1、LCTECH GPC ULTRA（全在線預濃縮-凈化-定量濃縮聯用）操作說明一、 原理GPC（Gel Permeation Chromatography）凝膠凈化色譜是根據溶質分子大小進行分離的色譜技術，選擇性僅與分子大小的差異有關。要改進分離度只能靠凝膠的孔徑大小和孔徑分布的最佳化來實現。試樣的分離并不依賴于溶劑與試樣間的相互作用力（與一般色譜的不同）。輸液泵將流動相與樣品帶入凈化柱，試樣中各組分按照分子大小順序洗脫，大分子油脂、色素、生物堿、聚合物先淋洗出來農藥等較小分子后淋洗出來，檢測器檢測出信號，組分收集器收集含有目標組分的洗脫液。二、 操作注意事項1、 硬件部分主機電源只用

2、開一個，開關機間隔1 min以上；冷凝水開關三個，確保冷凝水箱是滿的；真空瓶需用防爆瓶，收集瓶盡量也用防爆瓶；定期倒掉廢液，檢查廢液瓶容積；不要觸摸進樣針，只有在儀器處于關閉狀態時，才可用手移動機械臂；定量環5 mL，一次準確上樣5 mL，二聯機實際吸取樣品大于5 mL（滿環上樣）。2、 凝膠凈化柱農殘標準柱：Bio-Breads S-X3 200-400目，柱長400 mm，內徑25 mm，流速一般5 mL/min。一根柱子一般可用2-3年，可分析5000個樣品。3、 樣品去除樣品中可見雜質；樣品脫水；上柱時樣品必須是環己烷/乙酸乙酯體系，丙酮極性大進柱子會使填料膨脹；含油量高的樣品，上樣1

3、 g，因為油含量太高容易堵塞柱子上下過濾膜。4、 儀器維護避免柱干，儀器不用時一個星期沖一次，對于沸點高的體系2-3個星期沖一次也行。沖洗方法為：直接開主機電源，按泵上start按鈕，以5 mL/min速度沖15 min（約75 mL溶劑）。5、 故障清除泵壓：液相泵壓力顯示范圍為0.2-11.2 Bar。低壓報警：低于0.2 Bar時，說明管路中有氣泡，在stop（不工作）模式下，松開半圈黃色閥門，兩只手同時按住鍵排氣泡，直到氣泡排除干凈松開兩只手，擰緊閥門即可。高壓報警：柱子堵了，柱子流向是下進上出，一般進口端（下端）易堵，此時可將柱子反接，沖洗一段時間排除故障。反壓閥（阻尼器）堵了，將其

4、拆下不接入管路，開泵沖洗管路，如果壓力到1 Bar，說明阻尼器堵，此時將阻尼器用丙酮超聲15 min后重新接入管路中。閥未切回來也可導致壓力過高，重新開機自檢一般可排除故障，如果不行，說明閥出問題。在儀器運行樣品處理程序時，如要停止運行，需要關閉電源開關，如要繼續執行處理程序，在關閉電源開關一分鐘后，再重新開機。處理程序被取消后，一旦儀器再次開機并且自檢完畢后，需要通過樣品表執行清洗程序（按F1鍵選擇）。三、 軟件介紹UltraSoft_1.17：更穩定，不能保存紫外譜圖UltraSoft_2.08：可以保存紫外譜圖GPC_Ultra_Concentrator：濃縮模式GPC_Ultra_On

5、line_GPC：在線模式GPC總共有三種模式： 單濃縮：一次可分析26個樣，定容到2 mL/5 mL 二聯機：凈化+定量濃縮，滿環上樣，上樣會有損失，一般預先將樣品定容到10 mL，只上樣5 mL。 三聯機：預濃縮+凈化+定量濃縮（+），全部上樣，沒有損失。三個樣品盤： 多用盤：單濃縮+三聯機，樣品瓶（100 mL）/收集瓶（16 mL） 二聯機：樣品瓶（16 mL）/收集瓶（2 mL×2）/收集瓶（4 mL×1） 三聯機：樣品瓶（60 mL）/收集瓶（2 mL×2）/收集瓶（4 mL×1）更換樣品盤時，凹槽對準中心軸在離線狀態下更換最佳，如果是在線更

6、換，需重新selftest自檢。四、 GPC_Ultra_Concentrator（單濃縮模式）點擊桌面GPC_Ultra_Concentrator進入單濃縮界面，菜單欄中system圖標亮成綠色，表示連機正確。輸入密碼admin，點擊屏幕中綠色的按鈕logon進行登錄，登錄成功時工具欄被激活，否則工具欄是灰色的。1、 自檢點擊（status）進入系統狀態窗口，每當儀器重新開機或改換樣品盤后，都需要進行系統自檢。自檢操作過程：點擊“selftest”-選擇正確的樣品盤-再點擊“selftest”儀器將進行自檢程序。2、 方法編輯點擊圖標可創建新方法或對以已建立好的方法進行參數修改。每個方法可輸

