第一章、基因工程藥物概述,提綱,發展歷史應用現狀今后研發方向,第一節、基因工程藥物發展歷史,主要參考資料：湯仲明.生物技術藥物（第1版）.北京：化學工業出版社，2008.,基因工程藥物發展歷史,1953年，Watson和Crick揭示了DNA雙螺旋結構1966年，遺傳密碼被破譯1970年，發現了限制性內切酶1973年，Cohen和Boyer用限制性內切酶第一次完成了DNA的切割與連接1977年，Genentech公司在大腸桿菌表達第一個人蛋白生長抑素，隨后又成功表達了rhGH。1978年，Genentech公司基因重組人胰島素在大腸桿菌中成功表達1979年，FDA批準了第一個基因重組藥物-人胰島素Humulin上市（Genentech公司）,基因工程藥物發展歷史（續-1）,1982年，第一個用酵母表達的基因重組胰島素-Novolin上市1983年，PCR技術出現1984年，嵌合抗體技術創立1986年，人源化抗體技術創立1986年，第一個重組抗腫瘤藥物-IFN上市1987年，第一個用動物細胞（中國倉鼠卵巢細胞CHO）表達的基因工程產品t-PA（組織型纖溶酶原激活物）上市1988年，第一個基因重組疫苗上市（乙肝疫苗，Recombivax-HB）,基因工程及制藥發展歷史（續-2）,1990年，噬菌體展示人源抗體制備技術創立1994年，第一個基因重組嵌合抗體ReoPro上市1997年，FDA批準第一個腫瘤治療性抗體Rituxan上市（IDEC和Genentech公司）（CHO表達，抗CD20）2002年，EMEA批準第一個治療性人源抗體Humira上市（Abbott公司，抗TNF-抗體，治療類風濕關節炎）2004年，中國批準了第一個基因治療藥物P53腺病毒注射液2006年，FDA批準第一個基因重組腫瘤疫苗Gardasil（佳達修，加德西）上市（用于預防HPV感染誘發的宮頸癌）2011年，FDA批準第一個抗體藥物偶聯物（ADCs）抗CD30-毒素偶聯物上市（用于霍奇金淋巴瘤的治療）,第二節、基因工程藥物的種類及應用現狀,參考文獻：美國食品藥物管理局網站：/DragsFDA：http:/www.accessdata.F/scripts/cder/drugsatfda中國國家食品藥品監督管理局（SFDA）網站胡顯文在“基因工程藥物與抗體藥物研發與質量控制關鍵技術研討會”上的報告。,一、基因工程藥物的種類,基因重組多肽及蛋白藥物核酸類重組藥物重組活載體藥物,（一）基因重組多肽及蛋白類藥物,是將具有藥物活性的多肽及蛋白的編碼基因與載體DNA重組后轉入受體細胞表達并分離純化生產的藥物。,常用種類：蛋白多肽類激素、細胞因子、抗體、酶、可溶性受體、亞單位疫苗、血漿蛋白等,細胞因子（cytokine，ck）,由機體多種細胞分泌的具有調控細胞生長分化、調節免疫功能等生理活性并參與病理反應的小分子蛋白質。,抗體,免疫系統在抗原刺激下，由B淋巴細胞增殖分化為漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合、具有免疫功能的蛋白質。組成主要為球蛋白，也稱為免疫球蛋白（Immunoglubulin，Ig）。,可溶性受體（soloblereceiptors）,為膜表面受體的胞外部分，由于呈游離可溶狀態，被稱為可溶性受體。,外源治療性可溶性受體可與相應的膜受體競爭配體而起到抑制作用，借此發揮治療作用。,亞單位疫苗,用病原體上能夠誘發保護性反應的蛋白（而非完整病原體）生產的疫苗。