1、1. 環境潔凈級別分類環境潔凈級別分類2. 環境監測體系環境監測體系3. 系統性的監測系統性的監測潔凈級別abcd懸浮粒子最大允許數/米3at rest 靜態 0.5m3 5203 520352 0003520 000 5.0m20292 90029 000in operation 動態 0.5m3 520352 0003 520 000不作規定 5.0m202 90029 000not defined級別babcd浮游菌cfu/m3 110100200沉降碟（）cfu/4小時c 1550100接觸碟（）cfu/碟1525505指手套cfu/手套15微生物控制標準微生物控制標準1. 清潔和消毒

2、清潔和消毒2. 取樣位置的選擇取樣位置的選擇3. 取樣頻率取樣頻率4. 警戒和糾偏限度警戒和糾偏限度5. 環境監測數據管理環境監測數據管理6. 細菌鑒定細菌鑒定7. 偏差調查偏差調查/capa1，清潔和消毒，清潔和消毒執行清潔和消毒程序是整個工廠管理的重要組成。要用執行清潔和消毒程序是整個工廠管理的重要組成。要用環境監測數據來評價這些程序的有效性環境監測數據來評價這些程序的有效性影響消毒消毒的因素：消毒劑類型，左右時間，待影響消毒消毒的因素：消毒劑類型，左右時間，待消毒表面消毒表面消毒劑效率測試消毒劑效率測試殘留去除殘留去除 空氣懸浮粒子監測空氣懸浮粒子監測確定采樣點位置確定采樣點位置 按公式

3、（按公式（b.1）求出最少的采樣點數目：）求出最少的采樣點數目： nl 式中式中 nl 最少采樣點數（四舍五入為整數）。最少采樣點數（四舍五入為整數）。 a 潔凈室或潔凈區的面積，以計。潔凈室或潔凈區的面積，以計。 注注: 在水平單向層流時，面積在水平單向層流時，面積a可以看作是與可以看作是與氣流方向呈垂直流動的空氣的截面積。氣流方向呈垂直流動的空氣的截面積。 空氣懸浮粒子監測空氣懸浮粒子監測每個采樣點的每次采樣量每個采樣點的每次采樣量vs用下式確定：用下式確定： 20 vs 1000 cnm vs 每個采樣點每次最少采樣量，用升表示每個采樣點每次最少采樣量，用升表示 cnm 為相關等級規定最

4、大被考慮粒徑之等級限值為相關等級規定最大被考慮粒徑之等級限值（pc/m3 空氣）。空氣）。 20 粒子濃度處于該等級限值時，可被檢測到粒子數粒子濃度處于該等級限值時，可被檢測到粒子數連續監測系統連續監測系統 空氣浮游菌監測空氣浮游菌監測 浮游菌監測（主動法）浮游菌監測（主動法） 撞擊式，離心式和膜過濾（明膠）取樣儀撞擊式，離心式和膜過濾（明膠）取樣儀 應取一定體積的空氣（取樣體積應有代表性）應取一定體積的空氣（取樣體積應有代表性） 儀器應經過校驗儀器應經過校驗 沉降菌監測（被動法）沉降菌監測（被動法） 沉降碟在空氣中的暴露時間沉降碟在空氣中的暴露時間4小時小時 監控整個灌裝過程監控整個灌裝過程

5、 只能給出定性和半定量的數據只能給出定性和半定量的數據 應結合空氣浮游菌的數據，對沉降碟的結果進行評價應結合空氣浮游菌的數據，對沉降碟的結果進行評價 環境表面監測環境表面監測 應當對接觸產品的表面、地面、墻以及設備定期進行監測應當對接觸產品的表面、地面、墻以及設備定期進行監測 接觸碟接觸碟 用于平整表面用于平整表面 取樣面積取樣面積25cm2 培養基要凸起，高于碟子邊緣培養基要凸起，高于碟子邊緣 培養基中含有中和劑培養基中含有中和劑 表面擦試法表面擦試法-用于非規則表面用于非規則表面 擦拭面積大約為擦拭面積大約為25cm2 定性或定量定性或定量 表面樣應在無菌操作結束時取表面樣應在無菌操作結束

6、時取（以最大限度地降低無菌制造過程中關鍵表面污染的風險）（以最大限度地降低無菌制造過程中關鍵表面污染的風險） 擦拭法和接觸碟法均可使用擦拭法和接觸碟法均可使用2，取樣位置的選擇：，取樣位置的選擇：哪些部位的微生物污染最可能對產品質量造成不良影響？哪些部位的微生物污染最可能對產品質量造成不良影響？在生產過程中，什么地點最容易長菌？在生產過程中，什么地點最容易長菌？取樣點的選擇需要統計學設計或根據網格法來確定？取樣點的選擇需要統計學設計或根據網格法來確定？ 在在常規監測中，有一些點需要周轉取樣嗎？常規監測中，有一些點需要周轉取樣嗎？哪些地方是清潔、消毒或滅菌時最難覆蓋哪些地方是清潔、消毒或滅菌時最

