1、LOGO 腸道傳染病常見腸道傳染病常見 致病菌實驗室檢測致病菌實驗室檢測 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測 v一、一、腸道傳染病概述腸道傳染病概述 v二、二、幾種常見致病菌的實驗室檢測幾種常見致病菌的實驗室檢測 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 一、概述一、概述 v腸道傳染病是由各種病原體經口侵入腸道，腸道傳染病是由各種病原體經口侵入腸道， 在腸道內繁殖并產生毒素，破壞腸粘膜組織，在腸道內繁殖并產生毒素，破壞腸粘膜組織， 引起腸道功能紊亂和損害，病原體再從患者引起腸道功能紊亂和損害，病原體再從患者 由糞便中排出感染他

2、人的一類疾病。往引起由糞便中排出感染他人的一類疾病。往引起 腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及發熱等癥狀，嚴腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及發熱等癥狀，嚴 重者可引起身體重度脫水、昏迷和休克，甚重者可引起身體重度脫水、昏迷和休克，甚 至有生命危險。至有生命危險。 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 一、概述一、概述 v 特點：發病急、傳播快、傳染性強、危害性特點：發病急、傳播快、傳染性強、危害性 大、極易引起暴發或流行大、極易引起暴發或流行 v流行特征流行特征 1、傳播途徑：糞、傳播途徑：糞-口（食物、水、日常生活接觸、昆蟲媒介）口（食物、水、日常生活接觸、昆蟲媒介） 2、病原體：外界抵抗力和存活力強、病

3、原體：外界抵抗力和存活力強 3、傳染源：病人、帶菌者目前認為是唯一的傳染源、傳染源：病人、帶菌者目前認為是唯一的傳染源 4、明顯季節性：主要出現在夏秋季、明顯季節性：主要出現在夏秋季 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 傳播途徑傳播途徑 v 1、經水傳播：生活飲用水源被腸道傳染病人和病原攜帶者排出的糞便、嘔吐物、經水傳播：生活飲用水源被腸道傳染病人和病原攜帶者排出的糞便、嘔吐物 污染或在水中洗滌病人的衣褲、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍亂、污染或在水中洗滌病人的衣褲、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍亂、 傷寒、細菌性痢疾等疾病的暴發流行。傷寒、細菌性痢疾等疾病的暴發流行。

4、v 2、經食物傳播：食品在加工、儲存、制作、運輸的銷售等過程中被腸道傳染病、經食物傳播：食品在加工、儲存、制作、運輸的銷售等過程中被腸道傳染病 的病原體污染，可造成局部的流行和暴發流行。的病原體污染，可造成局部的流行和暴發流行。 v 3、接觸傳播：通過握手、使用或接觸過病人的衣物、文具、門具、門把手、人、接觸傳播：通過握手、使用或接觸過病人的衣物、文具、門具、門把手、人 民幣等造成病原體傳播。民幣等造成病原體傳播。 v 4、昆蟲傳播：有些腸道傳染病的病原體可在蒼蠅、蟑螂等媒介昆蟲體內存活一、昆蟲傳播：有些腸道傳染病的病原體可在蒼蠅、蟑螂等媒介昆蟲體內存活一 段時間，并隨著昆蟲的活動進行傳播。段

5、時間，并隨著昆蟲的活動進行傳播。 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 病原體病原體 v甲類傳染?。夯魜y；甲類傳染?。夯魜y； v乙類傳染?。簜透眰?、細菌性和阿米乙類傳染?。簜透眰⒓毦院桶⒚?巴性痢疾、脊髓灰質炎、甲、戊型病毒性肝巴性痢疾、脊髓灰質炎、甲、戊型病毒性肝 炎；炎； v丙類傳染?。撼魜y、傷寒副傷寒、細菌性丙類傳染?。撼魜y、傷寒副傷寒、細菌性 和阿米巴性痢疾以外的細菌、病毒、原蟲等和阿米巴性痢疾以外的細菌、病毒、原蟲等 病原體引起的腸道感染。病原體引起的腸道感染。 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 二、幾種常見致病菌的實驗室檢測二、幾種常見致病菌的實驗室

6、檢測 v（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v（二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌） LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v由傷寒沙門菌和甲、由傷寒沙門菌和甲、 乙、丙型副傷寒沙門乙、丙型副傷寒沙門 菌引起的急性腸道傳菌引起的急性腸道傳 染病。染病。 v參照傷寒和副傷寒診參照傷寒和副傷寒診 斷標準（斷標準（ws280- 2008 ） LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和