,傳統疫苗：完整病原體制備的滅活疫苗（死疫苗）、減毒活疫苗（弱毒疫苗）和細菌外毒素經一定濃度甲醛處理后生產的類毒素（toxiod)疫苗。,（二）核酸類重組藥物,利用重組核酸進行疾病防治的藥物。,DNA疫苗（DNAvaccine）：是把編碼病原體保護性抗原的基因連接到真核表達載體上，用重組載體制成的疫苗。又稱為基因疫苗（geneticvaccine）、核酸疫苗（nucleicacidimmunizaiton）等。,（三）重組活載體疫苗,將編碼病原體有效抗原的基因插入無致病性的活病毒（如痘病毒皰疹病毒、腺病毒等)或細菌（沙門氏菌、結核桿菌)基因組，利用重組病毒或重組細菌制成的疫苗。也稱為重組活疫苗。,二、重組激素類藥物應用現狀,（一）FDA激素類上市產品胰島素及各種突變體：治療糖尿病甲狀旁腺激素：調節鈣磷代謝，治療絕經期婦女的骨質疏松人生長激素：治療生長激素缺乏性矮小癥胰高血糖素：治療胰島素使用過量的低血糖癥人絨毛膜促性腺激素（HCG）：促進女性排卵，治療不育癥促卵泡激素（FSH）：促進卵泡發育和排卵，治療不育癥促黃體素（LH）：治療嚴重缺乏LH和FSH的不育癥患者。鮭魚降鈣素：預防骨質疏松癥及骨折、Paget疾病、惡性高鈣血癥。,治療疾病：糖尿病、不育癥、矮小癥、骨質疏松,胰島細胞破壞與糖尿病,我國CFDA2013年9月登記的重組激素類藥物,國產：胰島素及各種突變體、人生長激素（rhGF）。進口：瑞士、蛋白、韓國產生長激素；瑞士產人促黃體激素；瑞士和荷蘭產人促卵泡激素；意大利產人絨毛膜促性腺激素。,治療疾病：糖尿病、矮小癥、不育癥,三、重組細胞因子類藥物應用現狀,（一）細胞因子分類白細胞介素（interleukin，IL）干擾素（interferon，IFN）腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor，TNF）集落刺激因子（colonystimulatingfactor，CSF）生長因子（growthfactor，GF）趨化性細胞因子（chemokine）,1、白細胞介素,定義：由白細胞產生并主要介導白細胞間相互作用的細胞因子命名為白細胞介素（interleukin，IL）。已發現33種，IL-1IL-33。,功能：刺激免疫細胞增殖、免疫調節（抑制或增強）、促進炎癥等作用。,2、干擾素,定義：具有干擾病毒感染和復制的低分子可溶性糖蛋白。,分類：根據穩定性（耐熱耐酸性）、天然來源細胞、氨基酸組成和序列差異，分為不同的型（型和型）、類（、）、亞類（125、14、14）及次亞類（如2a2c）。,生物活性：不同種類IFN生物活性相似，具有抗病毒和免疫調節活性（干擾病毒復制、增強細胞免疫、抑制體液免疫）。型（主要為和類）穩定性較好。,.,干擾素的免疫調節作用,3、腫瘤壞死因子,定義：一種能使腫瘤組織發生出血壞死的細胞因子。,分類：TNF-和TNF-,功能：抗腫瘤作用（引起腫瘤細胞凋亡、腫瘤組織壞死）、免疫調節作用、炎癥介質。,TNF的功能,4、集落刺激因子,定義：能夠刺激造血干細胞和不同發育分化階段的造血祖細胞增殖分化、在半固體培養基上形成相應細胞集落的細胞因子。又稱為造血刺激因子或造血調節因子。,集落刺激因子分類,粒細胞集落刺激因子（granulocyteCSF，G-CSF）粒細胞、巨噬細胞集落刺激因子（granulocytemacrophageCSF，GM-CSF）巨噬細胞集落刺激因子（macrophageCSF，M-CSF）干細胞因子（stemcellfactor，SCF）紅細胞生成素（erythropoietin，EPO血小板生成素（thrombopoietin，TPO）,5、生長因子,定義：具有刺激細胞生長作用的細胞因子。