1、DOC格式論文，方便您的復制修改刪減環孢霉素A在兔眼濾過術中抗增殖作用的實驗研究(作者：單位：郵編：)【摘要】目的研究環孢霉素A(CsA)在青光眼濾過手術中 的抗增殖作用。方法 將20只中國白兔40只眼隨機分成2組，一組 為環孢霉素組，另一組為生理鹽水對照組，2組均行小梁切除術，術中分別在結膜瓣下放置2 %環孢霉素A、生理鹽水棉片5min，在術后 第1、7、14、30天觀察眼壓、濾過泡、角膜、眼底，并行光鏡、電 鏡及增殖細胞核抗原(PCNA)檢查。結果環孢霉素A組眼壓控制多較 理想，與對照組間的差異有統計學意義(P V 0.05),大多數形成功能性 濾過泡，光鏡下見極少量纖維組織增生，電鏡下見

2、纖維細胞線粒體少， 染色質功能不活躍，增殖細胞陽性率低，與對照組差異有統計學意義 (P V 0.05)，且沒有淺前房、視網膜損害等嚴重并發癥。結論環孢霉素A在兔眼濾過手術中抗增殖作用好，安全性高。【關鍵詞】 環孢霉素A濾過手術眼兔Abstract: Objective To study the antiproliferative effects ofcyclosporine A in filtering operation. Methods 20 Chinese white rabbits,40 eyes, ran domly were devided into 2 groups, cyclo

3、spori ne A group and no rmal sodium group, and un derwe nt trabeculectomy. During the operation, 2 % CsA and NS were placed under conjuctival flap for 5 minutes, and then 100mL balaneed salt solution was used to flush the area. At 1st, 7th,14th,and 30th day after surgery, filtering blebs, intraocula

4、r pressure, cornea and ocular fundus were observed.The operative area was examined with light microscope, electronic microscope, and the proliferating cell nuclear antigen(PCNA)was detected. Results In CsA group, intraocular pressure was significantly lower than that in NS group(P v 0.05), and more

5、functional filtering blebs were observed. Less fibroplasia and proliferative cells, less bioblast and less active caryotin in fibrocyte were found in CsA group than that in NS group. No serious mcomplicaton was found in both group. Conclusion CsA is safe and has a better antiproliferative effect in

6、filtering operation.Key words : cyclosporin A; filtering operation; eye; rabbit 青光眼濾過手術是治療青光眼的主要手術方法，但由于術后纖 維組織增生，常造成濾過通道阻塞，房水引流不暢，導致手術失敗。 環孢霉素A(cyclosporine A，CsA)是一種強效免疫抑制劑，廣泛應用 于器官移植及免疫相關性疾病的治療。最近研究表明，CsA對多種細胞的生長有抑制作用，本研究將CsA用于青光眼濾過術中，旨在觀察其抑制纖維組織增生的效果及安全性。1材料和方法1.1實驗動物和分組選用健康中國白兔20只（寧夏醫學院實驗動物中心提供

7、），體重 2.53.0kg，月齡56個月，雌雄兼有，無眼病。隨機分成兩組， CsA組和生理鹽水對照組，每組 20只眼。1.2主要材料山地明注射液（環孢霉素 A），Novartis Pharma AG Switzerland 生產；絲裂霉素C，浙江海正藥業股份有限公司生產；小鼠單克隆抗 增殖細胞核抗原、生物素化山羊抗小鼠IgG抗體、鏈霉素-生物素D- 過氧化物酶復合物（SABC復合物）、二氨基聯苯胺（DAB）均為武漢博 士德生物有限公司生產。日產 HITACHI H-600透射電鏡。1.3方法用3%戊巴比妥鈉，按1mL/kg耳緣靜脈注射麻醉，術前10min 雙眼各滴0.4%鹽酸奧布卡因表面麻醉3