7、入方法名稱、方法 ID 號和詳細說明，進行方法的詮釋，這些方法的內容可打印在試驗樣品記錄中。在編輯樣品序列時，可選擇相應的方法 ID 號來指定樣品運行的方法。總共可編輯存儲 97 個方法（#1#97），如果只做單濃縮，在1-19,41-98中編輯，因為20-40是三聯機預留方法。如果做三聯機，則需要在單濃縮和二聯機模式下都編輯好相應方法參數，且方法序數（20-40號）要一致，最后在單濃縮模式下編輯序列運行。二聯機模式的話隨便哪個方法序號都可以。首先在open/save中選擇方法序數，Name中輸入方法名稱，Procedure中選擇運行程序。方法參數編輯好后，必須在“PC”和“system”中都

8、進行保存。 單濃縮程序說明：Procedure 1 System rinsing program 系統內部清洗程序(只清洗不上樣)，默認設定，不需要修改。Procedure 2 Standard Evaporation 標準濃縮模式 先大體積（高位激光5 mL）小體積（低位激光2 mL）定容到5 mL，需注意的是，5 mL樣品不是能夠完全被轉移出來的，管子有一定的內徑。Procedure 3 Concentrate for SPE 用于 SPE 的快速濃縮模式，不定容，體積不準，樣品直接轉移到原樣品瓶。Procedure 4 Solvent Exchange Complex不蒸干溶劑轉換，只能

9、是低沸點溶劑變成高沸點溶劑轉換，一般2-3次可轉換完全，定容體積5 mL。Procedure 6 Precess to Dryness蒸干溶劑轉換，可用于高沸點溶劑轉換成低沸點溶劑，適用于相對干凈的樣品，不會在濃縮腔壁上產生沉淀，定容體積5 mL。Procedure 7 & Internal Standard加入內標標準濃縮，不需要通過激光的準確判斷，直接濃縮到低位激光，過程更快，定容體積2 mL。 參數編輯 單濃縮部分主要是溫度和真空度影響實驗結果，真空度為主，溫度為輔。以溶劑沸點60-70為分界點，低沸點溶劑油浴溫度為33-35，真空度360-400 mbar；高沸點溶劑油浴溫度為

10、40，真空度180-200 mbar。Parameters in Process to Upper Laser 第一次濃縮（高位濃縮，5 mL）Heat Bath Temperature（油浴溫度）：30-70 乙酸乙酯/環己烷作為流動相，濃縮腔最佳溫度為40。如使用不同的溶劑，濃縮腔溫度設定必須要與相應溶劑的沸點相對應。Nominal vacuum（真空度）：濃縮腔設定真空度大約要低于1040mbar相對應溶劑的蒸汽壓。Shut Down vacuum（結束真空度）：設置與Nominal vacuum相同即可。Automatic Mode（自動模式）：不打勾，自動模式適用于復雜體系的濃縮。自

11、動模式下前面設置的溫度和真空度都沒用。Frequency Limit of the Vacuum Pump：默認值30 HZParameters in Process to Lower Laser 第二次濃縮（低位濃縮，2 mL）Heat Bath Temperature（油浴溫度）：一般與第一次濃縮一致。Nominal vacuum（真空度）：真空度要比濃縮過程1的真空度低，為了在一個緩和的條件下濃縮。此階段真空度可以設定為所用溶劑的蒸汽壓。真空濃縮壓力程序2設定壓力范圍10500mbar。其它同第一次濃縮。Sample Transfer to Vacuum Chamber 將樣品吸入濃縮腔

12、參數的設定vacuum for Sample Suction（抽樣真空度）：一般設定700-800 mbar。沸點越低設定數值越高。乙酸乙酯/環己烷體系777 mbar。Batch Interval（進樣間隔）：當樣品體積大于100 mL時，先抽100 mL樣品進入濃縮腔，先濃縮一段時間，再將剩余的樣品抽入濃縮腔繼續濃縮。一般設成600 s。Rinsing Cycles of Sample bottle（清洗次數）：一般清洗1次。Solvent (red/grey/viol/oran)（清洗溶劑）：可以選擇不同顏色接口瓶中的溶劑。Rinsing volume for Sample Vial（清