,種類：表皮生長因子（epidermalgrowthfactor，EGF）；成纖維細胞生長因子（fibroblastgrowthfactor，FGF）；血管內皮細胞生長因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）；神經生長因子（nervegrowthfactor，NGF）；血小板衍生的生長因子（plateletderivedgrowthfactor，PDGF）；肝細胞生長因子（hepaticgrowthfactor，HGF）,6、趨化性細胞因子,定義：對多種白細胞（單核細胞、嗜中性粒細胞、淋巴細胞）具有趨化作用和激活活性的小分子蛋白質。,趨化作用（chemotaxis）：是指化學刺激物（趨化因子）刺激細胞沿濃度上升梯度向著化學刺激物定向移動的作用（移動的速度為每min520m）,（二）美國FDA上市的CK產品及適應癥,IL-2：腫瘤。IL-11：血小板減少癥。各種類型干擾素（IFN）：治療腫瘤、炎癥、自身免疫性疾病。EPO：腎性貧血。TPO：血小板減少性紫癜。rhG-CSF：白細胞減少癥,IL-2：T細胞生長因子，刺激T細胞增殖。IL-11：血小板刺激因子，促進血小板產生。,美國FDA上市的CK產品及適應癥（續）,血小板源性生長因子（PDGF）：促進創傷愈合，治療糖尿病足潰瘍。骨成型蛋白2（BMP-2）：促進骨質形成，治療脊骨退行性融合。角化細胞生長因子-1（KGF-1）：促進上皮細胞移行及再生，用于治療化療引起的重度口腔黏膜炎。胰島素樣生長因子-1（IGF-1）：兒童IGF缺乏性生長不良,（三）我國CFDA2013年9月登記的國產重組細胞因子類藥物,IL-2相關產品IL-11相關產品各種類型IFNTNF：注射用重組改構人腫瘤壞死因子（天恩福）EPOTPOrhG-CSFrhGM-CSFrEGF（重組表皮生長因子）及rFGF（重組成纖維細胞生長因子）：創傷、燒傷、眼科疾病等。,（四）我國CFDA2013年9月登記的進口重組細胞因子類藥物,rhIFN2a注射液：羅蕘愫，Roferon-A：瑞士。PEG化rhIFN-2a注射液：派羅欣，Pegasys，瑞士。PEG化rhIFN-2b注射劑：佩樂能，Peg-Intron，新加坡。rhIFN-1b：倍泰龍，Betaferon，美國rhIFN-1a注射液：利比，Rebif，意大利。rhEPO注射液：利血寶，ESPO，日本；阿司伯根，Espogen，韓國；羅可曼，Recormon，瑞士。rhG-CSF：惠爾血，GRAN，日本；格拉諾賽特，Granocyte，日本。,四、重組抗體類型及應用現狀,（一）抗體基本結構：按同一方向排列的4條肽鏈（兩條相同的長鏈稱之為重鏈，兩條相同的短鏈稱為輕鏈）經二硫鍵連接組成的形態呈“Y”的單體。（二）分類：5類，IgG、IgM、IgA、IgD、IgE。其中在血液中含量最高、功能最全的為IgG。,（三）IgG的功能區及功能,1、抗原結合位點：位于N段可變區。2、補體結合位點：位于IgG分子Fc段的CH2，可與補體結合。3、Fc受體結合位點：位于IgG分子Fc段的CH3，可與IgG的FcR結合。4、母體胎盤結合位點：位于IgG分子Fc段的CH2，可與母體胎盤滋養層細胞上的受體結合，介導IgG從母體一側穿過胎盤到達胎兒。,.,IgG尚有母體胎盤結合位點；IgA有,IgG類抗體的功能,1、識別和結合抗原產生中和、封閉等作用。2、活化補體，產生溶菌、溶細胞作用及補體的調理作用。