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文檔簡介

醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)二小鼠脾細(xì)胞的分離制備及其活力檢測 材料器材 離心機(jī) 手術(shù)剪 鑷子 平皿 10ml離心管 5ml注射器等動物 昆明小鼠 25g左右 雄性 試劑 碘伏 紅細(xì)胞裂解液 Hank s液 0 4 臺盼蘭染液 方法取小鼠一只 置于蠟盤上 頸椎脫臼處死 用碘伏消毒小鼠腹部后 打開腹腔 取出脾 去除周圍的結(jié)締組織 放入含有5mlHank s的平皿中用眼科剪將脾一端剪一小口后 將含有5mlHank s液的注射器從脾的另一端刺入脾 緩緩注入Hank s液 即可見脾細(xì)胞懸液流入平皿 注意在注射Hank s液同時(shí)不斷轉(zhuǎn)動針頭方向 直至脾變蒼白為止 用干凈吸管吸取細(xì)胞液到10ml離心管中 平衡后 離心 1500rpm10min 將離心管蓋子打開 快速棄上清液 往管底的細(xì)胞中加入1ml的紅細(xì)胞裂解液 充分混勻20秒 立即加入9ml的Hank s液 混勻 離心 1500rpm10min 棄上清 將細(xì)胞定容到1ml 吸取0 1ml的細(xì)胞懸液到干凈的試管中 加入等量的0 4 臺盼蘭染液 混勻 吸取1滴的細(xì)胞液到玻片上 加上蓋片 顯微鏡觀察 死亡細(xì)胞染成藍(lán)色

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