1、第一章第一章 血液標(biāo)本采集與處理血液標(biāo)本采集與處理臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第二十二章第二十二章 超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)楊巍第二十二章第二十二章 超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)目 錄第一節(jié) 型超敏反應(yīng) 一、型超敏反應(yīng)體內(nèi)檢測(cè)方法 二、型超敏反應(yīng)體外檢測(cè)項(xiàng)目及檢測(cè)方法第二節(jié) 型超敏反應(yīng)一、型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法二、型超敏反應(yīng)抗血細(xì)胞抗體檢測(cè)的臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià) 第三節(jié) 型超敏反應(yīng)一、型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法二、型超敏反應(yīng)免疫復(fù)合物檢測(cè)的臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià) 第四節(jié) 型超敏反應(yīng)一、型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法二、型超敏反應(yīng)皮膚試

2、驗(yàn)臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià)本章小結(jié)第二十二章第二十二章 超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)重點(diǎn)提示型超敏反應(yīng)體外檢測(cè)項(xiàng)目及檢測(cè)方法。抗血細(xì)胞抗體常見(jiàn)檢測(cè)方法和臨床意義。抗原非特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)方法和臨床意義。第二十二章第二十二章 超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)（超敏反應(yīng)（hypersensitivityhypersensitivity）：是機(jī)體接受某些抗原刺激時(shí)，出現(xiàn)生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷等異常的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。 第二十二章第二十二章 超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)-型超敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的比較型超敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的比較 超

3、敏反應(yīng)類型超敏反應(yīng)類型 介導(dǎo)形式和成分介導(dǎo)形式和成分 效應(yīng)細(xì)胞和成分效應(yīng)細(xì)胞和成分 初次介導(dǎo)組分初次介導(dǎo)組分 二次介導(dǎo)組分二次介導(dǎo)組分 型型（速發(fā)型）（速發(fā)型） 抗體介導(dǎo)，IgE 肥大細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞 血管活性胺 白三烯、PGD2、PAF、細(xì)胞因子 型型（細(xì)胞溶解型）（細(xì)胞溶解型） 抗體介導(dǎo)，IgG、IgM FcR+細(xì)胞（吞噬細(xì)胞、NK細(xì)胞）補(bǔ)體、攻膜復(fù)合體 溶酶體酶、穿孔素 型型（免疫復(fù)合物（免疫復(fù)合物型）型） 免疫復(fù)合物介導(dǎo)，IgG FcR+細(xì)胞、補(bǔ)體 抗原-抗體、補(bǔ)體復(fù)合物 溶酶體酶 型型（遲發(fā)型）（遲發(fā)型） T細(xì)胞介導(dǎo)，Th1、Th2、CTL 巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、CTL IFN-、

4、IL-4、IL-5、eotaxin、細(xì)胞毒素趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞毒素、炎癥介質(zhì) 第二十二章第二十二章 超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)：亦稱變態(tài)反應(yīng)（變態(tài)反應(yīng)（allergyallergy）或過(guò)敏反過(guò)敏反應(yīng)（應(yīng)（anaphylaxisanaphylaxis），主要由特異性IgE抗體介導(dǎo)產(chǎn)生，因其發(fā)生速度快，常在再次接觸相同抗原后數(shù)分鐘內(nèi)即出現(xiàn)臨床反應(yīng)，故又稱速發(fā)型超敏反應(yīng)（immediate hypersensitivity）。 第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 第一節(jié)第一節(jié) 型

5、超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) AgMast cellIgE再次接觸再次接觸一、一、型超敏反應(yīng)體內(nèi)檢測(cè)型超敏反應(yīng)體內(nèi)檢測(cè)方法方法1 1. . 皮膚皮膚試驗(yàn)試驗(yàn)Mast cell脫顆粒脫顆粒局部紅腫、局部紅腫、硬結(jié)硬結(jié)20-30minMast cellMast cell2 2 激發(fā)試驗(yàn)激發(fā)試驗(yàn)(provocation test)(provocation test)：是模擬自然發(fā)病條件，以少量致敏原引起一次較輕的變態(tài)反應(yīng)發(fā)作，用以確定變應(yīng)原的試驗(yàn)。非特異性激發(fā)試驗(yàn)非特異性激發(fā)試驗(yàn)特異性激發(fā)試驗(yàn)特異性激發(fā)試驗(yàn)二、二、型超敏反應(yīng)體外檢測(cè)方法型超敏反應(yīng)體外檢測(cè)方法第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 血清總IgE檢測(cè)

