1、觀察小鼠睪丸染色體的數目及其形態特征實驗目的1初步掌握小鼠睪丸細胞染色體標本的基本制作過程和giemsa染色法，了解各操作步驟的 原理。2. 觀察小鼠睪丸染色體的數冃及其形態特征；3認識不同生物染色體的特征，學會做染色體組型圖實驗原理（-）制作染色體標木的先決條件：1細胞具冇旺盛的分裂能力（a.選擇活躍的組織如睪丸，骨髓。b.施加藥物使細胞分裂如 pha）2設法得到大量中期細胞，秋水仙素處理。3染色體特征：1.數目（2n=?）2. 長度（絕對長度、相對長度）3. 著絲粒位置（msmstt）4. 隨體與次縊痕的數冃、大小和位置5. 帶型分析（二）操作方法利用睪丸細胞的制片技術雖然需要離心以及細致

2、的操作，但其基本程序是簡便的。在小 鼠睪丸中，細胞冇絲分裂和減數分裂比較旺盛，因此不尙要體外培養就可以直接得到分裂中 期細胞。通過小鼠睪丸得到染色體比較簡便，一般不需要無菌操作。用秋水仙素作為有絲分 裂的抑制劑。由于小鼠睪丸細胞分裂活動旺盛，具有高度的分裂能力，本實驗采用這一材料，通過前 處理，低滲，固定，制片，染色等步驟制得染色體標木，可觀察到許多處于分裂屮期的染色 體，可以進行染色體組型分析。減數分裂是細胞分裂染色體數目減半時發生在性細胞的形成過程屮。哺乳動物在性成熟 以后，梢巢內的性細胞總是在分批分期不斷的成熟，因此，對哺乳動物的粕巢進行一定的技 術處理，隨時都可以獲得減數分裂過程中各個

3、時期染色體的標本。對于小鼠精巢染色體標木的制作，一般包括以下幾個要點： 川一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成，使細胞分裂停滯在中期，使中期染色體停 留在赤道而處； 用低滲法使細胞膨脹，以至于在滴片時細胞脹破，使細胞的染色體鋪展到載玻片上； 空氣t燥法可使細胞的染色體在載片上展平，經giemsa染色后便可觀察到染色體的顯 微圖象。（三）中期染色體的特征1、突出在紡蝕絲的牽引下，染色體的著絲點集中到細胞中央的道板上；2、dna高度螺旋化。短粗的染色體清晰可見，染色體數目形態穩定，便于觀察；3、由于 染色體高度集中，造成紡錘體清晰可見。通過木實驗的結果看，木實驗要想做的較好不太容易，需要嫻熟的技術和

4、耐心。（四）原理分析通過獲取小鼠睪丸細胞（分裂能力強），本實驗采用這一材料，通過前處理，低滲，固定， 制片，染色等步驟制得染色體標本，可觀察到許多處于分裂中期的染色體，可以進行染色體 組型分析。一般觀察有絲分裂屮期，染色體的形態最典型、最易辨認和區分。因此，制備染 色體標本獲収的是中期細胞。實驗用品1. 材料小白鼠2. 試劑：秋水仙素、生理鹽水（0.9%的naci溶液）、0.3%kci低滲溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3： 1）、giemsa染液3. 器材：解剖盤、解剖銀、解剖剪、小燒杯、吸管、玻璃刻度離心管、恒溫水浴鍋、離心機、銅 網、預冷載玻片、記號筆、普通光學顯微鏡、玻璃等實驗步驟預處理一

5、取睪丸一剪碎一離心-4氐滲一離心一固定一離心一固定一滴片一染色一觀察（一）小白鼠染色體標本制作1. 預處理：取雄性小鼠按每克體重注射4ug,給小白鼠注射秋水仙素,經2416h后,斷頭 法殺死小鼠，去除睪丸用生理鹽水（0.9%的naci）洗去血污2. 放入裝有lml0.3%kci液的小燒杯中剪碎（呈乳白色）3. 用銅網過濾到刻度離心管中，再加0.3%kci液至4ml4. 37°c靜置30min,進行低滲處理5. 離心：800-1000r/min離心8min ,棄上清6. 加入2ml甲醇冰醋酸固定液（3:1）,并用吸管吹氣，輕輕打散細胞，固定8min；7. 再以 800-1000r/mi

6、n 離心 8min；8. 棄去上清液，加1ml固定液，制成細胞懸液固定5min9取清潔的低溫預冷載片，距10j5min高度滴f 2-3滴細胞懸液，從一邊輕輕吹氣并隨時輕 輕敲打，以使細胞均勻分布和促進染色體展開10.用濾紙擦去載片上多余液體，空氣干燥后染色20-30min（二）小白鼠染色體標本染色與觀察1倒置染色法一一在玻璃板上用廢舊載玻片作支架，使標本載玻片的標本面向下放置到支架 上，在玻璃板和標本載玻片之間滴加giemsa染液。口的一可以節省染料，二可以避免染液 快速揮發，三可以防止染色顆粒沉淀，影響觀察。在操作時應注意，多個樣品同時染色應擺 放緊密，不要冇間隙；滴染液時應盡量慢，不要冇氣

7、泡，以免部分染色體不被著色。2.用giemsa染色2030分鐘，細水沖洗玻片背面,去多余染液,氣干。3鏡檢：低倍鏡下尋找分散良好、染色適中的分裂相，高倍鏡或油鏡下觀察染色體形態并計 數。注意事項（一）實驗操作1低滲時不能使細胞因吸水而漲破，但也要保證濃度和吋間，以免染色體不能展開。2. 離心要控制在800-1000r/min,過大會使細胞漲破，導致實驗失敗，時間也要控制，過長 也會彫響觀察3. 固定時間要足夠，固定作用不足，染色體形態不清晰。4. 滴片要保證至少10-15min高度，滴三滴后輕輕吹氣和敲打，冃的在于使細胞均勻分布和 促進染色體展開。5染色采川倒置染色法，可使載玻片充分接觸染液，

8、使雜質町沉降至底部。（二）觀察標準1. 細胞完幣，輪廓清晰，染色體分布在同一水平面上；2. 染色體形態和分布良好，最好無重疊，即使有個別重疊，也要能明確辯認，以免差錯；3.所 觀察的細胞處于同一有絲分裂階段（分裂中期），即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一 樣，在所觀察的細胞周i韋i，沒有離散的單個或多個染色體存在，以免影響觀察和計數。實驗結果a圖染色體40條；b圖染色體36條。結果分析與討論1. 視野中有較多的梢細胞影響觀察，更有許多沒有漲破的細胞。可能山于加入固定液不夠, 低滲時間也不夠，而且溫度上也過低。2. 染色體沒有分散開，較多染色體凝聚成團狀，影響了觀察計數，可能由于滴片距離不足, 細胞吹散和摔打工作沒有做好。3. 處于分裂中期的細胞數量太少，導致很難找到中期染色體。可能是低滲吋間，滴片高度,