7、難覆蓋/接觸或最難湊接觸或最難湊效的部位？效的部位？什么活動會導致污染的擴散？什么活動會導致污染的擴散？在某一部位的取樣操作，足以導致測試數據的差錯或污染在某一部位的取樣操作，足以導致測試數據的差錯或污染產品？取樣只應在生產結尾換班時進行嗎？產品？取樣只應在生產結尾換班時進行嗎？2，取樣位置的選擇：，取樣位置的選擇：系統環境空氣（灌裝線）潔凈室空氣水表面（廠房）表面（設備）壓縮空氣無菌檢查系統灌裝線操作人員單向流（例如，單向流罩）取樣點接近敞開和/或者已灌裝的容器最接近工作區域使用點地面、門把手、墻、簾子灌裝線、 控制面板、供膠塞的料斗離開壓縮機最遠點最接近真空源的接口至少要檢手指印 靠近活動

8、最多的區域取樣點舉例取樣點舉例2，取樣位置的選擇：無菌灌裝線，取樣位置的選擇：無菌灌裝線 應以微生物污染的風險為基礎來考慮應以微生物污染的風險為基礎來考慮 取樣點應在產品或組件暴露的區域周圍取樣，如：取樣點應在產品或組件暴露的區域周圍取樣，如： 在灌裝針頭處在灌裝針頭處 將產品裝載入凍干腔室處將產品裝載入凍干腔室處 膠塞供料桶膠塞供料桶 無菌部件進行連接操作的部位無菌部件進行連接操作的部位 不影響生產過程的操作人員頻繁活動處不影響生產過程的操作人員頻繁活動處靠近產品，但不接觸產品的位置靠近產品，但不接觸產品的位置3，取樣頻率，取樣頻率批生產動態監測批生產動態監測日常監測日常監測輪轉監測輪轉監測

9、選擇取樣頻率的關鍵點是盡可能鑒別出系統潛在選擇取樣頻率的關鍵點是盡可能鑒別出系統潛在的缺陷。的缺陷。3，取樣頻率，取樣頻率: usp 1116潔凈區潔凈區取樣頻率取樣頻率100100級或更高級別級或更高級別每班一次每班一次100100級區毗連的支持性區域級區毗連的支持性區域( (如：如：10,00010,000級級) )每班一次每班一次其它支持性區域其它支持性區域(100,000(100,000級級) )每周二次每周二次可能與產品可能與產品/ /容器相接觸的區域容器相接觸的區域每周二次每周二次無菌生產區的其它支持性區域（不與產無菌生產區的其它支持性區域（不與產品相接觸，通常為品相接觸，通常為1

10、00,000100,000級或更低）級或更低）每周一次每周一次4，警戒和糾偏限度，警戒和糾偏限度糾偏限度：糾偏限度： 相關相關gmp和和藥典藥典的的法規法規要求，要求， 連續三次超過下列警戒限度視為超過一次糾偏限度連續三次超過下列警戒限度視為超過一次糾偏限度警戒限度：警戒限度： 根據驗證根據驗證數據數據 歷史的運行監測結果基于統計學制定的歷史的運行監測結果基于統計學制定的5，數據管理，數據管理監測日期監測日期取樣地點取樣地點取樣方法取樣方法微生物菌落數或微粒數，微生物菌落數或微粒數，鑒別結果鑒別結果產品批號產品批號目前的糾偏限度目前的糾偏限度5，數據管理：趨勢分析，數據管理：趨勢分析分析的目標

11、分析的目標用警戒用警戒/糾偏值來確定糾偏值來確定“糾偏措施糾偏措施”確定現行的警戒確定現行的警戒/糾偏限度糾偏限度標準是否恰當標準是否恰當用定期報告來更新管理。用定期報告來更新管理。年度報告中包括數據的總結和對糾偏限度的回顧年度報告中包括數據的總結和對糾偏限度的回顧6，細菌鑒定，細菌鑒定biomerieux vitek, inc. (vitek)biolog pe applied biosystemsqualicon, a dupont subsidiaryapi革蘭氏染色革蘭氏染色7，偏差調查，偏差調查/capa:壓縮氣體系統壓縮氣體系統 立即重復測試立即重復測試 測試該過濾器的完整性測試該

12、過濾器的完整性 檢查并在必要時（如復測證實超標時）更檢查并在必要時（如復測證實超標時）更換過濾器。換過濾器。 評估偏差對已處理組件和評估偏差對已處理組件和/或產品的影響或產品的影響 7，偏差調查，偏差調查/capa: hvac系統系統 回顧檢查人員活動的水平回顧檢查人員活動的水平 回顧檢查回顧檢查/進行氣流方式進行氣流方式/煙霧試驗煙霧試驗 回顧無菌操作人員的技術回顧無菌操作人員的技術 回顧生產區內更衣要求回顧生產區內更衣要求 對氣體過濾器進行泄漏檢查并測試二側的減差對氣體過濾器進行泄漏檢查并測試二側的減差 回顧車間的清潔回顧車間的清潔/消毒程序，消毒間隔時間和消毒效率消毒程序，消毒間隔時間和

