1、銀耳多糖主要生物學效用探究進展【關鍵詞】銀耳多糖類 生物學 綜述keywords: tremella fuciformis; polysaccharides; biology; review植物多糖因其獨特的生物學功能、低毒性以及廣泛的 應用價值，越來越被重視，研究也越來越深入。銀耳作為珍 貴滋補品和重要的藥材，已有悠久歷史，具有滋補強壯、扶 正固本的功效,銀耳多糖(tremella polysaccharides, tp ) 是其主要活性成分，具有很多藥理作用。1 tp的分類植物多糖是由10個以上相同或不同的單糖以a或b糖 昔鍵所組成的化合物，普遍存在于自然界植物體中，分子量 一般為數萬，甚

2、至數百萬，是構成生命活動的基本物質之一， 與維持生命功能密切相關。tp主要分為5類：酸性雜多糖、 中性雜多糖、酸性低聚糖、胞壁多糖和胞外多糖1 o1.1酸性雜多糖2006年從銀耳抱糖(tremellafuciformis spores polysaccharides, tsp ）中分離、純化出 3種均一多糖(tsp 2a tsp 2c b其組成糖為巖藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸。經證明，tsp 2atsp 2c均為多分枝結構復雜的酸性雜多糖2 1.2中性雜多糖 從我國出產的銀耳子實體堿性提取物中分離出中性雜多糖,相對分子質量約8 000 ,主要由木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖按照2:4

3、:5:35物質的量比組 成1 1.3酸性低聚糖 在進一步證明子實體中酸性雜多糖ac和bc結構的過程中，用酸性水解的方法從中分離出3:o (b d 毗喃葡糖醛 毗喃甘露糖(13) d毗喃甘d毗喃葡糖醛酸)d毗喃甘露酸)(12) o露糖；h 3 :2(3種均質的酸性低聚糖(h i、h 2和h 3 )b它們的結構 為h 1 q b d毗喃葡糖醛酸(1 2) o a d毗 喃甘露糖(1 3) o a d毗喃甘露糖(1 3) d毗 喃甘露糖；糖1 1.4胞壁多糖 從銀耳細胞壁中分離出2種胞壁多糖,胞壁外層產生的酸性多糖由d葡萄糖醛酸、d甘露糖和d木糖組成。胞壁中的堿不溶性多糖由d葡萄糖、d葡萄糖醛酸、d

4、甘露糖和d木糖組成1 1.5胞外多糖 從銀耳細胞深層發(fā)酵抱子體中分離得到主鏈結構與子實體多糖相似的酸性雜多糖，僅在支鏈上稍 有區(qū)別。其主鏈結構都是a (13)糖昔鍵連接的甘露聚糖, 在主鏈的2、4、6位上連接有葡萄糖、葡萄糖醛酸和木糖等 側鏈，表明深層培養(yǎng)的銀耳翹外多糖和子實體提取的tp在 組分上無明顯區(qū)別1 o2 tp的吸收與代謝2.1血液的濃度變化 通過對tp的3h標記實驗研究， 測出口服tp 120 min時血藥濃度達到高峰，隨后逐漸下降 3 o即使在高峰時，血藥濃度相對于給藥量也顯得極低。 靜脈給藥時，低劑量時約需150 min可使血藥濃度下降到 50% ,高劑量則需300 min才可

5、下降到50%。480 min后, 仍分別有20%和40%的樣品殘存在血液中，表明tp在血液 中清除速度很低3 jo2.2在器官中的分布情況口服給藥9h后，約90%的 放射活性可在測定的器官中發(fā)現。除在胃腸的分布有明顯改 變外，其他器官分布量極微，約0.42%。結合血藥濃度變化 數據可知，口服給藥時，3h tp或熒光素異硫氧酸酯 (fluorescein isothio cyanate, fitc )1251 tp 都僅有微量吸收入血并分布到器官中，絕大部分通過胃腸排出體 外。吸收后的fitc 1251 tp主要分布在肝、腎中，甲狀 腺中也有一定放射活性，推測是游離1251被甲狀腺吸收所 致。結

6、論是tp 口服后僅有微量通過胃腸入血，被器官所吸 收；進入血液的tp分子量未見明顯變化；口服給藥和靜脈 給藥的器官分布結果相似，絕大部分在肝腎；在肝臟主要為kupffer細胞所攝取3 3 tp的藥理作用3.1免疫調節(jié)多糖是一種免疫增強劑，不但能激活t 細胞、b細胞、自然殺傷細胞(natural killer, nk 腫瘤抗 原特異性殺傷細胞和淋巴因子激活殺傷細胞(lymph factor active killer, lak )等免疫細胞的活性，激活網狀內皮系統(tǒng) (reticuloendothelial system, res )吞噬和清除老化細胞、 異物和病原體4 ,還能通過促進白細胞介素2