7、副傷寒（沙門氏菌） v1 診斷依據診斷依據 1.1 流行病學史流行病學史 1.1.1 病前病前 30d 內曾到過或生活在傷寒、內曾到過或生活在傷寒、 副傷寒流行區。副傷寒流行區。 1.1.2 有傷寒、副傷寒患者、帶菌者密切接有傷寒、副傷寒患者、帶菌者密切接 觸史。觸史。 1.1.3 有喝生水等不良衛生習慣者。有喝生水等不良衛生習慣者。 v1.2 臨床表現臨床表現 1.2.1 不明原因持續發熱。不明原因持續發熱。 1.2.2 特殊中毒面容（表情淡漠，呆滯），特殊中毒面容（表情淡漠，呆滯）， 相對緩脈，皮膚玫瑰疹，肝脾腫大。相對緩脈，皮膚玫瑰疹，肝脾腫大。 v1.3 實驗室檢測實驗室檢測 1.3.

8、1 嗜酸性粒細胞減少或消失、白細胞總嗜酸性粒細胞減少或消失、白細胞總 數正?；虻拖?；數正?；虻拖拢?1.3.2 肥達反應肥達反應“O”抗體凝集效價抗體凝集效價1： 80， “H”抗體凝集效價抗體凝集效價1：160者；但者；但 在高發地區，許多正常人因既往感染亦可有在高發地區，許多正常人因既往感染亦可有 較高滴度，此時最好首先檢查當地人群免疫較高滴度，此時最好首先檢查當地人群免疫 水平，確定正常值；水平，確定正常值； 1.3.3 恢復期血清中特異性抗體效價較急性恢復期血清中特異性抗體效價較急性 期血清特異性抗體效價增高期血清特異性抗體效價增高 4 倍以上；倍以上； 1.3.4 從血、骨髓、糞便、

9、膽汁中任一種標從血、骨髓、糞便、膽汁中任一種標 本分離到傷寒沙門菌或副傷寒沙門菌。本分離到傷寒沙門菌或副傷寒沙門菌。 v 2 診斷診斷 v 帶菌者帶菌者 ：無任何臨床表：無任何臨床表 現、從糞便中分離到傷寒現、從糞便中分離到傷寒 沙門菌或副傷寒沙門菌。沙門菌或副傷寒沙門菌。 v 疑似病例：疑似病例：1.1任何一項任何一項 +1.2.1或或 1.2.1+1.2.2 任何一項任何一項 體征或體征或1.2.1+1.3.1 v 臨床診斷病例：臨床診斷病例： 1.2.1+1.2.2 中任何一中任何一 項體征項體征+（1.3.1或或 1.3.2） v 確診病例：確診病例： 1.2.1+1.3.3或或 1.

10、2.1+1.3.4 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v3 實驗室病原學檢查實驗室病原學檢查 標標 本本 采采 集集 及及 送送 檢檢 分分 離離 培培 養養 形形 態態 與與 染染 色色 生生 化化 反反 應應 血血 清清 學學 及及 確確 定定 鑒鑒 定定 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v標本采集及送檢：標本采集及送檢：發病1-2周取血，3-4周取糞便(新 鮮糞便冷藏8h內送檢，轉移至卡里-布萊爾Cary-Blair運送 培養基的糞便試子冷藏24h

11、內送檢)，全程可取骨髓（已用抗 生素，其他標本陰性）作細菌培養。整個病程中應分期采集 2-3份標本作血清抗體檢測。 *轉移至Cary-Blair運送培 養基的糞便試子分離培養 時應輕攪混合標本 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v分離培養分離培養 血液：血液：按1：10加入血液增菌培養基或葡萄糖膽鹽肉湯， 361孵育，分別于1d、2d、7d轉種血平板或營養瓊 脂平板，361培養24-48h 骨髓：骨髓：直接或增菌分離 糞便：糞便：直接接種或于亞硒酸鹽增菌培養基亞硒酸鹽增菌培養基361增菌 18-24h后接種于SS、MAC或沙

