1、記住：1、凝集與絮凝的區別：凝聚是指在電解質作用下， 由于膠粒之間擴散雙電層電位下降， 電排斥作用降低，破壞膠體體系的分散狀態，使之不穩定相互凝集成1mm 左右塊狀凝聚體的現象。絮凝指在某些高分子絮凝劑的作用下，基于架橋作用，使膠粒交聯成團、形成10mm大小的較大絮凝團的過程。采用凝聚方法得到的凝聚體，其顆粒是比較細小的，有時還不能有效的進行分離。采用絮凝法則可以形成粗大的絮凝體，使發酵液較容易分離。常用的凝聚劑電解質有：硫酸鋁 al2(so4)3 ?18h2o （明礬） ；氯化鋁 alcl3 ?6h2o; 三氯化鐵 fecl3; 硫酸亞鐵 feso4 7h2o ；石灰； znso4 ；mgc

2、o3 目前最常見：聚丙烯酰胺類絮凝劑fe3+的去除 可加黃血鹽使其形成普魯士蘭沉淀而除去。 4fe3+ + 3k4fe(cn)6=fe4fe(cn)63+ 12k+ 記住：雜蛋白的去除方法沉淀法 包括： 等電點沉淀法蛋白質的等電點大都在酸性范圍內(ph4.0 5.5) ，調節發酵液的 ph到蛋白質的等電點是除去蛋白質的有效方法。和酸堿調節，使蛋白質與離子形成沉淀在酸性溶液中，蛋白質與一些陰離子形成沉淀，如三氯乙酸鹽、水楊酸鹽、苦味酸鹽等；在堿性溶液中，蛋白質與一些陽離子形成沉淀，如ag+、cu2+ 、zn2+、fe3+等。變性：加熱，大幅度調節ph值，加酒精、丙酮等有機溶劑或表面活性劑等。吸附

3、法：加入某些吸附劑或沉淀劑吸附雜蛋白質而除去。記：板框過濾機過濾過程板框過濾機的操作是間歇式的，每個操作循環由裝合、過濾、洗滌、卸渣、整理五個階段。1) 、裝合：將板與框按 1-2-3-2-1-2-3的順序，濾板的兩側表面放上濾布，然后用手動的或機動的壓緊裝置固定，使板與框緊密接觸。 2) 、過濾：用泵把濾漿送進右上角的濾漿通道，由通道流進每個濾框里。濾液穿過濾布沿濾板的凹槽流至每個濾板下角的閥門排出。固體顆粒積存在濾框內形成濾餅，直到框內充滿濾餅為止。3) 、洗滌：將洗水送入洗水通道，經洗滌板左上角的洗水進口，進入板的兩側表面的凹槽中。然后，洗水橫穿濾布和濾餅，最后由非洗滌板下角的濾液出口排

4、出。在此階段中，洗滌板下角的濾液出口閥門關閉。4) 、卸渣、整理打開板框，卸出濾餅，洗滌濾布及板、框。記：細胞破碎（ cell rupture ）技術是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁，使細胞內物質包括目的產物成分釋放出來的技術。細胞壁結構對破碎的影響微生物細胞和植物細胞外層均為細胞壁，細胞壁里面是細胞膜， 動物細胞沒有細胞壁，僅有細胞膜。通常細胞壁較堅韌， 細胞膜脆弱， 易受滲透壓沖擊而破碎， 因此細胞破碎的阻力主要來自于細胞壁。不同細胞壁的結構和組成不完全相同，故細胞壁的機械強度不同， 細胞破碎的難易程度也就不同。記：細胞破碎方法及原理：機械破碎法、物理破碎法、化學滲透法、酶溶法記：包涵體復性

5、（間歇式流加稀釋復性法）概念？記：目標蛋白的復性原理：原理：在變性劑溶液中，溶解的蛋白質呈變性狀態，即蛋白質高級結構被破壞， 但一級結構和共價鍵沒有破壞。 當部分變性劑被除去后，蛋白質會重新折疊成具有活性的正確構型，該過程稱復性。記；鹽析的影響因素： 2）離子類型在相同離子強度下，鹽的種類對蛋白質溶解度的影響有一定差異，一般的規律為：半徑小的高價離子的鹽析作用較強，半徑大的低價離子作用較弱陰離子鹽析效果：檸檬酸 po43- so42- ch3coo- cl- no3-scn- 陽離子鹽析效果：nh4+ k+na+ 高價陽離子陰離子的影響大于陽離子四環素的沉淀提取四環素由鏈絲菌發酵獲得四環素等電

