1、編輯ppt1第十章第十章 植物種質的超低溫保存植物種質的超低溫保存編輯ppt2種質保存種質保存 是指利用天然或人工創造的適宜環是指利用天然或人工創造的適宜環境保存種質資源，使個體中所含有境保存種質資源，使個體中所含有的遺傳物質保持其完整性，有高的的遺傳物質保持其完整性，有高的活力，能通過繁殖將其遺傳特性傳活力，能通過繁殖將其遺傳特性傳遞下去。遞下去。編輯ppt3按保存類型分類按保存類型分類 按保存類型分類按保存類型分類可分為兩種類型可分為兩種類型非原生境保存非原生境保存 原生境保存原生境保存編輯ppt4亞馬遜熱帶雨林亞馬遜熱帶雨林編輯ppt5編輯ppt6編輯ppt7編輯ppt8離體保存離體保存

2、種植保存種植保存種子保存種子保存超低溫冷凍保存超低溫冷凍保存常用的種質保存方法常用的種質保存方法編輯ppt9抑抑制制外外植植體體生生長長n降降低低環環境境中中的的氧氧含含量：量：低低氣氣壓壓處處理、理、低低氧氧分分壓壓處處理理n使使用用生生長長延延緩緩劑：劑：多多效效唑、唑、矮矮壯壯素素n其其他他方方法：法：編輯ppt10種子保存種子保存 優點：優點：占用空間少，保存期較長，易干占用空間少，保存期較長，易干燥，易包裝和運輸。燥，易包裝和運輸。 缺點：缺點：不適用于無性繁殖的植物種類，不適用于無性繁殖的植物種類，隨著時間的延長，種子的生活力逐漸下隨著時間的延長，種子的生活力逐漸下降，同時易受到病

3、蟲害的侵襲。降，同時易受到病蟲害的侵襲。編輯ppt11種植保存種植保存w自然保護區，植物園，森林公園自然保護區，植物園，森林公園w缺點：缺點：占地多，需要大量的人力物力，占地多，需要大量的人力物力，費用高，易受到自然災害的影響費用高，易受到自然災害的影響編輯ppt12離體保存離體保存w優點：優點：占用空間少，無病蟲害以及自然災害占用空間少，無病蟲害以及自然災害的影響，不受季節限制。短時間可實現大量的影響，不受季節限制。短時間可實現大量植物的增殖，無病毒。植物的增殖，無病毒。w缺點：缺點：連續不斷的繼代培養可能會引起染色連續不斷的繼代培養可能會引起染色體和基因型的變異。體和基因型的變異。編輯pp

4、t13編輯ppt14超低溫冰箱超低溫冰箱編輯ppt15離體植物材料的超低溫冰凍保存技術離體植物材料的超低溫冰凍保存技術植物材料的選取植物材料的選取材料的預處理材料的預處理冰凍保護劑預處理冰凍保護劑預處理降溫冷凍操作降溫冷凍操作化凍操作化凍操作化凍材料的活力檢測化凍材料的活力檢測編輯ppt16材材料料材材料料l愈愈傷傷組組織、織、懸懸浮浮細細胞、胞、原原生生質質體體l花花粉粉和和花花粉粉胚胚l莖莖尖、尖、胚、胚、幼幼齡齡植植株株編輯ppt17v材料的低溫材料的低溫預處理預處理v材料的預培養材料的預培養編輯ppt18編輯ppt19 所使用的冷凍保護劑所使用的冷凍保護劑應具有以下特性：應具有以下特性

5、： 分子質量較小分子質量較小 易于與溶劑混合易于與溶劑混合 快速滲入細胞快速滲入細胞 無毒或毒性小無毒或毒性小 易洗脫易洗脫 常用的是常用的是DMSO。編輯ppt20保保護護劑劑培培養養基基里，里，或或者者是是溶溶解解在在有有糖糖或或無無糖糖的的水水中。中。n保保護護劑劑應應當當緩緩慢慢加加入。入。n使使用用復復合合冰冰凍凍保保護護劑劑比比單單獨獨使使用用更更為為有有效。效。編輯ppt21降降溫溫冰冰法法n干干燥燥冷冷凍凍法法n包包埋埋脫脫水水法法n玻玻璃璃化化法法編輯ppt221、快速冷凍法、快速冷凍法 指將植物材料從指將植物材料從0或者其他預處理溫度直接或者其他預處理溫度直接投入液氮中保存

6、的方法，降溫速度投入液氮中保存的方法，降溫速度1000/min。 2、慢速冷凍法、慢速冷凍法將處于將處于0或其他預處理溫度的材料以或其他預處理溫度的材料以12/min的降溫速度從起始溫度降到的降溫速度從起始溫度降到-100，穩定穩定1h后，投入到液氮保存或以此降溫速度連后，投入到液氮保存或以此降溫速度連續降溫至續降溫至-196的方法。的方法。 編輯ppt23c、預冷凍法、預冷凍法 指將植物保存材料放入液氮前，需經過短指將植物保存材料放入液氮前，需經過短暫時間的低溫鍛煉的方法。暫時間的低溫鍛煉的方法。d、干燥冷凍法、干燥冷凍法 將材料置于將材料置于2729烘箱內降低植物含水烘箱內降低植物含水量，

7、再投入液氮中保存的方法。量，再投入液氮中保存的方法。 編輯ppt24( (e包埋凍存法包埋凍存法編輯ppt25編輯ppt26化凍操作化凍操作wa、快速解凍法、快速解凍法w指將液氮中保存的材料直接投入到指將液氮中保存的材料直接投入到3740溫水浴中進行解凍的方法。解凍的升溫速度溫水浴中進行解凍的方法。解凍的升溫速度為為500750/min。wb、慢速解凍法、慢速解凍法w將液氮中保存的材料先置于將液氮中保存的材料先置于0低溫下解凍，低溫下解凍，再逐漸升至室溫下進行解凍的方法。再逐漸升至室溫下進行解凍的方法。編輯ppt27化凍材料的活力檢測化凍材料的活力檢測 檢驗化凍后材料的生活力和存活率的最檢驗化

8、凍后材料的生活力和存活率的最根本方法是再培養。根本方法是再培養。 FDAFDA、TTCTTC等染色的方法進行快速檢測，等染色的方法進行快速檢測，只能作為生活力的預測指標只能作為生活力的預測指標編輯ppt28編輯ppt29 超低溫保存技術的發展超低溫保存技術的發展編輯ppt30超低溫保存種質技術的應用前景超低溫保存種質技術的應用前景 懸浮細胞和愈傷組織的保存懸浮細胞和愈傷組織的保存 生長點冷凍保存生長點冷凍保存 胚狀體（體細胞胚、花粉胚）冷凍保存胚狀體（體細胞胚、花粉胚）冷凍保存 原生質體冷凍保存原生質體冷凍保存編輯ppt31小結小結w生物細胞的低溫凍存是防止生物種質滅絕的生物細胞的低溫凍存是防止生物種質滅絕的重要途徑重要途徑w低溫凍存技術的應用取決于凍存技術和在培低溫凍存技術的應用取決于凍存技術和在培養技術的成熟程度養技術的成熟程度w根據細胞類型選擇凍存和解凍方法是再培養根據細胞類型選擇凍存和