1、.痰液及下呼吸道分泌物培養標準操作流程1 觀察標本合格后操作。一般為晨痰，再留取痰之前刷牙、反復漱口，應從氣管深部咳出痰，吐進無菌容器內送檢。涂片白細胞小于10，上皮細胞大于25 為不合格痰，相反白細胞大于25，上皮細胞小于10-25 為合格痰標本。2 點燃酒精燈，盡量保證無菌中間。3 接種環滅菌待冷卻后取痰液接種到血平板 、中國蘭平板（或麥康凱平板上）。平板劃線分離培養：（ 1）用接種環將標本涂布在平板第一區域并作數次劃線，在第二三區依次用接種環劃線。（ 2）每劃一區域應將接種環燒灼一次，冷卻后再劃下一區域，每一區域的劃線應接觸上一區域的接種線 2-3 次使菌量逐漸減少以形成單個菌落。（3）

2、劃線完畢將平板加蓋倒置（瓊脂平板的底部向上）于35C培養 18-24 小時。4 觀察菌落特征涂片染色，確定陽性菌、陰性菌、球菌還是桿菌后鑒定種屬。5 做藥敏試驗-報告結果。便培養標準操作流程1. 收取有粘液或 膿血、稀水糞便標本。2. 點燃酒精燈，盡量保證無菌中間。3. 接種環滅菌待冷卻后取糞便接種到血平板 、SS平板、中國蘭平板（或麥康凱平板上）。平板劃線分離培養：（1）用接種環將標本涂布在平板第一區域并作數次劃線，在第二三區依次用接種環劃線。（2）每劃一區域應將接種環燒灼一次，冷卻后再劃下一區域，每一區域的劃線應接觸上一區域的接種線2-3 次使菌量逐漸減少以形成單個菌落。（3）劃線完畢將平

3、板加蓋倒置（瓊脂平板的底部向上）于4 培養 18-24 小時后觀察菌落特征涂片染色，確定陽性菌桿菌后鑒定種屬。5 做藥敏試驗 -報告結果。35C培養。、陰性菌、球菌還是尿培養標準操作流程1 收取晨尿第一泡清潔中段尿。（把外陰用肥皂清洗一遍， 再用清水清洗兩遍， 待干或用干凈布擦干）用導尿管的病號需新換導尿管后取標本2 點燃酒精燈，盡量保證無菌中間。3 接種環滅菌待冷卻后將標本混勻， 用定量接種環取尿液 1ul( 大約一接種環） 接種到血平板 ，接種環滅菌 - 待冷后取標本接種到中國蘭平板 （或麥康凱平板上）。( 抗菌素治療患者應增加一個 10ul 接種。 )4 平板單區劃線法：用滅菌接種環在血

4、平板與中國蘭（或麥康凱）平板的中間位置單區劃線（這種方法適合菌落計數，假如細菌多不容易分出單個菌落。）5劃線完畢將平板加蓋倒置（瓊脂平板的底部向上）于35C培養 18-24小時。6觀察菌落特征涂片染色，確定陽性菌、陰性菌 、球菌還是桿菌后 鑒定種屬。7做藥敏試驗 - 報告結果。注：接種 1ul 尿量者，菌落數乘以 10，接種 10ul 尿量者，菌落數乘以 100. 即為每 ml 尿液中所含有的細菌數（ CFU/ml）, 如菌落數生長過多無法計數則報告大于100000 CFU/ml.分泌物培養標準操作流程1 在 無菌環境下用一次性拭子快速取分泌物或膿液標本。2 點燃酒精燈，盡量保證無菌中間。平板

5、劃線分離培養：（1）用拭子將標本涂布在平板第一區域并作數次劃線，在第二三區依次用接種環劃線。（2）每劃一區域應將接種環燒灼一次 ，冷卻后再劃下一區域，每一區域的劃線應接觸上一區域的接種線2-3次使菌量逐漸減少以形成單個菌落。（3 劃線完畢將平板加蓋倒置（瓊脂平板的底部向上）于35C培養3 觀察菌落特征涂片染色，確定陽性菌、陰性菌、球菌還是桿菌后4 做藥敏試驗報告結果。18-24 小時。鑒定種屬。穿刺液培養標準操作流程1 收取合格的穿刺液標本。（咨詢下是否按要求取的標本）2 點燃酒精燈，盡量保證無菌中間。3 將穿刺液接種到增菌培養液進行培養。 （穿刺液含細菌數量較少， 因此，必須做增菌培養）4

6、培養 18-24 小時候后，用酒精消毒培養液瓶口，用五毫升注射器抽取毫升液體打入血平板 、巧克力平板（ CO2環境中以分離嗜血桿菌）中國蘭平板（或麥康凱平板上）接種環滅菌待冷卻后。平板劃線分離培養：（1）用接種環將標本涂布在平板第一區域并作數次劃線，在第二三區依次用接種環劃線。（2）每劃一區域應將接種環燒灼一次，冷卻后再劃下一區域，每一區域的劃線應接觸上一區域的接種線2-3 次使菌量逐漸減少以形成單個菌落。（3）劃線完畢將平板加蓋倒置（瓊脂平板的底部向上）于35C培養 18-24 小時。5 觀察菌落特征涂片染色，確定陽性菌、陰性菌、球菌還是桿菌后鑒定種屬。6 做藥敏試驗-報告結果。注 ：標本經