7、 (interleukin 2, il 2 il 6 和腫瘤壞死因子 ct (tumour necrosis factor a, tnf a ) mrna的表達，促進上述細胞 因子的生成5 ,提高機體抗腫瘤免疫力。多糖對抗體的免 疫調節(jié)作用，主要通過5種方式和途徑：激活巨噬細胞；激 活res ;激活t和b淋巴細胞；激活補體；促進多種細胞 的生成6 tp大多也通過以上幾種途徑對機體起到免疫 調節(jié)作用，在此從體液免疫、細胞免疫以及非特異免疫等3 個方面來闡述。3.1.1體液免疫用tp和香菇多糖共同制成復合多糖，用于s180荷瘤小鼠，結果復合多糖對s180荷瘤小鼠的溶血素值有一定的提高作用，其中以0

8、.75 g/kg劑量作用最顯著表明該制劑對荷瘤小鼠的體液免疫功能有明顯的增強作用7 100 mg/kg tp可使正常小鼠和經環(huán)磷酰胺處理的小鼠 溶血素生成量(因綿羊紅細胞免疫所致)分別增加92.9%和 112.9%，表明tp可增強和改善正常小鼠及免疫功能低下小鼠的體液免疫功能8 o 2個月齡小鼠腹腔注射tp ,可促進 正常小鼠脾臟抗羊紅細胞空斑形成細胞(plaque forming cell,pfc )反應，并完全恢復因注射環(huán)磷酰胺引起的脾臟pfc減少9 o tp能提高放化療惡性腫瘤病人血清免疫球蛋白g ( immunoglobulin g, igg )水平10 o通過fura2熒光探針標記法

9、觀察tp對正常小鼠脾細胞內游離鈣離子濃度的影響，結果表明tp在25 200 mg/ml時，可明顯增加脾細胞內鈣離子濃度，并與刀豆球蛋白a( concanavalin a, con a )有協(xié)同作用。在外鈣為零時, tp對內鈣釋放無影響，鈣通道阻斷劑維拉帕米(10 mg/ml )可阻斷tp升高脾細胞內游離鈣離子濃度“ jo提示促進外鈣內流途徑，增加脾細胞內游離鈣水平，可能也是tp發(fā)揮 免疫調節(jié)作用的機制之一。3.1.2細胞免疫 復合多糖對s180荷瘤小鼠的t淋巴細胞轉化功能有一定的提高作用，其中以0.75 g/kg劑量作 用最顯著5 有研究證明tp在體外能使正常人淋巴細胞 轉化，其活性類似植物凝

10、集素；在體內能提高白血病人淋巴細胞的轉化率；且能促進冠胸腺劇定核昔（3h thymidine, 3h tdr）滲入體外培養(yǎng)的心肌炎、大動脈炎、腎病和白血病患者t淋巴細胞轉化；也能提高腫瘤患者外周血t淋巴細 胞水平1 tp能顯著增強小鼠脾淋巴細胞增殖反應，同 時明顯拮抗6疏基瞟噲所致的細胞免疫抑制12 tp在體外能增強小鼠脾臟淋巴細胞蛋白激酶q protein kinase c,pkc）活性，通過活化細胞膜pkc活性，引起細胞內系列 蛋白質級聯(lián)磷酸化反應，實現免疫細胞調節(jié)功能，提示tp 免疫增強作用與活化pkc有關，其免疫調節(jié)作用與淋巴細 胞信號傳導系統(tǒng)密切相關13 jo3.1.3非特異性免疫復

11、合多糖對s180荷瘤小鼠的m0吞噬百分率和吞噬指數均有一定的提高作用，其中1.5 g/kg和0.75 g/kg劑量作用最顯著，表明該制劑可明顯提高 荷瘤小鼠的非特異性免疫功能7 小鼠口服tp和銀耳抱 子多糖，發(fā)現tp和銀耳抱子多糖均能顯著影響巨噬細胞的 吞噬指數及吞噬百分數，前者分別為對照組的3.7i倍和2.6 倍，后者為對照組的1.57倍和1.45倍14 o小鼠腹腔注射銀耳制劑可使小鼠腹腔巨噬細胞體積增大，胞漿中酸性磷 酸酶活性增強，巨噬細胞對雞紅細胞吞噬率增高15 o特別是與小鼠腹水型肝癌細胞共同培養(yǎng)3 h后，透射電鏡下可見巨噬細胞與腫瘤細胞接觸后，腫瘤細胞腫脹變圓，內部細 胞器溶解，核蛋