13、消毒效率 檢查區域壓差，尤其是上一次消毒后的壓差檢查區域壓差，尤其是上一次消毒后的壓差 對機械設備潛在的污染源進行評估對機械設備潛在的污染源進行評估 檢查、評估房間的完整性（例如油漆剝落，天花板、墻和地面上檢查、評估房間的完整性（例如油漆剝落，天花板、墻和地面上的裂縫，）的裂縫，） 回顧審核產品的風險回顧審核產品的風險 7，偏差調查，偏差調查/capa：水系統：水系統 檢查水系統的內毒素和化學項目數據檢查水系統的內毒素和化學項目數據 檢查水系統其它樣品或取樣點的生物負荷，將出水檢查水系統其它樣品或取樣點的生物負荷，將出水點與系統的污染水平對比點與系統的污染水平對比 回顧檢查消毒程序的有效性及和

14、程序的執行周期回顧檢查消毒程序的有效性及和程序的執行周期 回顧檢查系統預防性維護記錄回顧檢查系統預防性維護記錄 檢查樣品的收集和使用規程檢查樣品的收集和使用規程 檢查系統是否有盲管，傾斜度？取樣點和取樣口位檢查系統是否有盲管，傾斜度？取樣點和取樣口位置是否適當置是否適當 評估所述系統對已處理組件及評估所述系統對已處理組件及/或產品的影響或產品的影響 7，偏差調查，偏差調查/capa：人員：人員 評估人員對產品可能的影響評估人員對產品可能的影響/污染污染 回顧審查無菌檢查的數據回顧審查無菌檢查的數據 回顧檢查其他區域環境監測的數據回顧檢查其他區域環境監測的數據 回顧檢查有于手套的消毒劑的配制及其

15、有效期回顧檢查有于手套的消毒劑的配制及其有效期 鑒定所有獨特形態的分離菌（人與環境對比）鑒定所有獨特形態的分離菌（人與環境對比） 對操作人員的培訓情況進行評估對操作人員的培訓情況進行評估 面試操作人員，看潛在的風險面試操作人員，看潛在的風險 對操作人員再培訓，重新確認資質（考核）對操作人員再培訓，重新確認資質（考核） 水系統監測水系統監測 壓縮空氣監測壓縮空氣監測 生產環境監測生產環境監測 人員監測人員監測 產品和組件的微生物負荷監測產品和組件的微生物負荷監測 無菌檢查環境監測無菌檢查環境監測人員監控及資質確認人員監控及資質確認取樣方法：取樣方法：接觸碟法：操作服接觸碟法：操作服手指印法手指印

16、法棉簽擦拭取樣：手套棉簽擦拭取樣：手套人員監控及資質確認人員監控及資質確認取樣方法：取樣方法：接觸碟法：操作服接觸碟法：操作服手指印法手指印法棉簽擦拭取樣：手套棉簽擦拭取樣：手套 取樣位置：取樣位置： 雙手手指印雙手手指印 頭部、頭部、 口罩口罩 肩部肩部 前臂前臂 手腕手腕 腿部腿部/靴子靴子 眼罩眼罩接觸碟法接觸碟法27基于無菌操作的污染風險級別進行監控基于無菌操作的污染風險級別進行監控針對不同無菌操作人員采用不同的取樣頻率、不同的針對不同無菌操作人員采用不同的取樣頻率、不同的取樣數量，取樣數量， 裝機人員（裝機人員（a級區操作人員）級區操作人員） 無菌膠塞等物料添加人員無菌膠塞等物料添加

17、人員 b級區工作人員級區工作人員 維修人員維修人員/qa人員人員/環境監測人員環境監測人員接觸碟法接觸碟法28 取樣時機：取樣時機： 工作結束，離開級區前取樣工作結束，離開級區前取樣 處理異常情況后（取樣后重新更衣或更換手套）處理異常情況后（取樣后重新更衣或更換手套）不得在剛剛消毒過后不得在剛剛消毒過后29 微生物負荷監測微生物負荷監測 應有滅菌前、中間控制及原料測試生物負荷的規程應有滅菌前、中間控制及原料測試生物負荷的規程 應對低濃度微生物的恢復應對低濃度微生物的恢復/回收方法進行驗證回收方法進行驗證 如有證據表明環境中存在厭氧菌，則應考慮采用厭如有證據表明環境中存在厭氧菌，則應考慮采用厭氧培養基氧培養基 應有生物負荷的目標值、警戒限度，并有超過這些應有生物負荷的目標值、警戒限度，并有超過這些指標應取措施的文件指標應取措施的文件工藝工藝發酵/主要捕獲純化配制生產活動擬考慮的監測生產活動擬考慮的監測 將菌種接種至擴增罐培養 接種至發酵罐 收集物的均質 產品收集 工藝罐、層析柱加料 收集各個組分 將收集的組分合并 配制容器 在配制時投料 除菌過濾監測地點監測地點 轉移管連接點線 靠近密封圈及發酵罐的位置 靠近均質器的活塞 接近離心機 無菌方