1、效液相色譜法同時測定益津降糖口服液中人參皂苷Rg1及Re總皂苷的含量    【摘要】     目的測定了益津降糖口服液中人參皂苷Rg1及Re的含量。方法用高效液相色譜法，以ODS C18柱（150 mm×4.6 mm，5 m）為固定相，乙腈-0.05%磷酸溶液（99400）為流動相，檢測波長為203 nm，流速為1.0 ml·min-1。結果人參皂苷Rg1在0.166.4 g范圍內，人參皂苷Re在1.2254.9 g范圍內呈現良好線性關系，相關系數Rg1：r = 0.999 9；r=0

2、.999 6。平均加樣回收率Rg1=96.63%；Re=95.20%，Rg1的RSD為1.34%（n=6）；Re的RSD為1.14%（n = 6）。結論 方法簡便、準確、重復性好。     【關鍵詞】  益津降糖 人參皂苷Rg1 人參皂苷Re 高效液相色譜法 含量測定    益津降糖口服液是吉林敖東藥業集團延吉股份有限公司生產，處方由人參、白術、茯苓、仙人掌、甘草與幾種輔料組成。具有健脾益氣，生津止渴。用于氣陰兩虛引起的消渴病等癥。方中人參含有多種皂苷類，生物堿類化合物，其中人參皂苷為該制劑的主要活性成分

3、,參照2005年版中國藥典（部）“人參葉”項下條件1及相關文獻2。采用高效液相色譜法，以乙腈、磷酸為流動相，測定其含量，該法簡便、準確、精密度高、重現性好，為控制質量標準提供了可靠的依據。1  器材1.1  儀器日本島津LC10Avp系列高效液相色譜儀,包括DAD檢測器，Chem Station色譜工作站(美國Agilent公司)；AE163型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler公司）。1.2 試藥益津降糖口服液由吉林敖東藥業集團延吉股份有限公司提供（批號060601，060602，060603，061201，061202，061203，070501，070502，0

4、70503，070504），對照品，人參皂苷Re（0754200216），人參皂苷Rg1（0703200322）均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇，乙腈為色譜純，水為純凈水，其它試劑均為分析純。2  方法與結果2.1  色譜條件 色譜柱：Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 m）；流動相：乙腈0.05%磷酸溶液（99400）；檢測波長203 nm；柱溫40；流速1.0 ml/min；靈敏度0.08AUFS。    檢測波長的選擇：用UV2401PC型紫外分光光度儀，對人參皂苷Re對照品，在 20040

5、0 nm波長下進行紫外掃描，結果在 20 3nm波長處有最大吸收，因此選擇 203 nm為檢測波長。理論塔板數按人參皂苷Rg1，人參皂苷Re峰計算均不低于2 000。2.2 對照品溶液的制備 精密稱取經110干燥至恒重人參皂苷Rg1及Re對照品各10.1 mg，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，制成每毫升中各含0.3 mg的人參皂苷Rg1及Re混合溶液，即得。2.3 供試品溶液的制備精密量取供試品5 ml，加水15 ml搖勻，加氯仿萃取2次，20 ml/次，棄去氯仿層，水層用水飽和正丁醇萃取4次，20 ml/次，合并正丁醇液，正丁醇層用氨試液洗滌2次，20 ml/次，洗滌液層再用水飽和正丁醇

6、20 ml振搖提取1次，合并前后兩次正丁醇液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并移至 5 ml 量瓶中 ，加甲醇至刻度，搖勻，用 0.45m 微孔濾膜過濾，即得。2.4 陰性供試品溶液的制備 按處方比例制備不含人參皂苷的陰性樣品，按“2.3”項下方法制備成陰性供試品溶液。2.5 系統適應性實驗 分別精密吸取“2.2”，“2.3”，“2.4”項下溶液各10 l，按“2.1”項下色譜條件進樣。結果，陰性供試品溶液摘在與人參皂苷Rg1及人參皂苷Re對照品相同保留時間處未見明顯色譜峰，故認為輔料等對主藥的測定無干擾。色譜見圖1。2.6 線性范圍的考察 精密量取人參皂苷Rg1（0.32