13、洗體積）：一般3000 L。sediment of Sample（含沉淀物樣品）： NO =低位置取樣，樣品瓶底部（無沉淀），YES =高位置取樣，進樣針在距瓶底大約10mm的位置（樣品有沉淀物）。Parameters for the ProcessSolvent Exchange SE 溶劑轉換參數設定只有在Procedure 4 Solvent Exchange Complex時才有用。Heat Bath Temperature（油浴溫度）：設置成轉換后高沸點溶劑相對應的溫度。Nominal vacuum（真空度）：設置成轉換后高沸點溶劑相對應的真空度。Shut Down vacuum（結

14、束真空度）：設置與Nominal vacuum相同即可。Automatic Mode（自動模式）：不打勾，自動模式適用于復雜體系的濃縮。自動模式下前面設置的溫度和真空度都沒用。Frequency Limit of the Vacuum Pump：默認值30 HZ。Solvent used for solvent exchange（轉換溶劑）：可以選擇不同顏色接口瓶中的溶劑。Volume of Solvent used for SE（轉換溶劑體積）：指一次轉換的體積，一般3000 L。Number of SE-Cycles（轉換次數）：一般4次。Rinsing after Process dow

15、nto upper Laser Level 濃縮到高位激光位的清洗當樣品濃縮到高位激光位后，將抽1-2 mL溶劑進行濃縮腔的清洗，一般清洗兩次就滿足清洗效果。清洗溶劑種類可通過1-4鍵進行選擇。Rinsing volume：2000 LRinsing Cycles：2 timesSolvent for (red/grey/viol/oran):Rinsing after Process downto Lower Laser Level 濃縮到低位激光位的清洗濃縮到低位激光位時（已經有2 mL了），濃縮腔清洗參數設定時，要注意溶劑用量不能過多（1st+ 2nd3 mL），不然溶劑量超過高位激光位

16、，儀器不進行定容。如溶劑用量過少，清洗效果不夠，會影響回收率。Solvent Volume for 1st Rinsing：1500 LSolvent Volume for 2nd Rinsing：1500 LSolvent Type used for Rinsing（清洗溶劑）：可以選擇不同顏色接口瓶中的溶劑。Filling Volume of concentrate（濃縮后轉移出來的體積）：全部轉移5000 L（實際小于5000 L，因為管路有殘留）。如果設置成2 mL，說明另外3 mL排廢。特別注意：如果用Procedure 7 & Internal Standard內標濃縮程序

17、時，因為最終定容體積是2.0 mL，所以1st Rinsing（250 L），2nd Rinsing（250 L）Dilution of Concentrate 樣品稀釋為下一步過柱子做準備，一般不用。Volume for Dilution Concentrate（稀釋體積）：0 LRinsing of Chamber 系統清洗Solvent for Pre-Rinsing of Chamber（預清洗）：一般用4.grey丙酮清洗Solvent for Main-Rinsing of Chamber（主清洗）：一般用7.orange乙酸乙酯和環己烷清洗Solvent Volume for R

18、insing the Chamber（主清洗體積）：指每次所以體積，3000 LNumber of rinsing cycles（清洗次數）：一般3次。 Cooler：一般6。方法參數編輯好后，必須在“PC”和“system”中都進行保存。3、 樣品序列編輯點擊圖標（sample）進入樣品序列編輯窗口，首先通過“Rack”下拉菜單選擇合適的樣品盤，選擇要使用的方法，點“”圖標，將該方法輸入在序列菜單中。序列是從1開始按順序運行，如果中間的某個樣品不想做了，但又不想影響后面的樣品，可以將該位置設置為方法 99（skip）。在序列最后一個樣品的后面一位，要設置為方法 0（Stop），顯示為桔黃色。

19、這意味著整個樣品序列的結束。樣品序列編輯好后，點擊進行保存并命名。特別說明：如果連接了紫外檢測器，則有可能需要自動保存紫外圖譜。自動保存需要在序列的樣品名前加上$。否則，序列里的圖譜均無法自動保存，只有最后一個樣品做完后，可以手動的點擊“Save”保存。4、 運行序列重新回到status狀態窗口，點擊（open）圖標，調出編輯好的樣品序列，點擊“start process”按鈕，儀器運行樣品方法。開始運行后，根據樣品盤上的不同的顏色來表示樣品處于的不同狀態。運行結束后，也會在信息欄里告知，而且所有運行完的樣品顯示為綠色。5、 紫外檢測器的操作點擊圖標進入紫外檢測器數據監測窗口，在可以實時觀察紫