12、白體消失，細胞核內染色質溶解，核仁消失, 核膜分離等變化15 o這表明銀耳及其多糖確有激活小鼠 單核巨噬細胞系統(tǒng)的功能，不僅使巨噬細胞增生，激活其吞 噬活性，促進抗體形成，且被激活的巨噬細胞還可溶解小鼠 腹水型肝癌細胞。3.2抗腫瘤就多糖抗腫瘤作用而言，可將抗腫瘤多糖分為兩大類：一類是具有細胞毒性的多糖直接殺死腫瘤細 胞；第二類是作為生物免疫反應調節(jié)劑通過增強機體的免疫 功能間接抑制或殺死腫瘤細胞，如能促進lak和nk細胞活 性并誘導巨噬細胞產生腫瘤壞死因子的多糖以及具有抗腫 瘤活性的多糖大多是通過這種途徑起作用，也就是常說的宿 主介導抗腫瘤活性16 j, tp也屬于后者，作為生物免疫反 應調

13、節(jié)劑，tp主要通過增強機體的免疫功能而間接抑制或 殺死腫瘤細胞。100 mg/kg tp可明顯抑制小鼠艾氏腹水癌的生長，抑 制癌細胞dna合成，而體外應用時無此作用，提示tp對癌細胞并無直接抑制或殺傷作用。進一步研究表明，tp對癌 細胞抑制作用是通過提高機體免疫功能，增強res吞噬功 能,促進干擾素和tnf等的產生而發(fā)揮作用17 o將il 2激活的小鼠脾lak細胞和il 2與tp協(xié)同激活的小鼠脾細胞（tp lak細胞）分別作用于體外培養(yǎng)的 3h tdr標記的腫瘤細胞p815. h22和b16 , 2 h后用丫 閃爍計數儀進行檢測，并計算殺傷程度。將上述激活的小鼠 脾細胞在小鼠荷肝癌局部皮下注射

14、，隔日1次，共5次，檢 測腫瘤質量、體積、組織學改變和主要臟器的形態(tài)學改變。結論為il 2激活的脾lak細胞是有效的抗肝癌細胞,il 2與tp在活化脾細胞和抗腫瘤方面有協(xié)同作用，對體內主要 臟器無明顯影響18 o此外，tp可減輕化療和放療毒副反應，增強療效，提高癌癥患者生存質量，延長生存期。銀耳抱子多糖在3個劑 量下，對小鼠淋巴瘤和u14宮頸癌均有一定抑制作用19o12mg/kg劑量對淋巴瘤抑制作用明顯，抑瘤率為61.3% ; 6 mg/kg劑量時 與丫射線合用對腫瘤的抑制率為72.6% 19 o對于u14宮頸癌，在6 mg/kg劑量時，間隔給藥抑瘤效果最明顯，抑瘤率為47.5%，與丫射線合用

15、對腫瘤的抑制率可提 高到71.2% ,與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義19 o另 外，tp對放射和化學損傷小鼠造血功能亦起到保護作用20 jo3.3延緩衰老 從扶正固本等補益類中藥中分離出的多糖類化合物，不但能促進機體的免疫功能，而且有些多糖 確實有延緩衰老的作用，而且作用顯著16 jotp還可明顯降低小鼠心肌組織脂褐質含量21 ,增強小鼠腦和肝組織中超氧化物歧化酶活性，抑制腦中機體衰老正相關酶活性，延長小鼠在缺氧情況下的生存期22 jo此外，tp亦可通過促進核酸及蛋白質合成，增加肝微粒體細胞色素p 450含量，增強機體免疫功能而發(fā)揮延緩衰老觀察tp對d半乳糖所致衰老小鼠免疫功能的影響,發(fā)現tp

16、能明顯促進cona誘導的小鼠淋巴細胞增殖轉化； 各tp干預組小鼠血清il 2和il 6均高于衰老對照組22 o因其能顯著對抗d半乳糖所致小鼠對cona誘導 的淋巴細胞轉化的抑制作用，增加衰老小鼠體內il 2及 il 6含量，表明tp能增強衰老小鼠免疫功能，促進細胞增 殖，防止衰老23 3.4降血糖目前國內外對植物多糖降血糖的研究基本上還處在動物實驗研究階段。有報道銀耳鞄子多糖和木耳 多糖均能降低正常及四氧唔喘糖尿病小鼠血糖，對四氧嗨喘 糖尿病小鼠的高血糖有明顯防治作用，同時還能減少糖尿病 小鼠的飲水量。這可能是由于其減弱四氧囉 定對胰島0細胞 的損傷所致。實驗證明，tp無論是口服給藥還是腹腔或皮 下給藥，均表現出明顯的降血糖作用，同時通過正常動物進 一步驗證了 tp降血糖的確切作用。正常動物給藥1周，不僅能降低血糖而且使肝糖原含量也明顯降低 這一作用與tp 刺激胰島細胞分泌胰島素有關24 對tp的純化、結構與其降血糖活性進行研究，經初步分離純化得到3種多糖se1-se3o甲基化分析結果表明,se1-se3結構相似，主鏈由13連接甘露糖組成，均能拮抗腎上腺素引起的小鼠血糖升高，抑制肝糖元分解25 將tp作為胰島素修飾配基對胰島素進行化學修飾，觀察修飾后的胰島素對胰島素降血糖活性的影