3、結合Fc受體（IgG和IgE），介導抗體的調理作用（IgG）、ADCC作用（IgG）等。4、通過胎盤（IgG）：參與胎兒及初生兒被動免疫,.,抗體的中和作用和封閉作用,中和作用：抗體與病原微生物和毒素等有害抗原物質結合，阻止其與細胞受體結合而保護細胞免受危害的作用。具有中和作用的抗體稱為中和抗體。封閉作用：抗體與功能細胞表面抗原或可溶性抗原結合阻止其發揮效應的作用。這類抗體被稱為封閉抗體。,CVB3：柯薩奇B3病毒,中和抗體結合位點,兩個思考題：1、能與病原表面抗原結合的抗體是否都是中和抗體？2、用來制備中和抗體的抗原應具備什么基本條件？,抗體的調理作用（opsonization）,由抗體的Fc段及吞噬細胞表面的相應受體結合介導的促進吞噬細胞吞噬細菌等顆粒性抗原作用。,一些細菌的莢膜具有抗吞噬作用,.,抗體的ADCC作用,ADCC即antibodydependentcell-mediatedcytotoxicity的縮寫，中文含義是：抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用。指表達Fc受體的細胞毒性效應細胞通過識別抗體Fc段殺傷被抗體包被的靶細胞的作用。,.,M：巨噬細胞（macrophage）；Mo：單核細胞（monocytes）；Eo：嗜酸性粒細胞（eosinophilicgranulocytes，Eo）；PMN：中性粒細胞（polymorphonuclearneutrophil，PMN）；NK：自然殺傷細胞。,（四）重組抗體意義及抗體免疫原性的主要來源,重組抗體的意義：減少單克隆抗體的鼠源部分，降低其免疫原性；減小抗體分子量，提高其作為導向抗體的靶向滲透性。,抗體免疫原性的主要來源：抗體分子恒定區,（五）重組抗體的主要類型,完整抗體：人鼠嵌合抗體；人源化抗體（改型抗體）、人源抗體抗體片段：Fab抗體（Fab片斷）；Fv抗體；ScFv抗體（單鏈抗體可變區片段，SingleChainAntibodyVariableRegionFragments，ScFv），簡稱單鏈抗體。抗體融合蛋白,.,人,.,人鼠嵌合抗體（Chimericantibodies）,用人的恒定區基因片段代替鼠的恒定區基因，所得到的抗體同時含有人和鼠抗體的部分，稱為人鼠嵌合抗體。,人,.,人源化抗體（HumanizedAntibodies),用鼠單克隆抗體的CDR替換人抗體的CDR所產生的抗體。其編碼基因大約包含95的人DNA和5的鼠DNA。,人源化抗體也稱為改型抗體（reshapedantibody）免疫原性更低,complimentaritydeterminingregions，互補決定區。是Ig分子上與抗原表位互補結合的區域。也是可變區中氨基酸組成和排列順序在不同Ig分子中變化更大的區域，又稱為高變區（hypervariableregion，HVR）或超變區。,CDR,.,Fab抗體,只含抗體重鏈VH、CH1和輕鏈VL、CL的抗體。如果恒定區片段是人源性的，稱之為重組Fab。,滲透性增強，免疫原性小半衰期縮短（比全IgG1縮短10倍）用于腫瘤成像診斷準確性達95%以上,Fab段：即抗原結合片段（fragmentofantigenbinding，Fab）。,.,ScFv抗體,是由抗體輕鏈和重鏈可變區基因（VH、VL）通過一段編碼連接肽基因拼接后表達形成的單鏈重組抗體。VH連接肽VL是具有抗原結合能力的最小抗體片段。,滲透性更強，半衰期縮短（比全IgG1縮短10倍）對實體瘤顯像明顯強于傳統單克隆抗體和Fab片段缺點是抗原親和力降低。