡萄糖7.5g,醋酸銨3.0g,乳酸銨 5.0g，Na2SO4 0.5g，MgSO4?7H2O 0.25g，FeSO4?7H2O 0.1g，CuSO4?5H2O 0.005g， MnSO4?7H2O 0.02g， CaCl2?2H2O 0.05g，ZnSO4?7h2O 0.02g,苯乙酸 1.0g,蒸餾水 1000ml, pH 6.5, 121 C滅菌 20min。注意：微量元素配成母液,按需要加入,苯乙酸用乙醇溶解后再加入。3、器材超凈臺,培養箱,天平,干燥箱玻璃漏斗,定量濾紙等。四實驗方法與步驟1. 離心法將待測培養液放入離心管中, 用清水離心洗滌

4、 1-5 次后(3000rpm,10min),進行干燥。干燥溫度可采用100度，105度或紅外線烘干,也可在較低溫度下( 80 或 40 度)真空干燥。然后稱重。2.過濾法絲狀真菌可采用濾紙過濾，而細菌可采用醋酸纖維素膜等濾膜過濾。過濾后，細胞可用少量水洗滌，然后在40度下真空干燥，稱量干重。五.實驗內容1每個大組接種三個培養基，并設一個空白對照瓶。2.按照不同的培養時間，6h,12h,36h,72h,144h,168h從三角瓶中取樣,六.實驗結果60.04655120.05915360.1077720.08251440.10591680.12841系列1七.思考題次生代謝產物的大量積累發生在那個時期？根據微生物生長繁殖的 規律，采用哪些措施可使次生代謝產物積累更多？ 答：穩定期1. 補加前體類似物2. 加誘導物3. 防止碳代謝阻遏或抑制的發生4. 防