1、高中生物選修1 知識點總結選修1知識點總結 微生物的實驗室培養 一、基礎知識 1.培養基：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質，是進行微生物培養的物質基礎。 （1）培養基的分類： ·培養基按照物理性質可分為液體培養基、半固體培養基和固體培養基。 在液體培養基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養基中用作凝固劑）后，制成瓊脂固體培養基。 微生物在固體培養基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。根據菌落的特征可以判斷是哪一種菌。 液體培養基應用于工業或生活生產，固體培養基應用于微生物的分離和鑒定，半固體培養基則常用于觀察微生物的運動及菌種保藏等。

2、·按照成分培養基可分為人工合成培養基和天然培養基。 合成培養基是用成分已知的化學物質配制而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的分離鑒定。 天然培養基是用化學成分不明的天然物質配制而成，常用于實際工業生產。 ·按照培養基的用途，可將培養基分為選擇培養基和鑒定培養基。 選擇培養基是指在培養基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物的生長。 鑒別培養基是根據微生物的特點，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。 （2）培養基的成分：培養基的化學成分包括水、無機鹽、碳、氮、生長因子等。 ·碳：能為微生物的代謝提

3、供碳元素的物質。如CO2、NaHCO3等無機碳；糖類、石油、花生粉餅等有機碳。異養微生物只能利用有機碳。單質碳不能作為碳。 ·氮：能為微生物的代謝提供氮元素的物質。如N2、NH3、NO3-、NH4+（無機氮）蛋白質、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機氮）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培養基還要滿足微生物生長對PH、特殊營養物質以及氧氣的要求。 例如，培養乳酸桿菌時需要在培養基中添加維生素，培養霉菌時須將培養基的pH調至酸性，培養細菌是需要將pH調至中性或微堿性，培養厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件 2.無菌技術 a.獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以

4、下幾個方面： 對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。 將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等器具進行滅菌。 為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。 實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。 b.無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？ 答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。 c.消毒與滅菌的區別 消毒指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）還有化學藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消

5、毒、紫外線消毒。 滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。 d 常用器具的滅菌方法： 接種環、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法； 玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱； 培養基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。 表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。 比較項 理化因素的作用強度 消滅微生物的數量 芽孢和孢子能否被消滅 消毒 較為溫和 部分生活狀態的微生物 不能 滅菌 強烈 全部微生物 能 3實驗操作 （1）制作牛肉膏蛋白胨固體培養基 方法步驟：計算、稱量、溶化、滅

6、菌、倒平板。 倒平板操作： a.將滅過菌的培養皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養基的錐形瓶，左手拔出棉塞。 b.右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。 c.用左手的拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養基（約1020mL）倒入培養皿，左手立即蓋上培養皿的皿蓋。 d.等待平板冷卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過來放置，使培養皿蓋在下、皿底在上。 ·倒平板操作的討論 培養基滅菌后，需要冷卻到50左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？ 提示：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。 為什么需

7、要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。 平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。 在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？ 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。 （2）純化大腸桿菌 微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。 平板劃線法是通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作。將

8、聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在數次劃線后培養，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。 稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。 用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。 （3）平板劃線法操作步驟： 將接種環放在火焰上灼燒，直到接種環燒紅。 在火焰旁冷卻接種環，并打開棉塞。 將試管口通過火焰。 將已冷卻的接種環伸入菌液中蘸取一環菌液。 將試管通過火焰，并塞上棉塞。 左手將

9、皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養皿。 灼燒接種環，待其冷卻后，從第一區域劃線的末端開始往第二區域內劃線。重復以上操作，在三、四、五區域內劃線。注意不要將最后一區的劃線與第一區相連。 將平板倒置放入培養箱中培養。 ·平板劃線操作的討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來于上次劃

10、線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。 2.在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？ 答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。 3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 （4）涂布平板操作的步驟： 將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。 取少量菌液，滴加到培養基表面。 將沾有少量酒精的涂布

11、器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810s。 用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面。 ·涂布平板操作的討論 1.涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第二步應如何進行無菌操作？ 提示：應從操作的各個細節保證“無菌”。例如，酒精燈與培養皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。 （4）菌種的保存 （1）對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。 臨時保藏方法 將菌種接種到試管的固體斜面培養基上，在合適的溫度下培養。當菌落長成后，將試管放入4的冰箱中保藏。以后每36個月，都要重新將菌種從舊的培養基上轉移到新鮮