,抗體融合蛋白,抗體基因片段與其他有治療功能的蛋白基因的融合表達產物。可以增加治療藥物的靶向性。例：抗體-細胞因子融合蛋白,（六）上市的治療性抗體,重組抗體藥物是基因重組藥物的主體和生物制藥業的支柱！截止2012年底，美國FDA已批準上市40多種治療性抗體藥物，種類占上市基因重組藥物的1/3。,.,.,續上表,.,2009年1月-2013年1月FDA批準上市的治療性抗體-1,.,2009年1月-2013年1月FDA批準上市的治療性抗體-2,.,2009年1月-2013年1月FDA批準上市的治療性抗體-3,我國CFDA2013年9月登記在案的國產治療性抗體類藥物,尼妥珠單抗注射液：泰欣生，百泰生物藥業有限公司。為人源化抗人表皮生長因子受體（EGFR）單克隆抗體，用于EGFR陽性表達的/期鼻咽癌。碘131I腫瘤細胞核人鼠嵌合單克隆抗體注射液：唯美生，上海美恩生物技術有限公司。為131I標記的重組抗腫瘤細胞核人鼠嵌合單克隆抗體，用于晚期肺癌的放射免疫治療。重組抗CD25人源化單克隆抗體注射液：健尼哌，上海中信國健藥業股份有限公司。用于預防腎移植急性排斥反應的發生。為我國自主研發的創新產品。,種類有限，主要依賴進口,我國CFDA2013年9月登記在案的進口治療性抗體類藥物,托珠單抗注射液：雅美羅，Actemra，日本。為重組人源化抗IL-6抗體。AR治療。貝伐珠單抗注射液：安維汀，Avastin，瑞士。人源化抗-VEGF。雷珠單抗注射液：諾適得，Lucentis，瑞士。重組人源化抗VEGFR單克隆抗體。老年濕性黃斑變性。利妥昔單抗注射液：美羅華，MabThera，瑞士。重組鼠人嵌合抗CD20抗體。注射用英夫利西單抗：類克，Remicade，荷蘭。重組鼠人嵌合抗TNF-抗體。阿達木單抗注射液：修美樂，HUMIRA，英國。重組人源抗TNF-抗體。西妥昔單抗注射液：愛必妥，Erbitux，德國。抗EGFR人鼠嵌合單克隆抗體，抗腫瘤。注射用曲妥珠單抗：赫賽汀，Herceptin，瑞士。抗HER2人源化單抗，乳腺癌。,（七）上市抗體藥物治療靶點,CD3、CD11a、CD20、CD25、CD30、CD33、CD52IL-1R、IL1-、IL-6、IL-6R、P40（IL-12和IL-23的亞基）TNF、TNFRVEGF、VEGFR、EGFR、HER2（Humanepidermalgrowthfactorreceptor2，人表皮生長因子受體2）CTLA-4、LFA-3、C5、IgE、RANKL（ReceptorActivatorforNuclearFactor-BLigand，核因子B受體活化因子配體）、Blys（Blymphocytestimulator，B淋巴細胞刺激因子）、PA、TPO、呼吸道合胞病毒F蛋白、4-integrin（整合素）,作業：查閱上述治療靶點的生物學意義及與對應抗體所治療疾病的關系。,五、重組酶類藥物應用現狀,用于治療酶作用底物積累或酶促產物缺乏導致的疾病。,酶底物積累導致疾病的例子,戈謝病（Gauchers病）：-葡萄糖腦苷脂酶活性異常引起葡萄糖腦苷脂在組織巨噬細胞內蓄積而引發的疾病。常見癥狀：肝、脾、骨髓中出現Gauchers細胞（飽含葡萄糖腦苷脂的細胞），引發進行性肝、脾腫大、嚴重貧血和血小板減少等癥狀。囊性纖維化：是一種威脅生命的遺傳病，是由跨膜調節因子CFTR蛋白的功能障礙性纖維化引起的疾病。氣管中有含高濃度DNA的黏稠膿性分泌物，降低了肺功能并增加了感染機會。