6、特異性IgE檢測(cè)IgG4檢測(cè)細(xì)胞脫顆粒測(cè)定體外檢測(cè)方法體外檢測(cè)方法1血清總IgE(total IgE，tIgE)檢測(cè) （1）檢測(cè)方法：包括免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。（2）臨床意義 ：TIgE升高常見(jiàn)于過(guò)敏性疾病 ，當(dāng)患者有選擇性IgA缺乏癥，感染、腫瘤和其他情況（輸血、川崎病、腎病綜合癥、肝臟疾病）時(shí)也出現(xiàn)血清TIgE升高。單純TIgE升高不能作為疾病診斷依據(jù)，也不能說(shuō)明患者屬于特異質(zhì)個(gè)體；TIgE正常也不能排除變態(tài)反應(yīng)疾病。 第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) （3）血清總IgE檢測(cè)的應(yīng)用評(píng)價(jià)：免疫比濁和化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好，測(cè)定自動(dòng)化、檢測(cè)時(shí)間短

7、；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方便、實(shí)用，敏感性和特異性均好，不需要特殊儀器。血清tIgE含量受多種因素的影響，因此，在分析血清tIgE結(jié)果時(shí)須建立當(dāng)?shù)厝巳簍IgE水平的參考區(qū)間。第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 2特異性IgE（specific IgE，sIgE）檢測(cè)（1）檢測(cè)方法：包括放射免疫試驗(yàn)、免疫印跡和熒光酶免疫試驗(yàn)。 放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn) （radioallergosorbent test，RAST）RAST是目前公認(rèn)的檢測(cè)型超敏反應(yīng)的有效方法之一 。根據(jù)標(biāo)記物不同分為：RAST RIA 、RAST EIA 、RAST FEIA。第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 免疫印跡應(yīng)用免疫印跡檢測(cè)sI

8、gE時(shí)，因?yàn)镃CD的存在，可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)，影響結(jié)果判定。交叉反應(yīng)性碳水化合物決定因子（Cross-reactive Carbohydrat Determinant，CCD）：是指變應(yīng)原分子結(jié)構(gòu)中包含的能與蛋白質(zhì)結(jié)合的寡聚糖側(cè)鏈，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性IgE。抗CCD的sIgE不引起過(guò)敏反應(yīng)，但可以造成血清學(xué)變應(yīng)原檢測(cè)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 熒光酶免疫試驗(yàn)（fluorescent enzymeimmunoassays，F(xiàn)EIA）是利用酶標(biāo)記抗體（抗IgE）與待測(cè)樣本（血清sIgE）反應(yīng)，借助酶催化熒光底物，經(jīng)酶促反應(yīng)生成穩(wěn)定且高效的熒光物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定熒光強(qiáng)度確定待測(cè)

9、樣本sIgE的含量。第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) （2）sIgE檢測(cè)的臨床意義 ：sIgE檢測(cè)可以與變應(yīng)原皮試和支氣管激發(fā)試驗(yàn)互為補(bǔ)充，但不能完全代替后兩種試驗(yàn)。（3）sIgE檢測(cè)的應(yīng)用評(píng)價(jià)： RAST方法檢測(cè)效率低（每次只能檢測(cè)一種變應(yīng)原）；有放射性核素污染風(fēng)險(xiǎn)；當(dāng)待測(cè)血清中含有相同特異性IgG時(shí)可干擾正常結(jié)果。免疫印跡無(wú)污染、無(wú)需特殊設(shè)備、操作簡(jiǎn)單、能一次性確定多種變應(yīng)原，故廣泛應(yīng)用。熒光酶免疫試驗(yàn)的敏感性和特異性均較好，但使用熒光素做標(biāo)記時(shí)，試劑的使用有效期較短。第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 3. IgG4檢測(cè)（1）檢測(cè)方法：包括放射免疫試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫比濁等。（

