1、分光光度計測定微量鐵一、目的1、學習如何選擇吸胱光度分析的實驗條件。2、掌握用吸光光度法測定鐵的原理及方法。3、掌握分光光度計的使用方法。二、原理1、光度法測定的條件：分光光度法測定物質含量時應注意的條 件主要是顯色反響的條件和測定吸光度的條件。 顯色反響的條件有顯 色劑的用量，介質的酸度、顯色時溫度、顯色時間及干擾物質的消除 方法等；測量吸光度的條件包括入射光波長的選擇、吸光度圍和參比 溶液等。2、二氮雜菲-亞鐵絡合物：鄰二氮雜菲是測定微量鐵的一種較好 的試劑。在pH=29的條件下Fe2+離子與鄰二氮雜菲生成穩定的橘 紅色絡合物，此絡合物的lgK穩=21.3,摩爾吸光系數匕10=1.1 X1

2、。4在顯色前，首先用鹽酸羥胺把Fe3+離子復原為F6 離子，其反響式如下：2Fe3+2NH 20H HCl-2 Fe2+N 2+2H2O+4H+2Cl-測定時，控制溶液酸度在pH=5左右較為適宜。酸度過高，反響 進展較慢；酸度太低，那么 Fe2+離子水解，影響顯色。Bi3+, Cd2+, Hg2+, Ag+, Zn2+等離子與顯色劑生成沉淀，C/, Cu2+, Ni2+等離子與顯色劑形成有色絡合物。 因此當這些離子共存時， 應注意它們的干擾作用。三、試劑10 w g/m的鐵標準液；鹽酸羥胺固體及10%溶液因其不穩定, 需臨時用時配；0.1%4B二氮雜菲新配制；1mol/LNaAc溶液。 四、標

3、準鐵的制備稱取0.7022麻酸亞鐵鏤Fe(NH4)2(SO4)26H2O,置于燒杯中，參 加6mol/L HCL 20ml和少量水，溶解后定容1L.溶于70ml硫酸溶液中， 滴加0.02mol/L的高鎰酸鉀溶液至出現微紅色不變，用純水定容至 1000ml。止匕貯備溶液 1.00ml 含 0.100mga。五、指示劑的選擇原那么指示劑也有酸堿性，指示劑一般是有機物，酸堿濃度太大有可能 破壞指示劑少數，而且濃度太高你每一滴里的酸堿就多，不可能 恰好滴適宜的酸堿，總是要多半滴，濃度越高差的越多是根據所需要 的PH值確實定的，其值在所選擇的指示劑的突越圍。這樣溶液才能 夠有顏色的變化，才能夠判斷終點六

4、、步驟1、吸收曲線的繪制準確移取10 (1 g/mL鐵標準溶液 5mL 于50mL容量瓶中，參加10%鹽酸羥胺1mL, 搖勻，稍冷，參加 1mol/L NaAc溶液5mL和0.1%鄰二氮雜菲3mL,以水稀釋至刻度,在分光光度計上，用1cm比色皿，以水為參比溶液，用不同的波長從 430 nm開場到 570nm為止，每隔10nm或20nm測定一次 吸光度。然后以波長為橫坐標，吸光度為縱 坐標繪制吸收曲線，從吸收曲線上確定該測 定的適宜波長。2、鐵含量的測定*1標準曲線的繪制：取 50 mL容量 瓶或比色管6支，分別移取2mL、4mL、 6mL、8mL,鐵標準溶液于 5支容量瓶中， 另一容量瓶中不加

5、鐵標準溶液 配制空白溶 液，作參比。然后各參加 1mL10%鹽酸羥 胺，搖勻，經2min后，再各加5ml 1mol/LNaAc溶液及3ml 0.1%鄰二氮雜菲， 以水吸稀釋至刻度，搖勻。在分光光度計上，用1cm比色皿，在最大吸收波長510nm處，測定各溶液的吸光度。以鐵含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。2未知液中鐵含量的測定：分別二次吸取 10mL未知液代替 標準溶液，其它步驟均同上，測定吸光度。由未知液的吸光度在標準 曲線上查出10mL未知液中的鐵含量，然后以每毫升未知液中含鐵多 少微克表示結果。3、繪制吸收曲線一對各項測定結果進展分析并作出結論：例如從吸收曲線可得出：鄰二氮雜菲亞

6、鐵絡合物在波長 510nm處吸光度最大，因此測定時宜 選用的波長為510nm。1、吸收曲線的繪制波長nm吸光度A5705505305205105004904704504302標準曲線的繪制與鐵含量的測定試液編號標準溶液的量 V/mLm總含鐵量四吸光度A10022.02034.04046.06058.080610.0100未知液七、未知鐵量的測定測的各標液的吸光度，畫標準曲線；再根據未知鐵液的吸光度，在標準曲線上找出對應的鐵量，進而求未知溶液中鐵的含量。八、分光光度計的使用分光光度法測量的理論依據是朗伯-比耳定律：當一束單色光通過一定濃度的稀有色容液時，溶液對光的選擇吸收程度A與溶液的濃度或液層

7、成正比即A=kcL=log(I 0/I),式中：A為吸光度，表示光通過溶液時被吸收的強度；為有色溶液的濃度；I0為入射光強度；I為透 射光強度；L為液層的厚度；為k吸光系數，它與入射光的波長及溶 液的性質、溫度等有關，見右圖1所示。圖1光通過溶液當入射光強度I。、吸光系數k和溶液厚度L不變時，透射光強度 I只隨溶液中物質的量C而變化。因此，如果把通過溶液的光線通過 測光機構中的光電轉換承受器，并轉換成電能，在微電計上就讀出相應的透光率，從而推算出溶液濃度，工作原理見圖 2所示1、儀器預熱后，開場測量前反復調透光率0%和透光率100%。2、儀器連續使用不應超過2h,否那么，最好間歇 0.5h后再使用。3、比色皿洗滌必須干凈，拿取比色皿時，只能用手捏 住毛玻璃的兩面，裝待測液時，應用待測液潤洗2-3次，保 證待測液濃度不變，倒入的溶液應在2/3-3/4處而不要太滿, 放時應將透光面