6、點 pi=5。當溶液的 ph 等于等電點時， 四環素易從水溶液中沉淀出來（游離堿），因此可用于四環素的提取。四環素又能與尿素形成1：1 的復鹽，從水溶液中沉淀出來，該復鹽溶于有機溶劑時，即分解成四環素和尿素。四環素與尿素的這一反應具有特異性：金霉素，土霉素都不能與尿素形成復合物沉淀。利用這一性質，可精制四環素。記：料液：在溶劑萃取中，被提取的溶液，溶質：其中欲提取的物質，萃取劑：用以進行萃取的溶劑，萃取液：經接觸分離后，大部分溶質轉移到萃取劑中，得到的溶液，余液：被萃取出溶質的料液。記：溶劑萃取法的特點萃取過程有選擇性能與其它步聚相配合通過相轉移減少產品水解適用于不同規模傳質快周期短，便于連續

7、操作毒性與安全環境問題記：記：雙水相萃取的優點1、使固液分離和純化兩個步驟同時進行，一步完成；2、適合熱敏物質的提取，主要是胞內酶；3、 親水性聚合物加入水中， 形成兩相，在這兩相中，水分都占大比例（7090） ，這樣生物活性蛋白質在兩相中不會失活，且以一定比例分配于兩相中；4、分相時間短， 515min；5、設備投資少，操作簡單，易于工程放大和連續操作；不存在有機溶劑殘留問題；大多數目標產物有較高的收率，分配系數一般大于3。記：膜分離的特點操作在常溫下進行；是物理過程，不需加入化學試劑；不發生相變化（因而能耗較低） ；在很多情況下選擇性較高（膜性能可調整）；易于與其他分離過程結合，濃縮和純化

8、可在一個步驟內完成；設備易放大，可以分批或連續操作。膜組件結構緊湊，操作方便，可頻繁啟停，易自控和維修；系統可密閉循環，防止外來污染。因而在生物產品的處理中占有重要地位記：膜材料的特性對于不同種類的膜都有一個基本要求：耐壓：膜孔徑小， 要保持高通量就必須施加較高的壓力，一般模操作的壓力范圍在 0.10.5mpa，反滲透膜的壓力更高，約為110mpa 耐高溫 : 高通量帶來的溫度升高和清洗的需要耐酸堿：防止分離過程中，以及清洗過程中的水解；化學相容性：保持膜的穩定性；生物相容性：防止生物大分子的變性；成本低；記：濃差極化的概念：這種膜面濃度高于主體濃度的現象稱為濃差極化。在分離過程中， 料液中溶

9、劑在壓力驅動下透過膜，大分子溶質被帶到膜表面， 但不能透過，被截留在膜的高壓側表面上，造成膜面濃度，于是在膜表面與臨近膜面區域濃度越來越高，產生膜面到主體溶液之間的濃度梯度，形成邊界層，使流體阻力與局部滲透壓增加，從而導致溶液透過流量下降，同時這種濃度差導致溶質自膜反擴散到主體溶液中，記；吸附的定義：利用吸附劑對液體或氣體中某一組分具有選擇性吸附的能力，使其富集在吸附劑表面，再用適當的洗脫劑將其解吸達到分離純化的過程。記：吸附劑通常應具備以下特征：（1）較高的選擇性以達到一定的分離要求；（2）較大的吸附容量以減小用量；（3）較好的動力學及傳遞性質以實現快速吸附；（4）較高的化學及熱穩定性，不溶

10、或極難溶于待處理流體以保證吸附劑的數量和性質；（5）較高的硬度及機械強度以減小磨損和侵蝕；（6）較好的流動性以便于裝卸；（7）較高的抗污染能力以延長使用壽命；（8）較好的惰性以避免發生不期望的化學反應；（9）易再生；（10）價格便宜。親和色譜優點高選擇性，待分離物質與配基專一性結合，分辨率高。具有濃縮作用，可純化幾千倍，適用于含量極少的活性物質分離操作條件溫和， 有效保持樣品原有的生物學活性，適用于不穩定的活性物質的分離。親和色譜介質親和配基記：配基應具備的條件必須具有適當的化學基團以利于固定在載體上配基的分子大小合適，以減小分離過程中的空間位阻效應配基與被分離物質之間有足夠大的親和力，復合物能穩定一定時間配基與被分離物質之間具有合適的特異性（專一性配基與特異性配基）。配基與待分離物之間的結