,酶促產物缺乏導致疾病的例子,纖溶酶缺乏：凝血與溶血過程失衡，血纖維蛋白凝塊堵塞血管引起的腦梗和心肌梗死等疾病。,FDA重組上市的酶類藥物,組織型纖溶酶原激活物（tPA）及其突變體：用于急性心梗溶栓DNA酶（dornasealfa）：囊性纖維化。葡糖腦苷脂酶（Imiglucerase）：Gauchers病（戈謝病，高歇病）尿酸水解酶（rasburicase）：血漿尿酸癥粘多糖-L-艾杜糖醛酸水解酶（laronidase）：粘多糖貯積病半乳糖苷酶-（Algasidasebeta）：Febry病，法布里病。葡萄糖苷酶：龐培氏病，糖元病或糖元貯積癥。心肌糖元貯積。凝血酶（rhThrombin）：外科止血。其他：,我國CFDA2013年9月登記的國產基因重組酶類藥物,注射用重組鏈激酶：斯凱通，上海凱茂生物醫藥有限公司；國大欣通，青島國大生物制藥股份有限公司。溶栓注射用重組葡激酶：依力通，成都地奧九泓制藥廠；施愛克，通化玉金藥業股份有限公司。溶栓注射用重組人尿激酶原：普佑克，上海天士力藥業有限公司；我國自行研制，擁有自主知識產權。溶栓重組人組織型纖溶酶原激酶衍生物：瑞通立，山東阿華生物藥業有限公司。溶栓,產品種類少，適應癥少（僅限于溶栓）,血栓性疾病,血栓性疾病是由于凝血與溶血過程失衡所致血纖維蛋白凝塊堵塞血管引起的疾病。凝血：血纖維蛋白原（溶解度很大）血纖維蛋白單體（溶解度很低）血纖維（血栓，溶解度更低）。溶血:纖溶酶水解纖維蛋白,溶栓藥物作用的機制,激活無活性的血漿纖溶酶原，形成有活性的纖溶酶，后者催化血栓主要基質纖維蛋白水解，使血栓溶解，血管再通。纖溶酶原（plasminogen，Plg）纖溶酶（plasmin，Plm）纖維蛋白水解血栓溶解,mucopolysaccharidoses，MPS。是一種因先天性粘多糖酶缺乏、粘多糖貯積而累及多臟器的新陳代謝異常性疾病。,粘多糖貯積癥,根據主要傷及的器官，分為肝型、心臟型、骨骼肌型等，引起肝肥大、心臟肥大、骨骼肌無力等癥狀。,為遺傳性半乳糖苷酶活性降低引起糖鞘脂在人體重要器官聚集誘發的疾病。,法布里病（Fabrydiseases）,該病主要累及腎臟及心臟。,我國CFDA2013年9月登記的進口基因重組酶類藥物,無。,問題：除了血栓性疾病，FDA用酶治療的一些代謝性疾病在我國是否發生？我國臨床對這些疾病是如何治療的？,六、可溶性受體應用現狀,我國CFDA2013年9月登記在案的國產可溶性受體上市產品：注射用重組人型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白（益賽普，上海中信國健藥業股份有限公司，2012）用于治療類風濕性關節炎、銀屑病、強直性脊柱炎。機制：TNF-水平異常增高增加了這幾種疾病的嚴重程度。,類風濕性關節炎（rheumatoidarthritis，RA）,是一種以關節滑膜病變為主的慢性、全身性的炎性自身免疫病,病因尚未完全明確。但目前認為，最終引起病理變化的主要機制是：自身變性IgG與其誘發的IgM類抗體（類風濕因子，RF）形成的復合物沉積于小關節處引起機體損傷。,強直性脊柱炎（ankylosingspondylitis，AS）,是一種以骶髂關節、椎間關節病變為主的慢性炎性疾病，臨床主要表現為腰背頸臀髖部疼痛以及關節腫痛，嚴重者可發生脊柱畸形和強直。,銀屑病（psoriasis）,是一種慢性、炎癥性皮膚病，以角質形成細胞（KC）高度增生和炎癥反應為特征。俗稱牛皮癬。,病因尚未完全明了，但眾多研究表明，免疫因素與銀屑病的發生及病理生理有密切關系。