1、. 鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵 課程名稱：儀器分析 指導教師：李志紅 實驗員 ：張麗輝 李國躍 崔鳳瓊 劉金旖 普杰飛 趙 宇 時 間: 2003年5月12日 一、 實驗目的：（1） 掌握研究顯色反應的一般方法。（2） 掌握鄰二氮菲分光光度法測定鐵的原理和方法。（3） 熟悉繪制吸收曲線的方法，正確選擇測定波長。（4） 學會制作標準曲線的方法。（5） 通過鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵在未知式樣中的含量，掌握721型，723型分光光度計的正確使用方法，并了解此儀器的主要構造。二、 原理：可見分光光度法測定無機離子，通常要經過兩個過程，一是顯色過程，二是測量過程。為了使測定結果有較高靈敏度和準確度

2、，必須選擇合適的顯色條件和測量條件，這些條件主要包括入射波長，顯色劑用量，有色溶液穩定性，溶液酸度干擾的排除。（1） 入射光波長：一般情況下，應選擇被測物質的最大吸收波長的光為入射光。（2） 顯色劑用量：顯色劑的合適用量可通過實驗確定。（3） 溶液酸度：選擇適合的酸度，可以在不同PH緩沖溶液中加入等量的被測離子和顯色劑，測其吸光度，作DA-PH曲線，由曲線上選擇合適的PH范圍。 （4） 有色配合物的穩定性：有色配合物的顏色應當穩定足夠的時間。（5） 干擾的排除：當被測試液中有其他干擾組分共存時，必須爭取一定的措施排除干擾。鄰二氮菲與Fe2+ 在PH2.0-9.0溶液中形成穩定橙紅色配合物。配合

3、無的 =1.1 104 L mol cm-1 。配合物配合比為3：1，PH在2-9（一般維持在PH5-6）之間。在還原劑存在下，顏色可保持幾個月不變。Fe3+ 與鄰二氮菲作用形成淡藍色配合物穩定性教差，因此在實際應用中加入還原劑使Fe 3+還原為Fe2+ 與顯色劑鄰二菲作用，在加入顯色劑之前，用的還原劑是鹽酸羥胺。此方法選擇性高Br3+ 、Ca2+ 、Hg 2+、Zn2+ 及Ag+ 等離子與鄰二氮菲作用生成沉淀，干擾測定，相當于鐵量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+ 、Zn2+ 、Sio32-，20倍的Cr3+、Mn2+、VPO3-45倍的Co2+、Ni2+、Cu2+等離子不干擾測

4、定。三、 儀器與試劑：1、 儀器：721型723型分光光度計 500ml容量瓶1個，50 ml 容量瓶7個，10 ml 移液管1支 5ml移液管支，1 ml 移液管1支，滴定管1 支，玻璃棒1 支，燒杯2 個，吸爾球1個， 天平一臺。2試劑：（1）鐵標準溶液100ugml-1,準確稱取0.43107g鐵鹽NH4Fe(SO4)212H2O置于燒杯中，加入0.5ml鹽酸羥胺溶液，定量轉依入500ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度充分搖勻。 （2）鐵標準溶液10ugml-1.用移液管移取上述鐵標準溶液10ml，置于100ml容量瓶中， 并用蒸餾水稀釋至刻度，充分搖勻。 （3）鹽酸羥胺溶液100gL-1

5、(用時配制) （4）鄰二氮菲溶液 1.5gL-1 先用少量乙醇溶液，再加蒸餾水稀釋至所需濃度。 （5）醋酸鈉溶液1.0molL-1 四、實驗內容與操作步驟：1.準備工作(1) 清洗容量瓶，移液官及需用的玻璃器皿。 (2) 配制鐵標溶液和其他輔助試劑。 (3) 開機并試至工作狀態，操作步驟見附錄。 (4) 檢查儀器波長的正確性和吸收他的配套性。 2. 鐵標溶液的配制 準確稱取0.3417g鐵鹽NH4Fe(SO4)12H2O置于燒杯中，加入10mlHCL加少量水。溶解入500ml容量瓶中加水稀釋到容量瓶刻度。 3 .繪制吸收曲線選擇測量波長取兩支50ml干凈容量瓶，移取100 g m l-1鐵標準

6、溶液2.50ml容量瓶中，然后在兩個容量瓶中各加入0.5ml鹽酸羥胺溶液，搖勻，放置2min后各加入1.0ml鄰二氮菲溶液，2.5ml醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀釋至刻度線搖勻，用2cm吸收池，試劑空白為參比，在440540nm間，每隔10nm測量一次吸光度，以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標，確定最大吸收波長 （1）nm4480490A0290380440485050052nm5540A0540570502036902574.工作曲線的繪制 取50ml的容量瓶7個,各加入100.00 ml-1鐵標準0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20ml，然后分別加入0.5ml鄰二氮菲

