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1、p21基因PCR實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)周璇基因組區(qū)域：基因組區(qū)域：核酸序列：核酸序列：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：引物設(shè)計(jì)：血液血液DNADNA的提取：的提取：（1） 將冰凍的血在室溫下溶化；（2） 取1ml血液轉(zhuǎn)入一無(wú)菌的2ml離心管中，加入等體積的PBS磷酸鹽緩沖液，充分混勻后12000rpm離心5min，棄上清；（3） 加入667l STE，24l的20%的SDS，37水浴1h；（4） 加10l的20mg/ml的蛋白酶K混勻，55水浴消化過(guò)夜（1014h）；（5） 將消化的樣品加入等體積的Tris飽和酚，充分搖勻，120

2、00rpm離心10min；（6） 將上層水相轉(zhuǎn)入另一無(wú)菌2ml離心管中；再加入等體積的Tris飽和酚，充分搖勻，12000rpm離心10min；（7） 將上層水相轉(zhuǎn)入另一無(wú)菌2ml離心管中；并加入等體積的酚 氯仿 異戊醇（25 24 1），旋渦振蕩至充分混勻，12000rpm離心10min；（8） 將上層水相轉(zhuǎn)入另一無(wú)菌2ml離心管中；并加入等體積的氯仿 異戊醇（24 1），充分振蕩混勻，12000rpm離心10min；（9） 將上清液轉(zhuǎn)移到另一無(wú)菌2ml離心管中；加入2倍體積的冰乙醇，1/10體積醋酸鈉水平搖動(dòng)，直到可見絮狀DNA析出；（10） 將樣品置-20冰箱冷凍30min或冰浴1520

3、min，取出后再次12000rpm離心10min，使DNA沉淀；（11） 用槍頭將DNA挑到另一無(wú)菌離心管中，用適量的70%乙醇洗滌并晃動(dòng)，以洗出DNA的雜質(zhì)；（12） 倒出乙醇，將DNA用真空干燥或自然晾干，加入適量的TE緩沖液回溶，-20保存?zhèn)溆谩CRPCR擴(kuò)增：上游引物：TTGTCGCTGTCTTGCACTCT下游引物：ATTTCCGGTGCTGGGAATCA 在PCR反應(yīng)管中加入特異性引物、緩沖液以及TapDNA聚合酶，如下比例配好反應(yīng)體系：反應(yīng)條件：94 4min94 30s55 30s 30cycles72 2min72 10min10擴(kuò)增緩沖液 10ul4種dNTP混合物各200umol/L引物各10100pmol模板

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