1、 1. Pim-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制 2. 以以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的為靶向治療分子的新型有效的 抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā) 1. Pim-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制 p34 p34 p34 p37 p40 Kinase Domain Pim-1 Pim-2 Pim-3 Deneen B. et al. Mol Cell Biol 2003;23:3897 Mikkers H. et al. Mol Cell Biol 2004;24:6104 Pim-3 與惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)與惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)PimPim基因敲出的小鼠生基因敲出的小鼠生 命

2、力旺盛且可繁殖后代命力旺盛且可繁殖后代 Pim-3Pim-3是原癌基因。是原癌基因。 Pim-3 is a proto-oncogene with serine/threonine kinase activity. Fujii C et al. Int J Cancer. 2005 Mar 20;114(2):209-18. Pim-3激酶是否與肝臟以外的其它臟器腫瘤發(fā)生有關(guān)？ 我們聚焦在同是內(nèi)胚層來(lái)源的器官，胰腺。 Normal Tissue Cancer Tissues PCI55 PCI35 -Pim-3 Actin 36 43 kDa WCL Pim-3 shRNA Non Scram

3、ble Pim-3 PCI55 Scramble shRNAPim-3 shRNA DNA Content No shRNA SubG1 Annexin V Pim-3 shRNA Scramble shRNA Pim-3 shRNA Scramble shRNA No-shRNA Scramble shRNA Pim3 shRNA 0 1 2 3 4 5 8 7 6 5 4 3 2 1 0 Cell viability ratio Time after passage (days) * * * * Pim-1, Pim-2 Pim-3 ? Bad Ser136 Survival Factor

4、 PI3K AKT Bad 14-3-3 Survival Ser112 Pim-1 and Pim-2 Can Inactiavte Pro- apoptotic Molecule, Bad, by Phosphorylating Its Serine Residues Apoptosis Bad Bcl-XL + Bcl-XL Pim-3BadPim-3/Bad PCI55 20m20mm a a-Pim3 HeLa a a-Bad a a-IgG IP: PCI35 PCI55 PCI55 25 26 kDa Bad IgG Blot: anti-Pim3 Blot: anti-Bad

5、50 36 Pim-3 IgG Immunoprecipitation with anti-Pim-3 Western blotting with anti-Bad Washing with Stripping buffer Western blotting with anti-Pim-3 Pim-3pBad112Pim-3/pBad112 PCI35 PCI55 20m20mm Actin Bad pBad112 pBad136 pBad155 Pim-3 26 26 26 26 43 KDa 36 shRNA Non Scramble Pim-3 PCI55 小結(jié)（1） 2. 以Pim-3

6、為靶向治療分子的新型有效 的抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā) 胰腺癌是我國(guó)十大惡性腫瘤之一胰腺癌是我國(guó)十大惡性腫瘤之一 早期診斷困難早期診斷困難 晚期患者手術(shù)治療晚期患者手術(shù)治療5年生存率低于年生存率低于5%，發(fā)病率等于死亡率，發(fā)病率等于死亡率 傳統(tǒng)的化學(xué)治療存在抗腫瘤能力低，殺傷指數(shù)過(guò)小，副作用大等缺點(diǎn)傳統(tǒng)的化學(xué)治療存在抗腫瘤能力低，殺傷指數(shù)過(guò)小，副作用大等缺點(diǎn) 分子靶向治療具有特異性強(qiáng)，效果顯著，正常組織損傷小等優(yōu)點(diǎn)分子靶向治療具有特異性強(qiáng)，效果顯著，正常組織損傷小等優(yōu)點(diǎn) 現(xiàn)有的抑制增殖因子受體活性的分子靶向治療缺乏腫瘤治療的特異性，而且容現(xiàn)有的抑制增殖因子受體活性的分子靶向治療缺乏腫瘤治療的特異性，而且容

7、 易產(chǎn)生耐藥性易產(chǎn)生耐藥性 Pim-3與與Pim-1具有高度的同源性（具有高度的同源性（70%）和類(lèi)似的生物功能）和類(lèi)似的生物功能 推測(cè)推測(cè)Pim-3的立體空間結(jié)構(gòu)的立體空間結(jié)構(gòu) 低分子化合物低分子化合物-Pim-3激酶復(fù)合物立體空間結(jié)構(gòu)激酶復(fù)合物立體空間結(jié)構(gòu) 從從DrugBank和和PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選了數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選了23種類(lèi)似低分子化合物種類(lèi)似低分子化合物 選擇并合成了對(duì)選擇并合成了對(duì)Pim-3有高親和性的小分子化合物有高親和性的小分子化合物-蔓生百部蔓生百部 堿（堿（stemonamide）合成中間體）合成中間體 Pim-3 Pim-1 Pim-2 IC50 (m mmol/L)

8、Pim-3 Pim-1 Pim-2 AKT-1 AKT-2 T2 T5 T10 AKT1/2 78 92 2000 nd 90 56 2000 nd 33 50 2000 nd 1934 2000 2000 2000 31.58 72.47 345 462 Times after treatment with inhibitor (days) Cell proliferation ratio Cell line name T-2T-5 L3.6pl6.626.1 MiaPaca-2 5.922.9 IC50 (m mmol/L) Relative OD450 MiaPaca-2 -DMSO T

9、-2 +12 h +48 h +24 h pBad112 Bad Bcl-XL Cytochrome C Cleaved-caspase-3 L3.6pl Actin pBad136 Caspase-3 Cdc25A PIM-3 pBad155 5X105 L3.6pl Subcutaneous injection 36 15days Sacrify : Intraperitoneal injection 15 16 17 18 1929 30 31 32 3322 23 24 25 26(days) T-2 (20mg/kg) * DMSO (N=5) T2 (N=5) 20 DMSOT2

10、0 5 10 15 ALT (U/l) NS Na (mEq/l) 144 148 152 DMSOT2 156 160 NS 0 2 4 6 8 DMSOT2 K(mEq/l) 10 NS DMSOT2 Cl (mEq/l) 0 108 112 116 120 NS DMSO T2 (n=5) (n=6) Hematological parameters 9.30.07 8.080.33 49.883.06 46.721.90 30.043.84 9.91.70 84.21.90 81.171.10 00 0.170.07 00 00 13.401.83 16.671.00 2.400.46

11、 2.000.15 RBC Platelets WBC Neutrophil Eosinophils Basophil Lymphocytes Monocytes 106/ml 104/ml 103/ml % % % % % BALB/C裸鼠全血中白細(xì)胞正常值裸鼠全血中白細(xì)胞正常值 3.841.64 103/m ml 小結(jié)（2） 線粒體線粒體 謝謝！謝謝！ 1. Pim-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制 Normal Tissue Cancer Tissues PCI55 PCI35 -Pim-3 IC50 (m mmol/L) Pim-3 Pim-1 Pim-2 AKT-1 AKT-2 T2 T5 T10 AKT1/2 78 92 2000 nd 90 56 2000 nd 33 50 2000 nd 1934 2000 2000 2000 31.58 72.47 345 462 Cell line name T-2T-5 L3.6pl6.626.