1、動物細胞工程復習1動物細胞工程專題復習動物細胞工程專題復習動物細胞工程復習2動物細胞培養動物細胞培養動物細胞工程復習3動物動物胚胎胚胎或或幼齡幼齡動動物的組織、器官物的組織、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎單個細胞單個細胞加培養液加培養液制成制成細胞細胞懸浮懸浮液液10代代細胞細胞部分細胞部分細胞“癌變癌變”，遺傳物質改變，無遺傳物質改變，無限傳代限傳代動物細胞培養不能動物細胞培養不能最終培養成動物體最終培養成動物體50代細胞代細胞原代培養原代培養傳代培養傳代培養細胞貼壁細胞貼壁剝離、分瓶剝離、分瓶細胞細胞1 1、過程：、過程：動物細胞工程復習4細胞細胞懸浮懸浮液液1010代代細胞細胞5050代代

2、細胞細胞無限無限傳代傳代原代培養原代培養傳代培養傳代培養如何界定原代培養和傳代培養；細胞株如何界定原代培養和傳代培養；細胞株和細胞系？和細胞系？多數組織細胞固定在表面多數組織細胞固定在表面生長和分裂。生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖遺傳物質改變遺傳物質改變動物細胞工程復習5幾個有關概念：幾個有關概念： 原代培養：原代培養：從機體取出后立即培養的細胞從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞。培養的為原代細胞。培養的第第1 1代代細胞與細胞與傳傳1010代以代以內內的細胞稱為原代細胞培養。的細胞稱為原代細胞培養。 傳代培養：傳代培養：將原代細胞從培養瓶中取出

3、，將原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，稱為傳代培養上的培養瓶中繼續培養，稱為傳代培養。動物細胞工程復習61 1、無菌、無毒：、無菌、無毒： 2 2、全部的營養物質：、全部的營養物質： 3 3、適宜的溫度和、適宜的溫度和PHPH值：值： 4 4、必要的氣體條件：、必要的氣體條件：（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）保證細胞順利的保證細胞順利的生長增殖生長增殖36.5+36.5+（-

4、 -）0.50.5度度, 7.2-7.4, 7.2-7.4O O2 2和和COCO2 2（95%95%空氣和空氣和5% CO5% CO2 2 ）2 2、條件：、條件：維持培養液的維持培養液的PH動物細胞工程復習7 3 3、應用：、應用： 大規模培養生產生物制品（病毒疫苗、大規模培養生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）干擾素、單克隆抗體） 作為基因工程中的受體細胞作為基因工程中的受體細胞 培養的動物細胞可以用于檢測有毒物培養的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性質，判斷某種物質的毒性 用于生理、病理、藥理等方面的研究，用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論

5、依據為治療和預防疾病提供理論依據動物細胞工程復習8細胞的全能性細胞的全能性細胞細胞植株植株培養結果培養結果獲得細胞獲得細胞或或細胞產物細胞產物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養目的培養目的葡萄糖、動物血葡萄糖、動物血清清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養基特有成分培養基特有成分液體培養基液體培養基固體培養基固體培養基培養基性質培養基性質細胞增殖細胞增殖原理原理動物細胞培養動物細胞培養植物組織培養植物組織培養比較項目比較項目植物組織培養和動物細胞培養的比較植物組織培養和動物細胞培養的比較動物細胞工程復習91.1.動物細胞工程技術的基礎是（動物細胞工程技術的基礎是（ ）A A、

6、動物細胞融合、動物細胞融合 B B、胚胎移植、胚胎移植 C C、動物細胞培養、動物細胞培養 D D、核移植、核移植2.2.下列有關動物細胞培養的敘述中正確的是（下列有關動物細胞培養的敘述中正確的是（ ）A A、動物細胞培育的目的是獲得大量的細胞分泌蛋白、動物細胞培育的目的是獲得大量的細胞分泌蛋白B B、動物細胞培養前要用胰蛋白酶使細胞分散、動物細胞培養前要用胰蛋白酶使細胞分散C C、細胞的癌變發生于原代培養向傳代培養的過渡過程中、細胞的癌變發生于原代培養向傳代培養的過渡過程中D D、培養至、培養至5050代后的傳代細胞稱為細胞株代后的傳代細胞稱為細胞株C CB B 動物細胞工程復習10核移植技

