1、1.0目的可測(cè)試的樣品量較多（如大于30ml）,從而能較準(zhǔn)確地反映測(cè)試樣品的微生物狀況。2.0范圍適用于較容易過濾樣品的微生物測(cè)試，如常規(guī)水、礦物質(zhì)水、糖、糖漿、碳酸飲料、茶飲料等。參見附表1:薄膜過濾法測(cè)試內(nèi)容。3.0職責(zé)3.1 微生物品控員負(fù)責(zé)本SOP的具體操作。3.2 品控主任及領(lǐng)班負(fù)責(zé)本SO刖行的有效性.4.0定義無(wú)5.0程序5.1 佩特利式培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備5.1.1 接待測(cè)樣品數(shù)目取出經(jīng)過滅菌的佩特利式培養(yǎng)皿，另加一個(gè)培養(yǎng)皿作每種介質(zhì)的對(duì)照組。在各個(gè)佩特利式培養(yǎng)皿上分別標(biāo)上待測(cè)試樣品的記號(hào)。5.1.2 用燃燒過的鉗子逐一夾出試驗(yàn)包內(nèi)的滅菌吸收墊，放到每個(gè)佩特利式培養(yǎng)皿中。每夾出一個(gè)吸收墊

2、之后都要燒一次鉗子。5.1.3 輕輕打開佩特利式培養(yǎng)皿的蓋子，向吸收墊灑上1.82ml介質(zhì)，蓋上培養(yǎng)皿的蓋5.1.4 每一個(gè)佩特利式培養(yǎng)皿都應(yīng)有足夠的介質(zhì)浸泡吸收墊而使它隨后與濾膜粘附。然而過量液體會(huì)使菌落擴(kuò)散從而使菌落計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確。有需要時(shí)，調(diào)整推薦的培養(yǎng)劑量，以便于粘附和菌體生長(zhǎng)。培養(yǎng)介質(zhì)的配制及滅菌參見附表2。5.2 濾器座的準(zhǔn)備5.2.1 拆包取出已消毒的濾器座。或者將底坐、漏斗、漏斗蓋用沸水煮沸1分鐘加以滅菌。5.2.2 用煮沸或燃燒過的鉗子，將過濾器中已滅菌部件安裝在過濾燒瓶或真空瓶上。用燃燒過的鉗子細(xì)心從預(yù)先滅菌的一疊濾膜中取出一片濾膜放在濾座上。為了盡量減少膜面受損，鉗子夾持濾膜

3、時(shí)只許夾濾膜邊緣。測(cè)試不同微生物用不同孔徑的濾膜：總菌數(shù)/大腸桿菌：0.45um酵母和霉菌：0.8um注：進(jìn)行礦物質(zhì)水和反滲透水的酵母和霉菌測(cè)試時(shí)，也用0.45um的濾膜。5.2.3 用燃燒過的鉗子將漏斗和蓋放到座上。在漏斗冷卻至低于40七前不要加樣品。如漏斗蓋帶有管口，則在管口處裝上過濾器，或予以封住。5.2.4 用無(wú)菌的方法將樣品直接倒入已冷卻、消毒的漏斗中，將漏斗蓋放回。如果用取樣勺取樣，燃燒取樣勺，用樣品沖洗取樣勺兩次，使其冷卻，第三次裝滿取樣勺，倒入漏斗中，然后沖洗取樣勺，將取樣勺燃燒后放回有95%酉精的燒杯中。5.2.5 開動(dòng)真空泵將樣品抽過濾膜。不要用真空泵抽干燥的濾膜，這樣空氣

4、會(huì)被抽走。如果需要用水沖洗，用無(wú)菌的方法打開裝有無(wú)菌水的瓶子，用火焰燃燒螺紋，向漏斗中倒入20ml水，將沖洗水抽過濾膜。待樣品、無(wú)菌沖洗水抽濾完之后，不要讓真空泵繼續(xù)抽濾超過30秒鐘。5.2.6 用火焰燃燒過的鉗子細(xì)心夾起濾膜。輕微提起裝有吸收墊和培養(yǎng)劑的培養(yǎng)皿的蓋子并放下薄膜,直到銀子相對(duì)側(cè)的薄膜邊靠到吸收墊邊為止。將薄膜貼在吸收墊上滾動(dòng)，以排除氣泡。蓋上蓋子，在工作臺(tái)上輕輕地拍打培養(yǎng)皿，以驅(qū)除薄膜下面的氣泡。5.2.7 重復(fù)從步驟1開始，直到所有樣品都完成過濾。5.2.8 用無(wú)菌水重復(fù)上述過濾和平板培養(yǎng)程序做對(duì)照組試驗(yàn)。每一種介質(zhì)做一個(gè)對(duì)照試驗(yàn)。5.2.9 每個(gè)平板上分別標(biāo)注對(duì)應(yīng)樣品的標(biāo)識(shí)