10、2）臨床意義 ： IgG4異常增高可見(jiàn)于型超敏反應(yīng)性疾病和IgG4相關(guān)性疾病。此外，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病患者血清中亦可出現(xiàn)IgG4水平升高。 第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 4細(xì)胞脫顆粒測(cè)定（1）類胰蛋白酶測(cè)定：作為肥大細(xì)胞活化、脫顆粒的指標(biāo)。一般采用雙抗體夾心ELISA法。（2）嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒測(cè)定：該試驗(yàn)陽(yáng)性不僅能夠證實(shí)sIgE的存在，而且能夠證明sIgE是有功能的，較單純皮膚試驗(yàn)或sIgE陽(yáng)性結(jié)果更有臨床意義。（3）嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(eosinophil cationic protein，ECP)測(cè)定：作為嗜酸性粒細(xì)胞活化、脫顆粒的指標(biāo)。ECP測(cè)定包括熒光

11、免疫試驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和放射免疫試驗(yàn)等多種方法。 第一節(jié)第一節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 第二節(jié)第二節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 第二節(jié)第二節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 型超敏反應(yīng)：又稱為溶細(xì)胞型或細(xì)胞毒型超敏反應(yīng)，特點(diǎn)是由IgG或IgM類抗體與靶細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合后，在補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞和NK細(xì)胞參與下，引起的以細(xì)胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應(yīng)，發(fā)作較快。第二節(jié)第二節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 一、型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法（一）抗血細(xì)胞抗體檢測(cè)方法1抗球蛋白試驗(yàn)（antiglobulin test，AGT），即Coombs試驗(yàn)。2. 微柱凝膠法第二節(jié)第二節(jié) 型超敏反應(yīng)型超

12、敏反應(yīng) -+雙群+RBC通過(guò)凝膠，沉積在管底凝集RBC在凝膠下部凝集RBC在凝膠中部凝集RBC在凝膠頂部；未凝集RBC在管底凝集RBC在凝膠中上部凝集RBC在凝膠頂部，呈線條形2凝聚胺法：原理：低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度促進(jìn)不完全抗體與紅細(xì)胞抗原結(jié)合；高價(jià)陽(yáng)離子多聚物（凝聚胺）中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷使IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液由凝聚胺引起的非特異性凝集分散；由抗體介導(dǎo)的特異性凝集不分散。結(jié)果判定：凝集塊在短時(shí)間（1分鐘）內(nèi)分散判斷為陰性；形成不同強(qiáng)度的凝集塊判斷為陽(yáng)性。 3酶介質(zhì)法：原理是IgG型不完全抗體與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合不能形成肉眼可見(jiàn)的凝集。加入酶介質(zhì)后，紅細(xì)胞膜表面

13、的唾液酸糖肽被破壞，細(xì)胞膜表面負(fù)電荷減少，細(xì)胞間排斥力減小，細(xì)胞之間距離縮小，呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集。最常用的酶是1%的木瓜酶或菠蘿蛋白酶。 第二節(jié)第二節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) （二）自身抗體檢測(cè) 常見(jiàn)的介導(dǎo)型超敏反應(yīng)的自身抗體還包括抗乙酰膽堿受體抗體、抗促甲狀腺激素受體抗體以及抗腎小球基底膜型膠原抗體和抗腎小管基底膜抗體等。 檢測(cè)方法：間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）。檢測(cè)時(shí)，以特異性組織切片作為檢測(cè)基質(zhì)。 第三節(jié)第三節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)第三節(jié)第三節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 型超敏反應(yīng)：又稱為免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)，是由抗原和抗體結(jié)合形成

14、中等大小的可溶性免疫復(fù)合物沉積于局部或全身多處毛細(xì)血管基底膜后，激活補(bǔ)體，并在中性粒細(xì)胞、血小板、嗜堿性粒細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞參與下，引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主要特征的炎癥反應(yīng)和組織損傷。 第三節(jié)第三節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 一、型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法類別類別 原理原理 方法方法 敏感度（敏感度（g） 物理法 溶解度 PEG比濁試驗(yàn) 20 補(bǔ)體法 結(jié)合C1q C1q固相試驗(yàn) 0.1抗球蛋白法 結(jié)合RF mRF固相抑制試驗(yàn) 120細(xì)胞法 補(bǔ)體受體 Raji細(xì)胞試驗(yàn) 6第三節(jié)第三節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 二、型超敏反應(yīng)免疫復(fù)合物檢測(cè)的臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià)（一）臨床意義免疫復(fù)