12、的培養基上。 缺點：這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產生變異。 （2）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。 在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養的菌液轉移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20的冷凍箱中保存。 （5）疑難解答 生物的營養 營養是指生物攝取、利用營養物質的過程。營養物質是指維持機體生命活動，保證發育、生殖所需的外物質。 人及動物的營養物質：水、無機鹽、糖類、脂質、蛋白質、維生素六類。 植物的營養物質：礦質元素、水、二氧化碳等三類。 微生物的營養物質：水、無機鹽、碳、氮及特殊營養物質五類。 確定培養基制作是否合格的方法 將未接種的培養基在恒溫箱

13、中保溫12天，無菌落生長，說明培養基的制備是成功的，否則需要重新制備。 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數 尿素：是一種重要的農業氮肥，尿素并不能直接被農作物吸收。只有當土壤中的細菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為他們能合成脲酶。尿素最初是從人的尿液中發現的 一、篩選菌株： （1）實驗室中微生物的篩選應用的原理： 人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。 （2）選擇性培養基 在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基，稱作選擇培養基。 （3）配制選擇培養基的依據 根據

14、選擇培養的菌種的生理代謝特點加入某種物質以達到選擇的目的。例如，培養基中不加入有機物可以選擇培養自養微生物；培養基中不加入氮元素，可以選擇培養能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養金黃色葡萄球菌等。 二、統計菌落數目 （1）測定微生物數量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數。 （2）稀釋涂布平板法統計樣品中活菌的數目的原理 當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活細菌。為了保證結果準確，一般設置35個平板，選擇菌落數在30300的平板進行計數，并取平均值。統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，因

15、此，統計結果一般用菌落數而不是活菌數來表示。 三、設置對照 設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。對照實驗是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實驗，其作用是比照試驗組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實是所測試的條件引起相應的結果。 四、實驗設計 實驗設計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。 （1）土壤取樣：同其他生物環境相比，土壤中的微生物，數量最大，種類最多。在富含有機質的土壤表層，有更多的微生物生長。從富含有機物、潮濕、pH7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約38cm的土壤層取樣。

16、（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數目。在實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養，以保證獲得菌落數在30300之間、適于計數的平板。 測定土壤中細菌的數量，一般選用104、105、106 測定放線菌的數量，一般選用103、104、105 測定真菌的數量，一般選用102、103、104 （3）微生物的培養與觀察 不同種類的微生物，往往需要不同的培養溫度和培養時間。 細菌3037 12天 放線菌2528 57天 霉菌2528 34天 每隔24小時統計一次菌落數目，選取菌落數目穩定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養時間不足而導致一樓菌落的數目。一般來說，在一定的培

17、養條件下（相同的培養基、唯獨及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色 五、疑難解答 （1）如何從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數？ 統計某一稀釋度下平板上的菌落數，最好能統計3個以上平板，計算出平板菌落數的平均值 每克樣品中的菌落數=（C/V）_M 其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數 分解纖維素的微生物的分離 一、纖維素與纖維素酶 纖維素：一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質。 （1）棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產物，木材、作物秸稈等也富含纖維素

18、。 （2）纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶、C_酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長提供營養。 二、纖維素分解菌的篩選 （1）篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反應直接對微生物進行篩選。 （2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理 剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。當我們在含有纖維素的培養基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅纖維素的復合物就無法形成，培養基

19、中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。 三、分離分解纖維素的微生物的實驗流程 土壤取樣選擇培養（此步是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來確定）梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上挑選產生透明圈的菌落 （1）土壤采集：選擇富含纖維素的環境。 （2）剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟：倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板 （3）剛果紅染色法種類： 一種是先培養微生物，再加入剛果紅進行顏色反應，另一種是在倒平板時就加入剛果紅。 四、課題延伸 對分解纖維素的微生物進行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需

20、要進行發酵產纖維素酶的實驗，纖維素酶的發酵方法有液體發酵和固體發酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量的測定。 五、疑難解答 （1）為什么要在富含纖維素的環境中尋找纖維素分解菌？ 由于生物與環境的相互依存關系，在富含纖維素的環境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環境。 （2）將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應該埋進土壤多深？ 將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設置纖維素分解菌生存的適宜環境。一般應將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。 （3）兩種剛果紅染色法的比較 方法一是傳統的方