7、增菌轉種平板后，經35C24-48 小時孵育后，如無細菌生長，平板還應繼續孵育至第3 天. 如懷疑有奴卡菌，平板應持續孵育7 天證實無菌生長，才能報告陰性 .血培養標準操作流程1 用嚴格無菌技術靜脈采血法采集2 套外周血，作培養標本。2 檢查培養瓶確保它們被安全放置，檢查瓶子上的標簽確認與申請單上的患者資料是否一致。3 保證獲得適量的血液 . 小孩最少 3ML,大人最少 5ML,正常應該是 10ML。4 放入 35c 孵育 7 天。5 孵育至 3 天后和 5 天后 分別用酒精消毒培養液瓶口， 用五毫升注射器抽取毫升液體打入血平板、巧克力平板（ CO2環境中以分離嗜血桿菌）中國蘭平板（或麥康凱平

8、板上）接種環滅菌待冷卻后。平板劃線分離培養：（1）用接種環將標本涂布在平板第一區域并作數次劃線，在第二三區依次用接種環劃線。（2）每劃一區域應將接種環燒灼一次，冷卻后再劃下一區域，每一區域的劃線應接觸上一區域的接種線2-3 次使菌量逐漸減少以形成單個菌落。（3）劃線完畢將平板加蓋倒置（瓊脂平板的底部向上）于35C培養 18-24 小時6 培養瓶繼續孵育至第七天，每日早晨取出檢查有無生長，并搖均培養液續孵。下列幾種情況提示細菌生長。（ 1）均勻渾濁，發酵葡萄糖產生氣泡。（ 2）微渾濁有綠色變化。（ 3）血球上面出現顆粒狀或絮狀沉淀物生長，或自下而上的嚴重溶血。（ 4）渾濁并有膠凍狀凝固，瓶壁有顆

9、粒黏附。（ 5）表面有菌膜、菌環狀生長，下呈渾濁。7 肉眼見有細菌生長做如下處理：（ 1）取生長物涂片，做革蘭染色。 （2）取生長物做藥敏試驗（直接試驗） 。（3）取生長物做相應的生化鑒定。（4）取生長物移種血平板、 巧克力和中國蘭（或麥康凱）等平板進行分離以獲得純培養。8 革蘭氏染色所見結果應及時報告臨床醫師。9 根據革蘭染色的結果，以培養瓶內培養液為菌液，做直接法藥物敏感性測定，爭取在較短時間內得出初步結果，供臨床醫師作為治療的參考。標本經平板分離純培養后須重復做鑒定及藥敏試驗 ，以驗證用增菌液直接試驗結果的可靠性。10 無細菌生長表現的培養瓶，在觀察的 7 天中，最少 2 次 盲目轉種。

10、需養培養瓶用血瓊脂平板、中國蘭（或麥康凱）及巧克力平板 ( 二氧化碳環境 ) ，分別于增菌培養第 3 日和第 5 日各作一次盲目分離培養； 培養 48 小時后觀察結果， 7 天仍未見生長 - 報告陰性。各種標本培養采樣時的 注意事項：采樣時必須按采樣要求操作， 并且須在使用抗菌素前進行，并及時送檢。結果判斷時必須注意區別病原菌和正常菌群。正常無菌部位培養出細菌有臨床意義。有正常菌群存在的部位，培養出細菌須區分是否為正常菌群并結合臨床情況判斷。革蘭氏染色標準操作流程1 取干燥、標本薄而均勻的涂片。2 加龍膽紫染色 10 秒，之后水洗，甩干。3 加碘溶液染色 10 秒，之后水洗，甩干。4 加脫色液

11、脫色（ 10-20 ）秒，之后水洗，甩干。5 最后加沙皇溶液復染 10 秒，之后水洗。6 以濾紙吸干或在空氣中干后，鏡檢7 報告結果（革蘭氏陽性菌呈紫色；革蘭氏陰性菌呈紅色。 ）抗酸染色標準操作流程1 取干燥標本薄而均勻的涂片。2 涂片自然干燥后， 放置染色架上， 玻片間距保持 10mm以上的距離； 火焰固定 ( 在 5 秒內將玻片置于火焰上烤 4 次)3 滴加石碳酸復紅溶液蓋滿玻片，染色 10 分鐘或更久。（不需加溫步驟）4 流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去染色液，瀝去標本上剩余的水。5 自痰膜上端外緣滴加酸性酒精溶液蓋滿玻片，脫色（ 1-2 ）分鐘；如有必要，需流水洗去酸性酒精溶液后，再次脫色至痰膜無可視紅色為