20、外光譜圖或打開已保存紫外光譜圖。特別說明：紫外光譜圖察看和處理必須是在二聯機或 GPC Vario 中進行。如需將樣品運行時監測紫外光譜圖進行保存，需在編輯樣品序列時，在樣品名前加前綴“$”。在紫外監測窗口點擊圖標，可以打開以保存的紫外光譜圖。此窗口可以同時顯示 6 條紫外光譜曲線，通過勾選曲線“t”和“plot”方框，可以顯示紫外光譜圖的時間和光譜吸收峰。6、 查看和打印試驗記錄點擊圖標進入試驗記錄窗口，窗口中將顯示樣品、方法和序列的描述和樣品處理程序的參數等信息。通過點擊圖標可以直接打印此窗口頁面。五、 GPC_Ultra_Online_GPC（二聯機模式）點擊桌面GPC_Ultra_On

21、line_GPC進入二聯機界面，菜單欄中system圖標亮成綠色，表示連機正確。輸入密碼admin，點擊屏幕中綠色的按鈕logon進行登錄，登錄成功時工具欄被激活，否則工具欄是灰色的。1、 自檢同單濃縮模式2、 方法編輯點擊圖標可創建新方法或對以已建立好的方法進行參數修改。每個方法可輸入方法名稱、方法 ID 號和詳細說明，進行方法的詮釋，這些方法的內容可打印在試驗樣品記錄中。在編輯樣品序列時，可選擇相應的方法 ID 號來指定樣品運行的方法。總共可編輯存儲 97 個方法（#1#97），二聯機模式的話隨便哪個方法序號都可以。首先在open/save中選擇方法序數，Name中輸入方法名稱，Proce

22、dure中選擇運行程序。方法參數編輯好后，必須在“PC”和“system”中都進行保存。 二聯機程序說明：Procedure 1 System rinsing program 系統清洗程序(只清洗不上樣)，默認設定，編輯方法時不需要修改。Procedure 3 GPC with int. StandardGPC 凈化后濃縮定容到2 mL，可使用內標（2 mL體積怕不準）.Procedure 4 GPC+ ALiqGPC 凈化后濃縮定容到 5 mL，可實現分樣收集功能。程序 4 要求將濃縮后的樣品準確的分樣收集在*2，*3，*4 的 3 個位置中的瓶子內。當分析的樣品要求上不同檢測器檢測 S、N

23、、P 時，收集的樣品可以分別上檢測器分析。Procedure 5 GPC + SE + Aliq GPC不蒸干溶劑轉換。凈化濃縮后實現溶劑轉換后定容到 5 mL，并可實現分樣功能，轉換的溶劑默認選用 Voilet （紫色瓶）的溶劑，注意正確選用轉換溶劑。Procedure 7 GPC Elluet to Dryness蒸干溶劑轉換。定容到 5 mL。Procedure 13 Flask rinsing program 濃縮腔清洗程序，全自動，不需要設定參數。只有濃縮腔和 VK 閥會被清洗。這是讓用戶專門的單獨清洗濃縮腔的程序。其中，只需要設置油浴溫度，清洗閥和濃縮腔的次數。 參數編輯根據標準方

24、法上規定的餾分收集時間來設定，需要注意的是我們的GPC柱長400 mm，內徑25 mm，如果標準方法與之不同，需對應修改，也可參照經驗值設定。Parameters for Process column Clean Up GPC上樣過程參數設置GPC Flow rate（GPC流速）：默認5 mL/minColumn Pre-Clean Timer（預沖洗時間）：10-30 sGPC Forerun（丟棄時間）：GPC-Main Fraction（收集時間）：GPC-Tailing（沖洗時間）：300 s夠了Column Selection：默認值Sedimentation of sample：

25、不打勾Solvent Exchange（溶劑轉換次數）：只針對Procedure 5 有用，轉換的溶劑默認選用 Voilet （紫色瓶）的溶劑，一般3-4次足夠。Parameters for Process Clean Up the System 系統清洗為保證系統連續工作，在處理樣品期間要進行沖洗，包括進樣環和注射口。根據標準，清洗3次便可以達到滿意的清潔效果，無須過分追求清洗的次數。Rinsing：3 timesRinsing Needle：3 timesParameters for Vacuum process 濃縮過程設置Heating Bath Temperature（油浴溫度）：30-70 乙酸乙酯/環己烷作為流動相，濃縮腔最佳溫度為40。如使用不同的溶劑，濃縮腔溫度設定必須要與相應溶劑的沸點相對應。Pressure Phase 1（第一步濃縮）：濃縮腔設定真空度大約要低于1040mbar相對應溶劑的蒸汽壓。乙酸乙酯/環己烷體系180-200 mbar。Pressure Phase 2（第二步濃縮）：真空度要比濃縮過程1的真空度低。乙酸乙酯/環己烷體系200-220 mbar。Press