15、合物陽(yáng)性或濃度升高主要見(jiàn)于感染性疾病和自身免疫性疾病。CIC的消長(zhǎng)可反映病情的嚴(yán)重程度、檢測(cè)治療效果。須對(duì)比多次檢測(cè)結(jié)果才能證實(shí)其與疾病的相關(guān)性。對(duì)有蛋白尿、關(guān)節(jié)痛、血管炎、漿膜炎、紫癜癥狀等診斷不明確的患者，可考慮檢測(cè)循環(huán)免疫復(fù)合物，并結(jié)合局部免疫復(fù)合物的免疫組化檢測(cè)結(jié)果以明確病變是否與型超敏反應(yīng)有關(guān)。第三節(jié)第三節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) （二）應(yīng)用評(píng)價(jià)目前臨床上多采用PEG比濁試驗(yàn)檢測(cè)循環(huán)免疫復(fù)合物，此法操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速、易于推廣，但不能區(qū)別免疫復(fù)合物分子大小，干擾因素多，特異性較差，僅適用于循環(huán)免疫復(fù)合物的粗篩。循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)方法種類較多，原理各異，對(duì)同一標(biāo)本采用不同檢測(cè)方法獲得的

16、檢測(cè)結(jié)果不盡相同。迄今，臨床上尚未有公認(rèn)的準(zhǔn)確、特異、敏感、簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法和理想的標(biāo)準(zhǔn)參考品。因此建議聯(lián)合應(yīng)用多種方法，以提高準(zhǔn)確性和特異性。第三節(jié)第三節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 第四節(jié)第四節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)第四節(jié)第四節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 型超敏反應(yīng)：由效應(yīng)T細(xì)胞與特異性抗原結(jié)合后，引起以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)和組織損傷為主要特征的炎癥反應(yīng)。由于T細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)需要經(jīng)過(guò)效應(yīng)分子的合成階段，因而進(jìn)程較為緩慢，通常在再次接觸相同抗原后24小時(shí)72小時(shí)發(fā)生，故型超敏反應(yīng)又稱為遲發(fā)型超敏反應(yīng)（delayed type hypersensitivity，DTH）。第四節(jié)第四節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏

17、反應(yīng) 一、型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法1 型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)原理： 使用皮內(nèi)注射、皮膚斑貼等方法使變應(yīng)原進(jìn)入已經(jīng)致敏的機(jī)體，體內(nèi)致敏的T細(xì)胞再次接觸到變應(yīng)原后，釋放多種細(xì)胞因子，造成局部以單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)。24小時(shí)48小時(shí)后局部出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)、水皰等現(xiàn)象，以此來(lái)判斷變應(yīng)原是否引起機(jī)體型超敏反應(yīng)或機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。2型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)方法：包括結(jié)核菌素皮試和斑貼試驗(yàn)兩種 。第四節(jié)第四節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 反應(yīng)程度反應(yīng)程度 皮內(nèi)試驗(yàn)斑貼試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)斑貼試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)斑貼試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)斑貼試驗(yàn)-無(wú)反應(yīng)或小于對(duì)照無(wú)反應(yīng)或小于對(duì)照+僅有紅腫輕度紅腫、瘙癢+紅腫伴硬結(jié)明顯紅

18、腫、時(shí)有紅斑+紅腫、硬結(jié)、水皰紅腫伴豆疹、水皰+大皰和（或）潰瘍紅腫、水皰、潰瘍型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn) 第四節(jié)第四節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 二、型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià)（一）臨床意義1尋找變應(yīng)原 2結(jié)核菌素皮試意義：了解機(jī)體是否對(duì)結(jié)核菌素有免疫力及接種卡介苗后的免疫效果觀察 ；排除結(jié)核菌感染 ；了解機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀況 。3傳染病的診斷 （二）應(yīng)用評(píng)價(jià)結(jié)核菌素皮試不但可以判斷機(jī)體是否對(duì)變應(yīng)原過(guò)敏，而且可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀況。斑貼試驗(yàn)雖然敏感度不太高，但假陽(yáng)性較少。第四節(jié)第四節(jié) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 本章小結(jié)本章小結(jié)型超敏反應(yīng)性疾病的變應(yīng)原檢測(cè)方法分為體內(nèi)檢測(cè)和體外檢測(cè)（血清學(xué)檢測(cè)）兩種。體內(nèi)檢測(cè)主要包括皮膚試驗(yàn)和激發(fā)試驗(yàn)。體外檢測(cè)包括血清總IgE檢測(cè)、特異性IgE檢測(cè)（即變應(yīng)原篩查）和血清IgG4檢測(cè)，應(yīng)用的免疫學(xué)檢測(cè)方法包括放射免疫試驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)、熒光免疫試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。