21、法，缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發生混雜；其優點是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用。 方法二的優點是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質，可以使能夠產生淀粉酶的微生物出現假陽性反應。但這種只產生淀粉酶的微生物產生的透明圈較為模糊，因為培養基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產生的透明圈相區分。方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區分。 （4）為什么選擇培養能夠“濃縮”所需的微生物？ 在選擇培養的條件下，可以使那些能夠適應這種營養條件的微生

22、物得到迅速繁殖，而那些不適應這種營養條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。 果酒和果醋的制作 一、實驗原理 酶 1酒精發酵的原理： 酶 酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖，表達式為：C6H12O6+O2CO2+H2O+能量 酵母菌進行無氧呼吸產生酒精和二氧化碳，表達式為：C6H12O6C2H5OH+CO2+能量 酵母菌的營養代謝類型為異養兼性厭氧型。在有氧時，酵母菌大量繁殖，但是不起到發酵效果；在無氧時，繁殖速度減慢，但是此時可以進行發酵。在利用酵母菌發酵時最好是先通入足夠的無菌空氣在有氧環境下一段時間使其繁殖，再隔絕氧氣進行發酵。20左右最適合酵母菌繁殖，酒精發酵的最佳溫度是在182

23、5，pH最好是弱酸性。 酶 2醋酸發酵的原理： 醋酸菌是好氧型細菌，當缺少糖時和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸。 表達式為：C2H5OH+O2CH3COOH+H2O； 當氧氣、糖都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。 醋酸菌生長的最佳溫度是在3035 二、實驗步驟 1.對發酵瓶、紗布、榨汁機、盛葡萄汁的器皿等實驗用具進行清洗并消毒。先用溫水反復沖洗幾次,再用體積分數為75的酒精擦拭消毒，晾干待用。 2.取葡萄500 g，去除枝梗和腐爛的子粒。 3.用清水沖洗葡萄12遍除去污物，注意不要反復多次沖洗。 4.用榨汁機榨取葡萄汁后，將其裝入發酵瓶中或將葡萄打成漿后，用潔凈的紗布過濾至發酵

24、瓶中，蓋好瓶蓋。如果沒有合適的發酵裝置，可以用500 mL的塑料瓶替代，但注入的果汁量不要超過塑料瓶總體積的2/3。 5.將發酵瓶置于適宜的溫度下發酵。 6.由于發酵旺盛期CO2的產量非常大，因此需要及時排氣，防止發酵瓶爆裂。如果使用簡易的發酵裝置，如瓶子（最好選用塑料瓶），每天要擰松瓶蓋24次，進行排氣。 7.10 d以后，可以開始進行取樣檢驗工作。例如，可以檢驗酒味、酒精的含量、進行酵母菌的鏡檢等工作。 8.當果酒制成以后，可以在發酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后將裝置轉移至3035 的條件下發酵，適時向發酵液中充氣。如果找不到醋酸菌菌種或醋曲，可嘗試自然接種，但效果不是很好。如果沒有充氣裝置

25、，可以將瓶蓋打開，在瓶口蓋上紗布，以減少空氣中塵土等的污染。 三、注意事項 請分析p 此裝置中的充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連接？結合果酒、果醋的制作原理，你認為應該如何使用這個發酵裝置？ 充氣口 排氣口 出料口 答：充氣口是在醋酸發酵時連接充氣泵進行充氣用的；排氣口是在酒精發酵時用來排出CO2的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。使用該裝置制酒時，應該關閉充氣口；制醋時，應將充氣口連接氣泵，輸入氧氣。 腐乳的制作 一、 實驗原理 1參與豆腐發酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多種

26、，其中起主要作用的是毛霉。 2毛霉是一種絲狀真菌，營養代謝類型為異養需氧型，最適生長溫度為15-18，常見于土壤、水果、蔬菜、谷物上，具有發達的白色菌絲。 3.毛酶等微生物產生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。 二、實驗步驟 1.將豆腐切成3cm×3cm×1cm的若干塊。所用豆腐的含水量為70左右，水分過多則腐乳不易成形。 2.將豆腐塊平放在鋪有干粽葉的盤內，粽葉可以提供菌種，并能起到保溫的作用。每塊豆腐等距離排放，周圍留有一定的空隙。豆腐上面再鋪上干凈的粽葉。氣候干燥時，將平盤用保鮮膜包裹，但不要封嚴，以免濕度太高，不利于毛霉的生長。 3.將平盤放入溫度保持在1518 的地方。毛霉逐漸生長，大約5 d后豆腐表面叢生著直立菌絲。 4.當毛霉生長旺盛，并呈淡黃色時，去除包裹平