1、生物技術北方園藝2008(7:210212 第一作者簡介:馬杰(19602,女,河南開封人,本科,副教授,現從事生物技術研究工作。E 2mail :mjie0924 。基金項目:河南省科技攻關資助項目(0524050005。收稿日期:2008-02-10雪蓮果離體培養及植株再生體系的建立馬杰,崔波,張仙云,袁秀云(鄭州師范高等專科學校生物工程研究所,河南鄭州450044摘要:對雪蓮果幼嫩葉片和腋芽離體培養與植株再生過程進行了研究,建立了雪蓮果的再生體系。該體系以雪蓮果葉片和腋芽為材料進行離體培養,結果表明:MS 可作為雪蓮果再生體系的基本培養基;葉片、腋芽誘導愈傷組織和不定芽培養基為MS +6

2、2BA 2.0mg/L +NAA 0.2mg/L +蔗糖3%;繼代培養基為MS +62BA 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L +蔗糖3%;生根培養基為1/2MS +IAA 0.3mg/L +蔗糖3%。關鍵詞:雪蓮果;離體培養;再生體系中圖分類號:Q 943.1文獻標識碼:A 文章編號:1001-0009(200807-0210-03雪蓮果S mallanthus sonchi f olius (Poepp .et Endl.H.Robinson 又稱菊薯、亞貢,為菊科多年生草本植物。原產南美洲安第斯山脈,果實為塊根,形狀如甘薯,被稱為地下水果。雪蓮果葉富含硒和多糖、酚酸、黃酮類等功能性

3、成分,果實含有豐富的寡聚果糖和人體必須氨基酸和酚酸、類黃酮和砧類物質,具有降血脂,減肥,調節內分泌,防治血管老化,預防骨質疏松,抗菌等作用,特別適合糖尿病人和減肥者食用。因其特殊的保健功能及藥用價值,越來越得到廣泛的重視,在食品、醫藥方面有廣闊的應用前景。隨著對雪蓮果研究的深入,雪蓮果將成為一種極具市場潛力的植物。雪蓮果的常規繁殖靠種子或扦插,速度慢,周期長,成本較高。該試驗探索了雪蓮果再生體系建立的方法和條件,并為該植株開展快繁等進一步的研究奠定了基礎。1材料和方法1.1材料雪蓮果葉片和腋芽。1.2誘導培養取雪蓮果的幼嫩葉片、腋芽置流水中沖洗15min ,無菌操作以70%酒精進行表面滅菌15

4、s ,用無菌水沖凈后,置0.1%升汞溶液中振搖5min ,然后以無菌水沖洗4遍。葉片用無菌解剖刀將周邊切下棄去,保留部分切成大小約0.5cm 2,接種于14號培養基中(表1,每種培養基接種數均為40。腋芽滅菌后剝離至生長點,接種于1、2號培養基中,統計產生不定芽數。1.3增殖培養將誘導形成的不定芽分割成單個芽苗,每瓶接種數一致,轉入6、913號6種培養基上進行增殖培養(表3,分別統計數量。圖1雪蓮果的不定芽誘導1.4生根培養將高26cm 植株分別放入表4所列的1013號4種培養基中(表4,每種培養基5瓶,每瓶放7株植株,即每種培養基接種35株,置光照培養箱中培養,1520d 觀察不定根的生長情

5、況。1.5培養條件及培養基所有培養條件均為:培養溫度(252,光照強度2500lx ,光照時間每天12h ;所用培養基除特別注明外均為MS 培養基,蔗糖0.3%,瓊脂0.8%,p H 值(5.80.1。2結果2.1雪蓮果葉片、腋芽不定芽的誘導葉片在1周左右,開始陸續在其周邊出現白色或淡黃色至黃綠色的突起(見圖1,其愈傷組織漸漸向外蔓延變大、變厚,之后在其突起處形成34或更多不定芽,30d 左右長成1015mm 的無根小苗。誘導不定芽成12北方園藝2008(7:210212生物技術功率最高44.00%(表1。腋芽誘導最初表現為萌動、基部膨大,長出白色或淡黃色愈傷組織,然后形成不定芽。腋芽誘導成功

6、率高,達100%(表2。 圖2雪蓮果的繼代培養表1葉片在MS 培養基誘導不定芽的試驗結果KT 1.0+NAA 0.122522.73表2腋芽在MS 培養基誘導不定芽的試驗結果編號激素/mg L -1接種數量產生不定芽的外植體數不定芽誘導率/%162BA 1.0+I BA 0.155100262BA 1.0+NAA 0.1441002.2不定芽的繼代培養繼代培養是實現快繁的重要環節之一,培養一段時間后,為了防止培養物老化,要及時將其接種到新鮮培養基中,進行繼代培養,以使不定芽能夠順利地增殖、生長,從而得到大量幼苗(見圖2,供進一步生根試驗。繼代培養過程中,不定芽基部有愈傷組織生長,其上有若干新的

7、不定芽長出。選用62BA 和NAA 的不同濃度配比作為研究因子,經過試驗,選擇增殖系數高的培養基(表3。 圖3雪蓮果的生根培養表3不同激素組合對不定芽在MS 培養基增殖的影響編號激素/mg L -1培養天數接種數量增殖數增殖系數262BA 1.0+NAA 0.120520 4.00562BA 1.0+NAA 0.220730 4.29662BA 2.0+NAA 0.220631 5.17762BA 2.0+NAA 0.420519 3.80862BA 4.0+NAA 0.420818 2.25962BA 4.0+NAA 0.8206142.332.3不定根的誘導生根試驗統計生根時間、根的形態和

