1、氟尿嘧啶磁性微球的制備及對人胰腺癌細胞的抑制作用         08-07-19 17:09:00     編輯：studa20        作者：孫誠誼 喻超 劉建剛 王玉芝 錢志勇  【摘要】  目的 研究5氟尿嘧啶磁性白蛋白微球(5fluorouracil magnetic albumin microspheres，5FUMAMS)的制備及其聯合恒定外磁場體外對人胰腺癌PC3細

2、胞的生長抑制作用。方法 乳化熱固化技術制備5FUMAMS并檢測其理化性質，MTT比色分析法觀察5FUMAMS聯合恒定磁場體外對人胰腺癌細胞的抑制作用。結果 5FUMAMS平均粒徑為2001000 nm，呈球形，磁響應性良好，載藥量為每毫克微球含5FU 50g；單純磁場組和各種濃度的空白MAMS對腫瘤生長無影響；相應藥物濃度的5FUMAMS與5FU抑制率(inhibition ratio，IR)相似，差異無統計學意義(P>0.05)；相應藥物濃度的5FUMAMS聯合恒定外磁場與單純的5FUMAMS和游離5FU相比，IR明顯提高，差異有統計學意義(P<0.05)。結論MAMS可作為安全

3、的藥物載體；5FUMAMS制備方法和劑型的改變不影響5FU的抗癌活性；聯合恒定外磁場5FUMAMS的腫瘤細胞抑制效應顯著增強。 【關鍵詞】  5氟尿嘧啶磁性白蛋白微球； 恒定磁場； 胰腺癌PC3細胞    【Abstract】  Objective  To prepare 5fluorouracil magnetic albumin microspheres (5FUMAMS) and discuss its inhibitive action combined with constant external magnetic fiel

4、ds on human pancreatic carcinoma PC3 cells in vitro. Methods  5FUMAMS was prepared by emulsionheat stabilization technique and their physicochemical property detected. The inhibition rates (IR) of 5FUMAMS combined with constant external magnetic fields were assayed by using MTT assay.Results

5、60; The mean diameter of 5FUMAMS was 2001000 nm, with round shape, good magnetic response and 5FU loading of 5%. The tumor growth showed no difference on tumor cells in both pure magnet group and MAMS group. The IR of 5FUMAMS and 5FU at same drug concentration was similar, with insignificant statist

6、ical difference (P>0.05). Compared with pure 5FUMAMS and free 5FU, IR was significantly increased after 5FUMAMS was combined with constant external magnetic fields (P<0.05). Conclusions  MAMS is a safe drug carrier. The preparation method and changes of dosage form exert no action on anti

7、cancer activity of 5FU. The inhibitive action is significantly enhanced after 5FUMAMS is combined with constant external magnetic fields.    【Key words】  5fluorouracil magnetic albumin microspheres;  Constant magnetic fields;  Pancreatic carcinoma PC3 cells  &

8、#160; 胰腺癌早期診斷困難，具有病程短、進展快、病死率高的特點， 中位生存期約6個月， 總體5年生存率低于5%1。目前對胰腺癌仍采用手術切除聯合化療的綜合治療方案。近年來，運用抗癌藥物磁性納米微球聯合磁場治療腫瘤取得可喜進展。本實驗制備5氟尿嘧啶磁性白蛋白微球(5fluorouracil magnetic albumin microspheres， 5FUMAMS)并檢測其理化性質，分析其聯合恒定磁場對人胰腺癌PC3細胞的生長抑制作用，探討聯合磁場后5FUMAMS抑瘤作用增強的機制。    1  材料與方法    1.1

9、  材料    5FU，純度99%，購自比利時Acros公司；牛血清白蛋白購自美國Sigma公司；超聲乳化儀購自江蘇金壇醫療儀器廠；SSX550型掃描電子顯微鏡購自日本；752型紫外可見分光光度計、Multiskan MK3型酶標儀購自上海分析儀器總廠；恒定磁場由北京新海空科技開發中心設計提供；胰腺癌PC3細胞系由解放軍302醫院肝膽研究中心贈送。    1.2  方法    1.2.1  5FUMAMS的制備：采用乳化熱固化技術，取牛血清白蛋白250 mg溶于10 g/L

10、5FU蒸餾水溶液中，添加磁流體0.2 ml，再與100 ml含10%司盤80的蓖麻油混合，攪拌10 min，再超聲乳化。另取蓖麻油100 ml加熱至160 ，在攪拌下加入上述乳濁液，160 保溫10 min，然后攪拌6 h。加乙醚200 ml脫脂，離心，棄去油相，沉淀依次用乙醚，乙醇漂洗，最后置換在蒸餾水中，冷凍干燥48 h，即成微球粉末。    1.2.2  5FUMAMS磁響應：將5FUMAMS按濃度比為110加入0.1%吐溫80生理鹽水中，超聲分散，倒置顯微鏡下觀察微球分散情況；同時，取混懸液1滴滴于載玻片上，然后將1塊表面強度為3000高斯的銣鐵

11、硼磁鐵置于載玻片一端，鏡下觀察微球運動及聚集情況。    1.2.3  5FUMAMS的形態與大小：將經超聲分散的5FUMAMS懸液滴于玻片上，空氣干燥后真空噴鍍膠體金，掃描電鏡下觀察。    1.2.4  5FUMAMS的5FU含量測定：首先繪制5FU標準曲線，再測定微球中5FU的含量。精密稱取5FU 20.5 mg溶于1 mol/L NaOH中，加蒸餾水定容到100 ml，配制成205 mg/L 5FU儲備液。精密移取5FU儲備液0、25、50、100、200、400、600、800、1000 l于10 ml容

12、量瓶中，0.1 mol/L HCl定容到10 ml。藥物濃度為0、0.512 5、1.025、2.05、4.10、8.20、12.30、16.40、20.50 mg/L紫外分光光度計測定不同濃度藥物的吸光度，將數據進行線性擬合，求出5FU的標準曲線方程為A0.007 320.055 08C(相關系數0.999 95)。微球中5FU含量測定采用堿消化法，精密稱取5FUMAMS和MAMS各10 mg，分別置于10 ml離心管內，加入5 ml 1 mol/L NaOH溶液。沸水浴水解2 h，冷卻，用0.1 mol/L HCl定容到5 ml，在磁場強度為4000高斯的磁場下，進行磁分離4 h。分別取上清液0.5 ml，置于10 ml容量瓶中，0.1 mol/L HCl定容。以MAMS的上清液為對照，紫外分光光度計256 nm處測其吸光度。上述過程重復3次。帶入標準曲線方程，求微球的載藥量。    1.2.5  腫瘤細胞生長抑制實驗：實驗分5組。A組：5FUMAMS聯合磁場組；B組：5FUMAMS組；C組：游離5FU組；D組：MAMS組；E組：單純磁場組。參照5FU血漿峰濃度10.0 mg/L