7、術和克隆動物核移植技術和克隆動物動物細胞工程復習11 1. 1. 概念：概念：將動物的一個細胞的細胞核，移將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的入一個已經去掉細胞核的卵母細胞卵母細胞中，使其中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育成動物個體。最終發育成動物個體。核移植核移植（難度高）（難度高）受體細胞：受體細胞：MM期的期的卵母細胞卵母細胞胚胎細胞核移植：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，細胞分化程度低，恢復全能性容易恢復全能性容易用核移植的方法得到的動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物稱為克隆動物原

8、理：動物體細胞核的全能性。原理：動物體細胞核的全能性。動物細胞工程復習12取供體細胞取供體細胞取卵母細胞取卵母細胞 供體細胞培養供體細胞培養培養到培養到 M中期中期 卵母細胞去核卵母細胞去核 供體細胞供體細胞注入去核的卵母細胞注入去核的卵母細胞 供體核進入受體卵母細胞供體核進入受體卵母細胞 重組胚胎重組胚胎 代孕母牛代孕母牛 生出與供體遺傳物質基本相同的個體生出與供體遺傳物質基本相同的個體2.2.過程：過程：動物細胞工程復習133.3.克隆動物的研究意義：克隆動物的研究意義：1.1.克隆動物作為生物反應器，生產醫用蛋白克隆動物作為生物反應器，生產醫用蛋白2.2.改良動物品種改良動物品種 3.3

9、.治療人類疾病，作為供體治療人類疾病，作為供體4.4.保護瀕危動物保護瀕危動物4體細胞核移植技術存在的問題：體細胞核移植技術存在的問題：1.1.許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，如體型許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發育困難，免疫失調等。過大，異常肥胖，發育困難，免疫失調等。2.2.成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。動物細胞工程復習14動物細胞融合動物細胞融合動物細胞工程復習151.1.過程：過程：動物細胞動物細胞A A動物細胞動物細胞B B誘導，融合誘導，融合2 2個完整的個完整的雜交細胞雜交細胞ABAB有絲分裂有絲分裂（

10、膜融合、質融合）（膜融合、質融合）（核融合）（核融合）注意：注意：動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩選雜交細在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩選雜交細胞胞動物細胞工程復習162.2.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。3.3.應用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物應用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段新品種培育等的重要手段特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗體特別是

11、利用雜交瘤技術制造單克隆抗體動物細胞工程復習17植物體細胞雜交和動物細胞融合比較植物體細胞雜交和動物細胞融合比較動物細胞工程復習181 1、動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是、動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是誘導融合的方法完全相同誘導融合的方法完全相同 所用的技術手段不相同所用的技術手段不相同所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 都能形成雜種細胞都能形成雜種細胞A.A.B.B. C. C. D. D.2 2、動物細胞融合和植物原生質體融合比較，在動物細胞、動物細胞融合和植物原生質體融合比較，在動物細胞融合中有特殊性的是融合中有特殊性的是A A、融合的原理、融合的原

12、理 B B、融合的優點、融合的優點 C C、融合的誘導手段、融合的誘導手段 D D、融合的過程、融合的過程動物細胞工程復習19單克隆抗體單克隆抗體動物細胞工程復習201.單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程誘導其融合的方法有哪些？誘導其融合的方法有哪些？融合后培養液中有幾種細胞融合后培養液中有幾種細胞怎樣篩選出雜交瘤細胞，雜交怎樣篩選出雜交瘤細胞，雜交瘤細胞有何優點瘤細胞有何優點注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么為何要進行克隆化培養和專為何要進行克隆化培養和專一抗體檢測，多次篩選一抗體檢測，多次篩選大量增殖雜交瘤細胞獲得單大量增殖雜交瘤細胞獲得單克隆抗體的方法克隆抗體的方法動物細胞工程復

13、習21過程：過程：B淋巴細胞淋巴細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞誘導誘導融合融合B-B細胞細胞B-瘤細胞瘤細胞瘤瘤-瘤細胞瘤細胞選擇培養選擇培養雜交瘤細胞雜交瘤細胞（ B-瘤細胞）瘤細胞）克隆化培養克隆化培養抗體檢測抗體檢測產生所需抗產生所需抗體的雜交瘤體的雜交瘤細胞細胞體外培養體外培養小鼠腹腔內增殖小鼠腹腔內增殖單克隆抗體單克隆抗體動物細胞工程復習222.2.單克隆抗體的應用：單克隆抗體的應用：. .作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質，作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質，并與抗原特異性結合并與抗原特異性結合2.2.用于用于運載藥物：制成運載藥物：制成“生物導彈生物導彈”治療疾病：主要用于癌癥治療治療