7、0 mg/ml），人參皂苷Re（0.245 mg/ml）對照品混合溶液5，7.5，10，15，20 l注入高效液相色譜儀中。測定其峰面積，人參Rg1峰面積分別為590523，888 502，1 189 789，1 815 921，2 400 446。并以峰面積值（A）對進樣量（C）進行回歸，得標準曲線方程，以峰面積值（A）對進樣量（C）作圖，得一直線，A = 121 258.093 1C- 17 431.871，r = 0.999 9。 人參Re峰面積分別為472 305，700 232，938 757，1 418 136，1 835 231。以峰面積值（A）對進樣量（C）作圖，得一直線，A

8、= 91 613.410 34C- 19 379.181 03，r=0.999 6。以上結果表明，在0.166.4 g范圍內，人參Rg1峰面積值與進樣量有良好的線性關系；在1.2254.9 g范圍內，人參Re峰面積值與進樣量有良好的線性關系。 2.7 精密度實驗精密量取樣品（批號060601）供試液10 l，重復進樣5次，測定其峰面積，人參皂苷Rg1的峰面積分別為914 848，916 945，905 253，927 827，913 214。人參皂苷Re峰面積分別為528 608，521 613，519 375，520 186，513 891。結果人參皂苷Rg1，人參皂苷Re的RSD

9、分別為0.89%，1.02%，表明儀器精密度較好。 2.8 穩定性實驗取樣品（批號060601）供試液分別于0，2，4，6及8 h，分別進樣10 l，測得樣品中人參皂苷Rg1峰面積值分別為914 840，927 827，91 2315，92 118，910 423，平均值為917 105。Re峰面積值分別為528 608，520 186，516 530，518 912，520 475，平均值為520 942。RSD分別為0.76%，0.88% 。實驗結果表明，樣品供試液在8 h內穩定性良好。 2.9 重復性實驗按擬定的含量測定方法，對同一批供試品（060601）分別制備樣品

10、供試液5份，按“2.3”項下方法制備。并按“2.1”項下色譜條件進樣10l,測得峰面積值人參皂苷Rg1分別為910 852，909 816，919 572，920 545，912 256，平均值為914 608。人參皂苷Re峰面積值分別為509 402，513 273，509 341，517 554，509 373，平均值為511 789。人參皂苷Rg1的RSD =0.55%；人參皂苷Re的RSD=0.71%；人參總皂苷含量的RSD=0.69%，表明本方法重復性良好。2.10 回收率實驗 精密量取6份已知含量的供試品（批號060601）2.5 ml，分別加入人參皂苷Rg1（0.65

11、mg/ml）、人參皂苷Re（0.35 mg/ml）對照品溶液各取0.8 ml，1.0 ml，1.2 ml按上述樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，以下列公式計算回收率。結果見表1。結果表明，回收率在95%100% 之間，加樣回收良好。表1  回收率實驗結果（略）2.11  空白實驗 按處方比例及工藝自制不含人參的空白供試品，按供試品溶液的制備方法制備，測定，記錄色譜圖，在對照品人參皂苷Rg1，人參皂苷Re的保留時間處未出現色譜峰，因此不干擾測定。2.12  樣品含量測定 依上述方法測定3批益津降糖口服液中人參皂苷

12、Rg1及Re的含量。結果見表2。表2  樣品含量測定結果（略）3 討 論本法在樣品提取方法中曾試用過正丁醇合并液洗滌、氨試液洗滌、1氫氧化鈉試液洗滌、以及通過D101樹脂等幾種方法，實驗結果表明用氨試液洗滌的樣品含量最高，峰形尖銳。樣品回收率高。提取次數考察：按照“2.3”項下的測定方法，分別用水飽和正丁醇提取1，2，3，4，5，6次，依次測定。測定結果分別為0.210，0.311，0.325，0.338，0.339，0.337 mg/ml，結果表明提取4次以后，人參皂苷Rg1及Re總皂苷基本提盡。本法在除脂溶性雜質萃取過程中曾試用過三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷等三種溶劑萃取，實驗結果表明，用乙醚、二氯甲烷萃取時易產生乳化層，三氯甲烷萃取分層效果好，陰性無干擾。    流動相的選擇：本文分別用乙腈-0.05mol/ml磷酸二氫鉀（1529），乙腈-水-甲酸（25751），甲醇-0.1%甲酸水溶液（3070），乙腈-0.05%磷酸溶液（99400），這4種流動相進行試驗，結果表明流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液（99400）時，效果最佳，柱壓低，峰型尖銳，陰性無干擾。綜上所述，本法操作簡單、快速、準確可靠，可用