,七、基因重組亞單位疫苗應用現狀,FDA批準上市的疫苗（截止2013年1月）酵母表達乙肝疫苗(1986)。酵母表達HPV（人乳頭瘤病毒）疫苗（Gardasil）：預防宮頸癌。昆蟲細胞表達HPV雙價疫苗：Cervarix，用于預防宮頸癌。昆蟲細胞表達流感疫苗：Flublok（influenzavaccine）：預防季節性流感。,宮頸癌是全球第二大婦女常見惡性腫瘤。上世紀70年代，德國科學家哈拉爾德楚爾豪森(HaraldzurHausen)發現，感染人類乳頭瘤病毒(HPV)是誘發宮頸癌的主要病因。HPV病毒有200多型，約70%的宮頸癌病例由HPV16型和HPV18型病毒引起。,宮頸癌與HPV,中文名“加衛苗”、“佳達修”等，是FDA批準的唯一一種預防子宮頸癌的疫苗。可預防由6、11、16、18型HPV引起的宮頸癌、癌前病變或不典型增生病變以及生殖器疣。接種對象：9歲女性。,Gardasil,中文名“卉研康”，為葛蘭素史克（GSK）研發生產的二價（16、18型HPV）宮頸癌疫苗。獲FDA、歐盟、臺灣、香港等批準上市。接種對象：9歲女性。,Cervarix,重組乙肝疫苗：釀酒酵母表達，深圳康泰生物制品股份有限公司、北京天壇生物制品股份有限公司；漢遜酵母表達，華蘭生物疫苗有限公司，大連漢信生物制藥有限公司；CHO表達，北京華爾盾生物技術有限公司、成都生物制品研究所有限責任公司、華北制藥金坦生物技術股份有限公司、蘭州生物制品研究所有限責任公司。重組B亞單位/菌體霍亂疫苗（腸溶膠囊）：可唯適，上海聯合賽爾生物工程有限公司。重組戊型肝炎疫苗益可寧：大腸埃希菌表達，廈門萬泰滄海生物技術有限公司。,我國CFDA2013年9月登記在案的國產重組亞單位疫苗,可唯適,可唯適接種對象,益可寧,戊型肝炎是一種易發于青壯年和孕婦的病毒性肝炎，通過食物、糞便污染的水源、接觸和血液傳染。臨床表現和甲肝類似，主要以乏力、厭油、惡心、食欲不振，并伴有肝區疼痛，皮膚、小便發黃等癥狀為主。,接種對象：16歲的易感人群。如畜牧養殖者、餐飲業人員、學生或部隊官兵、育齡期婦女、疫區旅行者等。,流行性感冒病毒亞單位疫苗（Influenzavaccine（Sub-unit）（愛閣力保，Agrippal）：意大利，2009-09-30至2014-09-29。流感病毒亞單位疫苗（類病毒體）（PolyvalentVirosomalInfluenzaVaccine）（因福舒，InflexalV）：瑞士，2012-07-17至2017-07-16。流感病毒亞單位疫苗（Influenzavaccine,surfaceantigen,inactivated）（英伏可，Influvac）：荷蘭，2013-06-25至2018-06-24。重組乙型肝炎疫苗（釀酒酵母）（安在時，EngerixB）：比利時，2010-07-07至2015-04-06。,我國CFDA2013年9月登記在案的進口重組亞單位疫苗,八、重組血漿蛋白應用現狀,主要為各種凝血因子。用于治療血友病。,血友病為一種X性聯陰性遺傳的凝血功能障礙所致的出血性疾病。發生于男孩，總發病率1.52/萬。發病機制：某些種類的凝血酶缺乏導致凝血時間延長。血友病A：凝血因子缺乏，占血友病人總數的85%血友病B：凝血因子缺乏，占血友病人總數的15%。,FDA批準上市的重組凝血因子,凝血因子a(NovoSeven、BHK表達)：血友病A或B凝血因子(Bioclate）,哺乳動物細胞表達；Helixate,BHK表達；RecombinaterAHF,CHO表達；ReFacto，CHO表達)：血友病A凝血因子IX(BeneFix,CHO表達)：血友病B,凝血因子a：在凝血酶鏈式瀑布中不存在，但促進凝血因子和IX的活化，用于治療對因子和IX產生抑制物的A型或B型血友病人的自發性和手術后出血。