7、溶液，2.5ml醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀釋至刻度線搖勻，用2cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在選定波長下測定并記錄各溶液光度，記當格式參考下表：編 號 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#V（鐵溶液）ml000020040060080100120 A-0.0000.0830.1690.2270.3140.3950.436 5.鐵含量的測定 取1支潔凈的50ml容量瓶,加人2.5ml含鐵未知試液,按步驟(6 )顯色,測量吸光度 并記錄.編 號 1# 2# 3# V(未知液)ml 2.5 2.5 2.5 A 0.425 0.425 0.421 K=268.1 B= -2.205 R*R=0.9

8、945CONC. =K *ABS+BC = 44.55mol ml-16.結束工作 測量完畢,關閉電源插頭,取出吸收池, 清洗晾干后人盆保存.清理工作臺,罩上一儀器防塵罩,填寫儀器使用記錄.清洗容量瓶和其他所用的玻璃儀器并放回原處.五、討論：（1） 在選擇波長時，在440nm450nm間每隔10nm 測量一次吸光度，最后得出的mix=510nm,可能出在試劑未搖勻，提供的mix=508nm，如果再縮減一點進程，試齊充分搖勻，靜置時間充分，結果會更理想一些。（2） 在測定溶液吸光度時，測出了兩個9，實驗結果不太理想，可能是在配制溶液過程中的原因：a、配制好的溶液靜置的未達到15min；b、藥劑方

9、面的問題是否在期限內使用（未知）因從溶液顯色的效果看，顏色有點淡,要求在試劑的使用期限內使用；c、移取試劑時操作的標準度是否符合要求，要求一個人移取試劑。（張麗輝）在配制試樣時不是一雙手自始至終，因而所觀察到的結果因人而異，導致最終結果偏差較大，另外還有實驗時的溫度，也是造成結果偏差的原因。（崔鳳瓊）本次實驗階段由于多人操作，因而致使最終結果不精確。（普杰飛）（1） 在操作中，我覺得應該一人操作這樣才能減少誤差。（2） 在使用分光計時，使用同一標樣，測同一溶液但就會得出不同的值。這可能有幾個原因：a、溫度，b、長時間使用機器，使得性能降低，所以商量得不同值。（李國躍）在實驗的進行當中，因為加試

10、樣的量都有精確的規定，但是在操作中由于是手動操作所以會有微小的誤碼率差量，但綜合了所有誤差量將成為一個大的誤差，這將導致整個實驗的結果會產生較大的誤碼率差。（趙宇）在配制溶液時，加入拭目以待試劑順序不能顛倒，特別加顯色劑時，以防產生反應后影響操作結果。（劉金旖）六、結論：（1） 溶液顯色，是由于溶液對不同波長的光的選擇的結果，為了使測定的結果有較好的靈敏度和準確度，必須選擇合適的測量條件，如：入射波長，溶液酸度，度劑使用期限 。（2） 吸收波長與溶液濃度無關，不同濃度的溶液吸收都很強烈，吸收程度隨濃度的增加而增加，成正比關系，從而可以根據該部分波長的光的吸收的程度來測定溶液的濃度。（3） 此次

11、試驗結果雖不太理想，但讓我深有感觸，從中找到自己的不足，并且懂得不少試驗操作方面的知識。從無知到有知，從不熟練到熟練使用使自己得到了很大的提高。（張麗輝）附錄：723型操作步驟1、 插上插座，按后面開關開機2、 機器自檢吸光度和波長，至顯示500。3、 按鍵，輸入測定波長數值按回車鍵。4、 將考比溶液（空白溶液）比色皿置于R位以消除儀器配對誤碼率差，拉動試樣架拉桿，按鍵從R、S1、S2、S3，逐一消除然后再檢查12次看是否顯示0。000否則重新開始。5、 按按3鍵，回車，再按1鍵，回車。6、 逐一輸入標準溶液的濃度值，每輸一個按回車，全部輸完，再按回車。7、 固定考比溶液比色皿（第一格為參比溶液）其余三格放標準試樣溶液，每測一值，拉桿拉一格，按START/STOP全打印完，按回車8、 機器會自動打印出標準曲線K、B值以及相關系R。9、 固定參比溶液比色皿，其余三格放入待測水樣，逐一測