12、門顯色沙門顯色等培養基361 培養18-24h LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v形態與染色：形態與染色： 在SS和MAC培養基上形成中等大小、無色透明、表面光滑、邊 緣整齊的菌落部分產H2S菌株形成中心黑褐色的菌落 革蘭陰性桿菌周身鞭毛，無莢膜、芽胞 SS agar E.coli LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v生化反應：生化反應： 純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等 361培養18-24h觀察生化反應進行初篩。 發酵葡萄糖、不發酵乳糖

13、 ，除傷寒沙門菌不產氣外， 其余菌產生氣體，動力陽性、吲哚陰性、不水解尿 素，其KIA生化反應模式為：K/A G H2S(+)； MIU生化模式為： LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v 血清學鑒定：血清學鑒定：凡生化反應附合沙門菌者，均應用血清學凝集試驗確定凡生化反應附合沙門菌者，均應用血清學凝集試驗確定 相應群和生物型，基本原則：相應群和生物型，基本原則：O:Vi:H1:H2 A-F群多價O血清 多價凝集后再用每個O血

14、清群的單價因子血清定群后用H因子檢查第1相和 第2相H抗原 單價O因子血清不凝集，應排除Vi抗原(制成菌懸液100 水浴30min破壞 Vi抗原后再進行血清凝集) LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌） v 確定鑒定：確定鑒定：腸桿菌科細菌各屬之間，生化有類似，抗原有交叉反應和 不典型菌株的出現，需進一步做系統生化反應鑒定，可選擇生化鑒定試 劑盒或全自動微生物生化鑒定系統鑒定。 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v簡稱菌痢，是由志賀菌屬細菌簡稱菌痢，是由志賀菌屬細菌

15、 引起的腸道傳染病。引起的腸道傳染病。 v細菌性和阿米巴性痢疾診斷標細菌性和阿米巴性痢疾診斷標 準（準（WS287-2008） 分類：分類： A群：痢疾志賀菌群：痢疾志賀菌(S.dysenteriae) B群：福氏志賀菌群：福氏志賀菌(S.flexneri) C群：鮑氏志賀菌群：鮑氏志賀菌(S.boydii) D群：宋內志賀菌群：宋內志賀菌(S.sonnei) LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v 1 診斷依據診斷依據 1.1 流行病學史流行病學史：患者有不潔飲食和（或）與：患者有不潔飲食和（或）與 菌痢患者接觸史。菌痢患者接觸

16、史。 1.2臨床表現臨床表現 1.2.1 潛伏期：數小時至潛伏期：數小時至 7d，一般，一般 1d3d。 1.2.2 臨床癥狀和體征：起病急驟，畏寒、寒臨床癥狀和體征：起病急驟，畏寒、寒 戰伴高熱，繼以腹痛、腹瀉和里急后重，每戰伴高熱，繼以腹痛、腹瀉和里急后重，每 天排便天排便 10 次次20 次，但量不多，呈膿血次，但量不多，呈膿血 便，并有中度全身中毒癥狀。重癥患者伴有便，并有中度全身中毒癥狀。重癥患者伴有 驚厥、頭痛、全身肌肉酸痛，也可引起脫水驚厥、頭痛、全身肌肉酸痛，也可引起脫水 和電解質紊亂，可有左下腹壓痛伴腸鳴音亢和電解質紊亂，可有左下腹壓痛伴腸鳴音亢 進。進。 1.2.3 臨床分

17、型臨床分型 1.3 實驗室檢測實驗室檢測 1.3.1 糞便常規檢查，白細胞或膿細胞糞便常規檢查，白細胞或膿細胞 15/HPF（400 倍）倍） ，可見紅細胞、吞，可見紅細胞、吞 噬細胞。噬細胞。 1.3.2 病原學檢查，糞便培養志賀菌陽性。病原學檢查，糞便培養志賀菌陽性。 v 2 診斷診斷 2.1 疑似病例：腹瀉，疑似病例：腹瀉， 有膿血便或黏液便或有膿血便或黏液便或 水樣便或稀便，伴有水樣便或稀便，伴有 里急后重癥狀，尚未里急后重癥狀，尚未 確定其他原因引起的確定其他原因引起的 腹瀉者。腹瀉者。 2.2 臨床診斷病例：臨床診斷病例： 1.1+1.2+1.3.1+ 排除其他原因引起之排除其他原