,凝血因子瀑布（圖）,我國CFDA2013年9月登記在案的重組凝血因子,注射用重組人凝血因子（任捷，Xyntha）：美國，2012-08-16至2017-08-15。注射用重組人凝血因子（百因止，ADVATE）：瑞士，2012-04-28至2017-04-27。注射用重組人凝血因子IX（貝賦，BeneFIX）：西班牙，2012-07-10至2017-07-09。注射用重組人凝血因子VIIa（諾其，NovoSeven）：丹麥諾和諾德公司，2010-05-19至2015-05-18。,無國產重組產品。,九、DNA疫苗的優缺點及應用現狀,優點,免疫效應期長。可同時誘發體液免疫和細胞免疫。熱穩定性好。易于大量生產。,表達效果及免疫原性不確切。DNA整合的風險。誘導產生抗DNA抗體，并有可能誘發自身免疫性疾病。,缺點,重組DNA疫苗應用現狀,尚無上市產品。但自1997年以來，已有超過70種針對各種傳染病（如HBsAg核酸疫苗、HIV9P160核酸疫苗、SARS相關冠狀病毒S2DNA疫苗）和癌癥的DNA疫苗在臨床前和臨床研究中。,十、基因重組活載體疫苗上市產品,對人：無對動物：1、禽流感新城疫重組二聯活疫苗：2005年12月24日，農業部在北京宣布，我國已成功研制出雞痘病毒作為載體的禽流感新城疫重組二聯活疫苗，并正式批準生產。2、禽流感重組雞痘病毒載體活疫苗（H5）,第三節、基因工程藥物今后的研發方向,提綱,1、利用后基因組時代的成果尋找新的藥物靶標2、對原有重組藥物產品進行遺傳改造和化學修飾，以改善藥物性能。3、研究基因工程藥物新劑型及新的給藥途徑。,（一）后基因組時代指功能基因組時代。獲得了大量基因的功能信息。,一、后基因組時代的成果及藥物新靶標的發現,/druggable,（二）藥物靶標：指藥物在體內的作用結合靶點，包括受體、酶、離子通道、核酸等生物大分子。,（三）作為理想藥物靶點的主要條件：特異性。即與特定疾病關系密切并與其在正常細胞中的功能明顯區別.可藥性。能夠與藥物發生相互作用又能引起藥物效應的基因或其產物。,藥物靶標,分析正常組織與病理組織、藥物干預前后功能基因表達的差異，是發現藥靶的重要手段之一。,（四）利用功能基因及其產物尋找藥靶,疾病模型（人、動物、細胞）,基因轉錄及表達差異分析,藥靶鑒定,基因芯片蛋白雙向電泳聯合質譜分析生物信息學酵母雙雜交及三雜交,藥靶確證,RNA干擾技術基因過表達技術轉基因動物基因敲除動物,（一）遺傳改造包括基因突變、融合表達等改變表達蛋白的大小、組成及空間結構、糖基化修飾等，繼而影響藥物的藥效、藥代動力學及安全性。,二、重組藥物的遺傳改造及化學修飾,例1：EPO突變體Aranesp比第一代EPO半衰期延長了3倍，給藥次數從每周23次減少為1次。,例2：重組IL-1163-171位只含9個氨基酸的肽保持了完整蛋白刺激淋巴細胞增殖的功能，而去除了其導致機體發熱反應的副作用。,.,速效胰島素突變體Novolog和長效胰島素突變體Lantus的一級結構,資料來自：胡顯文在“”會議上的報告ppt,蛋白糖基化,在糖基轉移酶作用下，將糖基與蛋白質分子上的氨基酸殘基連接形成糖苷鍵的過程。蛋白質糖基化可以分為四類：1.以絲氨酸、蘇氨酸、羥賴氨酸和羥脯氨酸的羥基為連接點，形成-0-糖苷鍵型。在高爾基體進行。2.以天冬酰胺的酰胺基、賴氨酸或精氨酸的-氨基等為連接點，形成-