8、次。以角鞏緣為基底做8mm X5mm結膜瓣，雙眼分別用浸 2% CsA、生理鹽水的海綿片（4mm X 3mm X2mm）置于鞏膜面上5min，用20mL生理鹽水沖洗，制作4mm X4mm板層鞏膜瓣，切除1mm X3mm小梁組織，根切虹膜，10-0尼 龍線縫合鞏膜瓣2針，分層縫合Tenons囊和球結膜瓣致密閉。術后 雙眼滴用0.1 %滴塞米松眼液、0.25 %氯霉素眼液，每天4次，共1 周。術后每天觀察濾過泡、結膜、角膜、前房情況，術后1周、2周、 1個月測眼壓、觀察眼底，在術后1周、2周、1個月分別用空氣栓 塞法處死動物5、5、10只，立刻取濾過泡及其附近組織，一分為二， 一半用10%中性甲醛

9、固定，石蠟包埋，制作病理切片，分別予 HE 染色、增殖細胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen ，PCNA)染 色，并行光鏡檢測；另一半用2.5 %的戊二醛固定，行電鏡觀察。1.4統計學方法采用SPSS 10.0統計軟件，應用卡方檢驗、t檢驗和秩和檢驗 對實驗數據進行統計學處理。2結果2.1各組白兔術前、術后眼壓(表1)表1實驗組與對照組眼壓 比較(略)經t檢驗，各組白兔術前、術后第1天眼壓差異無統計學意義 (P 0.05);術后第7、14、30天CsA組眼壓較對照組下降明顯，差 異均有統計學意義(P V 0.05)。2.2各組白兔術后濾過泡形態(表2)

10、表2實驗組與對照組濾過 泡形態比較(略)濾過泡依照Krofeld分型法分為4型：I型微小囊泡型、II型扁平 彌散型、皿型瘢痕型、W型包囊型。I、I型為功能濾過泡，皿、W型 為非功能濾過泡；雖然經x2檢驗兩組間差異無統計學意義(P 0.05)， 但是實驗組在各個時期功能性濾過泡比例明顯增高，且泡壁薄，血管少。術后1周生理鹽水組見較多淋巴細胞、單核細胞、漿細胞浸潤，大 量新生毛細血管；CsA組炎性細胞和毛細血管均較少。術后 2周， 生理鹽水組炎癥細胞和毛細血管漸減少，出現成纖維細胞和少量增生 纖維組織；CsA組炎性細胞更少，偶見成纖維細胞。術后第 30天， 生理鹽水組見大量致密纖維組織，CsA組僅

11、見少量稀疏纖維組織。2.4術后不同時期濾過區組織電鏡檢查結果生理鹽水組術后7d，見多量圓形核細胞，胞質空化，內質網腫脹， 少量成纖維細胞；術后14d，見多量成纖維細胞，胞核增大，核仁染 色深，核膜突起多，內質網腫脹明顯，胞漿受壓，質少，間質內膠原 量多，紊亂；術后30d，見大量成纖維細胞，核染色變淺，核膜突起 減少，內質網腫脹減輕，胞漿增多，空化少，間質纖維致密。CsA組：術后7d見少量炎性細胞，細胞漿內空泡，內質網腫脹；術后14d， 少量成纖維細胞，核仁染色略深，核膜突起少，內質網輕度腫脹；術 后30d，成纖維細胞略增多，核仁規則，間質少量膠原纖維，排列整 齊（圖24,見封4）。2.5成纖維

12、細胞PCNA檢測結果（圖5、6,見封4）PCNA陽性結果為細胞核界限清楚呈棕黃染色的成纖維細胞。正常結膜下、鞏膜上組織無纖維組織增生，濾過術后，PCNA陽性細胞明 顯增加，各組分別在結膜下、鞏膜上部位隨機選取5個高倍鏡視野，計算PCNA陽性細胞的數目。術后第 7天，兩組間均偶見增生的 PCNA陽性細胞，無明顯差異；術后第 14、30天，CsA組PCNA 陽性細胞數少，經秩和檢驗，兩組差異明顯（P V 0.05）。三個時間點秩和檢 驗結果 分別為 U=6.500,P=0.166;U=11.000,P=0.003；U=1.000,P=0.016。2.6并發癥CsA組有3例出現角膜上皮點狀剝脫，自行

