分子克隆——主要步驟_第1頁
分子克隆——主要步驟_第2頁
分子克隆——主要步驟_第3頁
分子克隆——主要步驟_第4頁
全文預覽已結束

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、筆記3 （分子克隆2要步驟）創作：歐陽總時間:2021.02. 13分子克隆可以分為以下幾個步驟（1）帶有目的基因的DNA片段的獲得（2） 重組DNA分子的構建（3） 重組DNA分子的轉化和重組克隆的篩選（4） 特定重組克隆的鑒別分離制備待克隆的DNA片段將靶DNA片段與載體在體外進行連接重組DNA分子轉入宿主細胞篩選、鑒定陽性重組子重組子的擴增。7?帶有目的基因的DNA片段的獲得：可以用扛£上£dna,再配合使用其他實驗手段得到待定的DNA片段，可以用組成的DNA片段，可以應mRNA做模板，用反律介成互補DNA,即cDNA,也可以應化學合 成的方法玄接合成一段DNA o2

2、?重組DNA分子的構建：重組DNA分子中包括兩部分， 一部分是外源DNA,即 目 的DNA片段，另一部分是載體DNA。用作載體的，有質 粒、 噬菌體或病毒DNA。它們的基本特征是能夠獨立復制。如果用同一種限制性內切酶切割這兩種 DNA,則它們的末端完全相 同，由于有互補的單鏈末端序列存在，在連接酶的作用下，就可以形成重組DNA分子。在沒有互補單鏈末端的情況下， 也可以用酶學方法造成一個互補單鏈末端之后再進行連接。3?重組DNA分子的轉化和重組克隆的篩選：重組DNA分子必須進入宿主細胞中，才能得到擴增和表達.這個過程叫做 轉化。大腸桿菌是目前使用最廣泛的 宿主細 胞。除此以外.其他細菌、酵母、哺

3、乳動物細胞等也可作為宿主細胞，可以根據實驗的需要加以選擇。在被轉化的宿主細胞中，不同的單個細胞（在平板上表現為單個菌落，亦稱克隆）中可能含有不同的重組質粒或非重組質粒，因此必須進行篩選，以便確定哪些是重組克隆。篩選可以使用抗菌素抗性或其他方法，依載體的性質而定。4 ?特定重組克隆的鑒別: 由于重組克隆往往是較多的，而在某一克隆實驗中,們感興趣的目的克隆只有一個或幾個，所以需要進一步鑒別。使用的方法匚要仃 核酸雜交法和免疫化學法。1I，找出了目的克隆之后，還需要根據實驗的目的，進一步弄清目的克隆中外源 DNA片段上的基因的結構和功育匕主要有酶切圖譜的制定，基因在DNA片段上的精確定位，確定是否有內含子，DNA序列分析，離體

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論