8、生根數量,結果見表4。表4生根培養(1/2MS 編號激素/mg L -1IAA 0.3201919100.00注:表中所有統計數量污染、褐變數均未統計在內。3討論與結論用雪蓮果的嫩葉為外植體,在MS 培養基可誘導出不定芽,細胞分裂素62BA 配合生長素NAA ,其濃度分別為1.0mg/L 和0.1mg/L 時效果最好。以腋芽為外植體,在1、2號培養基中不定芽的誘導率均達100%,但在2號培養基上單株不定芽的數量較多(24個,故以MS +62BA 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L 為最佳。在繼代培養時,隨著細胞分裂素生長素濃度水平不斷提高,不定芽增殖系數提高到一定程度轉而下降,較高濃度的

9、細胞分裂素配合較低濃度的生長素有利于從生芽的增殖,培養基MS +62BA 2.0mg/L +NAA 0.2mg/L 的增殖效果較為理想,在此培養基中,不定芽增殖系數最高達5.17。生根培養試驗結果表明,以NAA 和IAA 做生根試驗過程中,根部形態有很大不同,表現在用IAA 培養基植株的根細長,而用NAA 培養基植株的根短粗(圖3。生根時間也有差別,11號培養基上植株的完成生根時間最短,生根率100%,且根的形態完好,植株成活率也很高。其他有些生根率雖也達100%,或時間較長,大于20d ;或根細長不利于植株成活。故選用MS +NAA 0.5mg/L +蔗糖3%作為雪蓮果的生根培養基,形成的植

10、株根系完好,成活率高。綜上所述,雪蓮果在短時間內可完成從誘導到再生植株形成的整個過程,實現了該植株的再生體系的建立,該體系的建立大大加快了育苗進程,對雪蓮果種苗快速繁殖和規模化生產有著重要的指導意義。參考文獻1Aybar M ,Riera A.Hypoglycemic effect of the water extract of S mall 2anthus sonchi f olius (Y acon Leaves in normal and diabetic rats J .Journalof Ethnopharmacology ,2001,74(2:1252132.2Valentova

11、K,Cvak L ,Muck A ,et al.Antioxidant activity of exrracts112生物技術北方園藝2008(7:212214不同激素配比對碧桃離體快繁的影響張文娥,潘學軍,楊仕國,曾家艷(貴州大學農學院,貴州貴陽550025摘要:以碧桃的單芽莖段為試材,以MS培養基為基本培養基,研究了不同的激素濃度及配比對碧桃腋芽誘導、增殖和生根的影響,結果表明:碧桃腋芽誘導的最佳培養基為MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L,在此培養基中碧桃腋芽誘導率可達93.3%,且生長良好;最佳增殖培養基為MS+KT0.3mg/L+NAA0.08mg/L,其增殖率可達75%,

12、增殖系數為1.5;最佳的生根培養基為1/2MS+NAA0.3mg/L,生根率為50%。該研究結果可為生產提供一定的參考。關鍵詞:激素;碧桃;離體快繁中圖分類號:S685.99;S603.6文獻標識碼:A文章編號:1001-0009(200807-0212-03碧桃是薔薇科桃屬的一個變種,早春開花,其花多重瓣,花色艷麗無比,具有極高的觀賞價值,適合于湖濱、溪流、道路兩側和公園布置,也適合小庭院點綴和盆栽觀賞,還常用于切花和制作盆景1。目前,碧桃的繁殖多采用播種、扦插和嫁接的方法,但在自然條件下碧桃播種繁殖的周期長,繁殖速度極慢;扦插難生根,苗木整齊度差,且易在繁殖過程中積累病毒,繁殖較困難;嫁收

13、稿日期:2008-02-11接繁殖也受時間、氣候和嫁接技術等條件的限制2。而且碧桃較容易受到病毒和真菌細菌的侵染,長期采用營養繁殖的植株傳毒快、發病率高,危害范圍廣,從而會影響種苗的生長發育,樹勢衰弱,引起品種退化。采用組織培養技術,以碧桃新生枝條為材料快速繁殖獲得大量無菌組培苗,為碧桃生產應用提供了技術支撐,對碧桃基因工程育種有一定的參考價值。1材料與方法1.1試驗材料以重瓣碧桃(Prunus percica var.duplex的單芽莖段為試材,取自貴州大學花卉資源圃。1.2試驗設計from the leaves of S mallanthus sonchi f oliusJ.Europe

14、an Journal of Nutri2 tion,2003,42(1:61266.3錢林,丁長河,李里特,等.雪蓮果的化學組分及其功能特性J.食品研究與開發,2006,27(6:1792180,188.4李卓亞.雪蓮果化學成分及其藥理作用的研究進展J.食品與藥品, 2007,9(6:41243.5馬杰,何蔚葒,崔波.蝴蝶蘭原球莖狀體的誘導及增殖J.河南科學, 2005,23(1:51253.T issu e C u ltu re in V itro and E stab lishm ent o f R egeneration System o f Smallanthus sonchif ol

15、iusMA Jie,CUI Bo,ZHANG X ian2yun,Y UAN X iu2yun(Bio2technoloy Institute,Zhengzhou T eachers C ollege,Zhengzhou,Henan450044,ChinaAbstract:The regeneration system of S mallanthus sonchi f olius was established in this paper by using leaves and axillary buds as explants in vitro culture.The results showed that MS can be used as the basic media of the regeneration system of S mallanthus sonchi f olius.The appropriate medium used for calli and buds