5、。參閱SOP-QA-MB-024樣品的標(biāo)識(shí)。5.3 樣品培養(yǎng)為了避免在濾膜表面形成冷凝水，所有培養(yǎng)皿必須倒轉(zhuǎn)放在培養(yǎng)箱中。5.3.1 在培養(yǎng)箱里放一個(gè)裝有水的燒杯，以保持一定的濕度。5.3.2 下面的溫度是最佳培養(yǎng)溫度：總菌數(shù)：35C酵母和霉菌：28C大腸桿菌：35C如果共用一個(gè)培養(yǎng)箱，則把溫度調(diào)節(jié)至30±2oCo5.4 菌落數(shù)的計(jì)算5.4.1 細(xì)菌總數(shù)必須在24小時(shí)及72小時(shí)之后計(jì)算總菌數(shù)。計(jì)算所有菌落（不管種類），并記錄最高的數(shù)目。5.4.2 酵母和霉菌5.4.2.1 在培養(yǎng)72小時(shí),96小時(shí),120小時(shí)后點(diǎn)計(jì)酵母和霉菌數(shù)，記錄最高的數(shù)I5.4.2.2 酵母和霉菌通常表現(xiàn)為圓的白

6、色菌落，雖然有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)顏色，在36-48小時(shí)之后，一些白色酵母菌由于吸收了介質(zhì)中的指示劑而會(huì)在菌落中央逐漸顯現(xiàn)藍(lán)色。5.4.2.3 霉菌菌落可有許多種顏色（如白、黃、紅、藍(lán)、黑），但由于外觀呈現(xiàn)細(xì)絨毛狀或棉絮狀，所以容易辨認(rèn)。通常霉菌菌落大于細(xì)菌或酵母菌的菌落。如果霉菌菌落在平皿上呈曼延的狀態(tài)，則記錄為“Spreaders”。5.4.2.4 細(xì)菌菌落通常吸收指示劑要比酵母菌快，可變?yōu)樗{(lán)色、綠色、藍(lán)綠色或褐色。在這種培養(yǎng)基中，細(xì)菌菌落通常比酵母菌菌落小。5.4.3 大腸桿菌在35C溫度下培養(yǎng)的大腸桿菌菌落是綠色或墨綠色，有強(qiáng)烈反射性的金屬光澤。在24小時(shí)后計(jì)算有“光澤”的菌落。觀察大腸桿菌菌落

7、的金屬光澤時(shí)可將濾膜傾斜到一個(gè)角度，使入射光在具有特殊金屬的菌落同沒有這種光澤的菌落之間產(chǎn)生鮮明的對(duì)比。6.0參考文獻(xiàn)6.1 本文件支持綱要文件R-QA-006微生物監(jiān)控綱要。6.2 相關(guān)SOP參見附件一7.0附件/記錄7.1 附件：1.薄膜過濾法測(cè)試內(nèi)容測(cè)試內(nèi)容參考文件編號(hào)顆粒蔗糖的微生物測(cè)試SOP-QA-MB-007常規(guī)水的微生物測(cè)試SOP-QA-MB-008糖漿的微生物測(cè)試SOP-QA-MB-009產(chǎn)品的微生物測(cè)試（薄膜過濾法）SOP-QA-MB-010瓶/蓋的微生物測(cè)試SOP-QA-MB-013棉球擦拭測(cè)試SOP-QA-MB-0142.培養(yǎng)介質(zhì)的配制及滅菌表測(cè)試項(xiàng)目介質(zhì)名稱供應(yīng)商名稱配制方法滅菌方法細(xì)菌總數(shù)M-TGEBrothDifco18g溶于1升蒸儲(chǔ)水或去離子水中121124oC,15分鐘霉菌M-GreenYeast&MoldBrothMillipore7.3g溶于100ml蒸儲(chǔ)水或去離子水中1210c,10分鐘大腸桿菌M-EndoBrothMillipore48g溶于1升蒸儲(chǔ)水，加上20