13、愈合，未見淺前房及視 網膜損害；生理鹽水組有1例上皮點狀損害，自愈。3討論小梁切除術是治療青光眼的主要手術方法， 術后濾過口開放、濾過 道通暢，是房水外流、手術成功的保證1。但由于手術后成纖維細 胞的增殖和移行，阻塞濾過通道，常造成手術失敗。PCNA，又稱周期素，是一種僅在增殖周期中合成和表達的核內多肽鏈，可以作為評價細胞增殖狀態的指標之一。CsA是一種新型免疫抑制劑，廣泛用于 器官移植及免疫有關的疾病，近年來研究發現CsA還具有抗增殖作用，在適當濃度能有效抑制血管內皮細胞、成纖維細胞、表皮角質細 胞、結膜成纖維細胞、晶狀體上皮細胞的增殖2-3 關于CsA抗 增殖作用的確切機制尚未完全闡明，可

14、能通過以下途徑作用于瘢痕形 成的各個環節4:通過與其受體（CPH）結合，通過靶物質與相應的轉 錄基因控制蛋白發揮抗增殖作用； 通過抗炎、抑制細胞表達白細胞介 素、腫瘤壞死因子、堿性成纖維細胞生長因子的產生來抑制成纖維細 胞的活化；通過抑制血管形成或使血管產生痙攣造成局部缺血；抑制細胞分泌膠原；誘導成纖維細胞凋亡；通過抑制免疫反應抑制成纖維 細胞持續產生瘢痕組織5;在肉芽組織早期抑制金屬蛋白酶 2，9 活性而抑制傷口愈合6。關于CsA在眼部應用的安全性，已有很 多報道：CsA是親脂性化合物，滴眼劑能迅速透過角膜上皮，但眼內 通透性差7，房水中濃度很低8，所以對角膜內皮作用不大，不 易引起角膜內皮

15、毒性，造成角膜水腫、混濁及視網膜損傷。Akyol等 研究發現9, CsA對睫狀上皮的改變輕微。本實驗通過在術中一 次性使用2 % CsA，能有效抑制纖維組織增生，減少瘢痕形成，保持 濾過道通暢，形成功能性濾過泡，使手術獲得成功。而且在術中一次 性、短時間用藥，再加用生理鹽水徹底沖洗，故局部并發癥很少，僅 3眼有角膜上皮點狀缺損，并自行消退，未見濾過泡漏、角膜混濁、 低眼壓、晶狀體混濁及視網膜損傷等嚴重并發癥。因此我們認為： CsA能有效抑制成纖維細胞的增殖，保證濾過道通暢，合理控制眼壓, 且比較安全，是較理想的輔助抗青光眼的藥物。【參考文獻】:1李斌濾過漏口的功能狀態與手術療效的關系J 眼外傷

16、職業眼病雜志，1997，19(5) : 344-346.2 Shimabukuro M ，Iwassaki N，Nagae Y ，et al.Ligeouscounjunctivitis，A case report J Jpn J Ophthalmol ，2001，45(4):375-377.3 Cortina P,Gomez-Lechon MJ,Navea A,Menezo JL,Terencio MC ， et al.Diclofenac sodium and cyclosporine a inhibit human lens epithelial cell proliferation i

17、n culture J . Graefe Arch Clin Erp Ophthalmol ， 1997，235 : 180-185.4 王繼兵，魏厚仁.環孢霉素A抗增殖作用的研究J .國外醫學眼科學分冊，1999 , 23 : 93-97.5 Cha ng L , Crowsto n JG , Cordeiro MF , et al.The role of the immune system in conjunctival wound healing after glaucoma surgery J . Sure Ophthalmol , 2000, 45(1) : 49-68.6 Silv

18、a HCCR , Coletta RD , Jorge J , et al.The effectof cyclospori ne A on the activity of matrix metalloprote in ases duri ng the healing of rat molar extraction wounds J . Arch Oral Boil ,2001 , 46 : 875-879.7 Tuarcli E , Gunduz K , Aktan , et al.A comparative clinical trail of mitomycin C and cyclosporine A in trabeculectomy:J . Eur J Ophthalmol , 1996 , 27(6) : 398-401.8 Perry HD , Donnenfeld ED , Kanellopaclos AJ , et al.Topical cyclosporine A in the management of po