18、因引起之 腹瀉。腹瀉。 2.3確診病例：臨床診確診病例：臨床診 斷病例斷病例+1.3.2 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v3 實驗室病原學檢查實驗室病原學檢查 標標 本本 采采 集集 及及 送送 檢檢 分分 離離 培培 養養 形形 態態 與與 染染 色色 生生 化化 反反 應應 血血 清清 學學 及及 確確 定定 鑒鑒 定定 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v標本采集及分離：標本采集及分離：盡量在抗生素使用前，采集血液（懷疑 菌血癥）或新鮮糞便膿血、粘液部分

19、(新鮮糞便置于清潔、干 燥、無肥皂或消毒液殘留的容器中冷藏條件下8h內送檢或轉 移至卡里-布萊爾Cary-Blair運送培養基的糞便試子冷藏24h 內送檢)。 v分離培養：分離培養： 血液：血液：按1：10加入血液增菌培養基，361孵育，分別 于1d、2d、7d轉種血平板或營養瓊脂平板，361培養 24-48h，觀察結果。 糞便：糞便：直接劃線接種于MAC或XLD（木糖賴氨酸去氧膽酸鈉） 培養基361培養18-24h。 不建議使用SS，因其可抑制痢疾志賀氏菌A1型生長，漏檢 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v形態與染色：形態與

20、染色： 革蘭陰性短小桿菌，無鞭毛、芽胞，有菌毛。 在MAC上呈不發酵乳糖的無色、透明、光滑、濕潤、圓形、邊 緣整齊的小菌落； 在XLD上呈粉紅色至無色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣 整齊或不齊的小菌落 S.flexneri on MAC agarS.boydii on MAC agarS.sonnei and E.coli XLD LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v生化反應：生化反應：純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等 361培養16-20h觀察生化反應。 KIA生化反應模式為：K/A H2S(-) ；MIU：

21、+/ LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） v血清學凝集：血清學凝集：凡生化反應附合志賀菌者，均應用凡生化反應附合志賀菌者，均應用 血清學凝集試驗進行鑒定分型血清學凝集試驗進行鑒定分型 無菌挑取KIA表面菌落，用志賀氏菌四種多價抗血清凝集； 凝集者，再取痢疾志賀氏I、痢疾志賀氏II、宋內志賀氏、福 氏志賀氏抗血清凝集； 不凝者排除k抗原(制成菌懸液100 水浴30min后再進行血 清凝集)后，取鮑氏志賀氏菌抗血清凝集； 若與某型血清發生凝集，應進一步作分型鑒定。 v確定鑒定：確定鑒定：選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物 生化鑒定系統進

22、一步做系統生化反應鑒定。 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌） v感染性腹瀉診斷標準（感染性腹瀉診斷標準（ws271-2007） v感染性腹瀉：感染性腹瀉：除霍亂、傷寒副傷寒、細菌性和阿米巴性痢 疾以外的細菌、病毒、原蟲等病原體引起的、以腹瀉為主要 臨床特征的一組腸道傳染病。主要常見的傷寒、副傷寒以外 的沙門氏菌、致瀉性大腸埃希菌（腸毒素型大腸埃希菌 ETEC、腸致病型大腸埃希菌EPEC、腸侵襲型大腸埃希菌 EIEC、腸出血型大腸埃希菌EHEC、腸凝聚型大腸埃希菌 EaggEC）、副溶血性弧菌、彎曲菌、小腸結腸耶爾森菌、 輪

23、狀病毒、隱孢子蟲等 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌） v 副溶血性弧菌（副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus,VP） 是一種革蘭氏陰性，無芽胞，是一種革蘭氏陰性，無芽胞， 呈弧狀、桿狀、絲狀等多種呈弧狀、桿狀、絲狀等多種 形狀的嗜鹽性細菌。進食含形狀的嗜鹽性細菌。進食含 有該菌的食物可致食物中毒，有該菌的食物可致食物中毒， 臨床上以急性起病、腹痛、臨床上以急性起病、腹痛、 嘔吐、腹瀉及水樣便為主要嘔吐、腹瀉及水樣便為主要 癥狀。傳染源主要為帶菌的癥狀。傳染源主要為帶菌的 海產品，近海淡水魚帶菌較海產品，近海淡水魚帶菌較 高。高。 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌） v實驗室病原學檢查實驗室病原學檢查 標標 本本 采采 集集 及及 送送 檢檢 分分 離離 培培 養養 形形 態態 與與 染染 色色 生生 化化 反反 應應 確確 定定 鑒鑒 定定 LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢 測 （三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌） v標本采集及送檢：標本采集及送檢：急性期、用藥前采