14、疾病：主要用于癌癥治療優點：準確、高效、簡易、快速優點：準確、高效、簡易、快速單克隆抗體的單克隆抗體的優點：特異性強、靈敏度高優點：特異性強、靈敏度高優點優點: :療效高、毒副作用小療效高、毒副作用小動物細胞工程復習23下圖為細胞融合的簡略過程（只考慮兩個細胞的融合）下圖為細胞融合的簡略過程（只考慮兩個細胞的融合）請據圖回答：請據圖回答： I I若若A A、B B是基因型分別為是基因型分別為rrHHrrHH、RRhhRRhh兩個煙草品種細胞兩個煙草品種細胞的花粉，且這兩對基因位于非同源染色體上，由于一對的花粉，且這兩對基因位于非同源染色體上，由于一對隱性純合基因隱性純合基因(rr(rr或或hh

15、) hh) 的作用，在光照強度大于的作用，在光照強度大于800800勒勒克斯時，都不能生長。克斯時，都不能生長。實驗開始時必須用實驗開始時必須用 除去不利于原除去不利于原生質體融合的物質。生質體融合的物質。實驗中除獲得雜種細胞外，還有基因型實驗中除獲得雜種細胞外，還有基因型為為 的融合細胞。的融合細胞。纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶rrHHrrHH、RRhhRRhh 動物細胞工程復習24設計一方法（不考慮機械方法），從培養液中分離出雜設計一方法（不考慮機械方法），從培養液中分離出雜種細胞，方法：種細胞，方法： 將雜種細胞培養成雜種植株依據的理論基礎將雜種細胞培養成雜種植株依據的理論基礎是是

16、。IIII若該過程是制備治療若該過程是制備治療“SARSSARS”病毒的單克隆抗體，病毒的單克隆抗體，A A為為人人B B淋巴細胞（染色體組成為淋巴細胞（染色體組成為2A2AXX=46XX=46），），B B為鼠骨髓瘤為鼠骨髓瘤細胞（染色體組成為細胞（染色體組成為2A2AXX=40XX=40）用單克隆抗體制成用單克隆抗體制成“生物導彈生物導彈”主要利用了抗體主要利用了抗體的的 特性。特性。A A細胞來自于細胞來自于 ，雜種細胞，雜種細胞C C共有共有 個個染色體組。染色體組。雜交瘤細胞在體外培養時與植物組織培養的主要區別是雜交瘤細胞在體外培養時與植物組織培養的主要區別是培養基要用培養基要用 培

17、養基。（物理狀態），培養基中除培養基。（物理狀態），培養基中除了添加必要的營養物質為還需加入了添加必要的營養物質為還需加入 。置大于置大于800800勒克斯光照下培養，收集分化的勒克斯光照下培養，收集分化的 細胞團細胞團 細胞的全能性細胞的全能性 抗體與抗原結合，發揮特異性免疫效應抗體與抗原結合，發揮特異性免疫效應 非典患者非典患者 4 4 液體液體 動物血清動物血清 動物細胞工程復習256.6.右圖是制備分泌抗右圖是制備分泌抗X X抗體的過程，根據圖解回答問題：抗體的過程，根據圖解回答問題： 動物細胞工程復習26給小鼠注射抗原的目的是給小鼠注射抗原的目的是_。在單克隆抗體制備過程中之所以選用

18、在單克隆抗體制備過程中之所以選用B B淋巴細胞和骨髓淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們融合后的雜交瘤細胞具瘤細胞，是因為它們融合后的雜交瘤細胞具有有_ 的特性。的特性。由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了_和和_的動物細胞工程技術手段，前者常用的誘的動物細胞工程技術手段，前者常用的誘導劑與植物原生質體融合不同的是可用導劑與植物原生質體融合不同的是可用_。動物細胞培養液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機動物細胞培養液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，與植物細胞培養基有所不同的是，還含鹽、維生素等，與植物細胞培養基有所不同的是，還含有有_。獲得能產生相應抗體的獲得能產生相應抗體的B B細胞細胞 既能無限增殖，又能產生特定抗體