脂質體制備及其在醫藥中的應用一、脂質體脂質體（liposome）是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中，脂質體疏水尾部伸向空氣，攪動后形成雙層脂分子的球形脂質體，直徑251000nm不等。脂質體可用于轉基因，或制備的藥物，利用脂質體可以和細胞膜融合的特點，將藥物送入細胞內部。、生物學定義：當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時，分子的疏水尾部傾向于聚集在一起，避開水相，而親水頭部暴露在水相，形成具有雙分子層結構的的封閉囊泡，稱為脂質體。 、藥劑學定義：系指將藥物包封于類脂質雙分子層內而形成的微型泡囊體。 二、脂質體的制備一般脂質體的制備都包括以下幾個主要步驟：、脂質體原料的溶解、水合和非均質囊泡的形成；、囊泡均質化； 、脂質體囊泡分離或分散到某種介質中。脂質體制備常用的方法（含舉例）主要有下列幾種： （一）、設備強化法1超聲波分散法將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液中，然后加入磷脂、膽固醇與脂溶性藥物，共溶于有機溶劑的溶液中。攪拌蒸發除去有機溶劑，將殘液經超聲波處理，分離出脂質體，再混懸于磷酸鹽緩沖液中，制成脂質體混懸型注射劑。 例如，氨基酸脂質體的制備，取氨基酸50mg溶于pH為71的磷酸鹽緩沖液中，加入到由磷脂25mg、膽固醇42mg、磷酸二鯨蠟脂28mg，溶于55ml氯仿環己烷制成的溶液中，蒸發除去環己烷，殘液經超聲分散，分離出脂質體，重新混懸于磷酸鹽緩沖液中。該脂質體在4能貯存一個月，可供口服或注射給藥，具緩釋作用。 2冷凍干燥法 將磷脂經超聲處理，然后高度分散于緩沖鹽溶液中，并加入凍結保護劑(如甘露醇、葡萄糖、海藻酸等)，冷凍干燥后，將干燥物分散到含藥物的緩沖鹽溶液或其他水性介質中，即可形成脂質體。 例如，維生素B。脂質體的制備，取卵磷脂289分散于100mmolL磷酸鹽緩沖液(pH為7)與09氯化鈉溶液(1：1)的混合液中，超聲處理后與甘露醇混合，于真空下冷凍干燥，隨即用含l25mg維生素Bt。的上述緩沖鹽溶液進行分散，進一步超聲處理，即可得到均勻脂質體混懸液。 （二）、物理法 1薄膜分散法 將磷脂、膽固醇等類脂質及脂溶性藥物溶于環己烷(或其他有機溶劑)中，然后將環己烷溶液在玻璃瓶中旋轉蒸發，使在燒瓶內壁上形成薄膜；，將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液中，加入燒瓶中不斷攪拌，即得脂質體。 例如，氟尿嘧啶脂質體，就是用磷脂(卵磷脂或腦磷脂)和膽固醇與磷酸二鯨蠟脂，按摩爾比7：2：1或48：28：1配成氯仿溶液，真空蒸發除去氯仿，使在器壁上形成的薄膜加入等滲的緩沖液(pH為60，001molL磷酸鹽)，其中含氟尿嘧啶77 mmolL，類脂質在緩沖液中的濃度為5070mmolL，加玻璃珠數枚，攪拌2min，在25放置2h，使薄膜吸脹；再在25攪拌2h，得到脂質體，粒徑為055m。 2逆相蒸發法 將磷脂等膜材溶于有機溶劑如氯仿、乙醚中，加入待包封藥物的水溶液水溶液：有機溶劑=(1：3)(1：6)進行短時超聲，直到形成穩定的wo型乳劑，然后減壓蒸發除去有機溶劑，達到膠態后，滴加緩沖液，旋轉使器壁上的凝膠脫落，在減壓下繼續蒸發，制得水性混懸液，通過凝膠色譜法或超速離心法，除去未包入的藥物，即得大單室脂質體。 例如：超氧化物歧化酶(SOD)脂質體的制備，將卵磷脂lOOmg和膽固醇50mg溶于乙醚中，加入用4mmolL磷酸鹽緩沖溶液(PBS)配成的SOD溶液，超聲處理2min(每處理05min，間歇05min)，立即在水浴中減壓旋轉蒸發至呈現凝膠狀，旋渦振蕩使凝膠轉相，再繼續蒸發除盡乙醚，超速離心(35000rmin，30min)分離除去未包人的SOD，沉淀用水洗2次，離心，得沉淀，用10mmolL PBS稀釋即得。 3注入法 將磷脂與膽固醇等類脂質及脂溶性藥物共溶于有機溶劑中(一般多采用乙醚)，然后將此藥液經注射器緩緩注入加熱至5060(并用磁力攪拌)的磷酸鹽緩沖液(可含有水溶性藥物)中，加完后，不斷攪拌至乙醚除盡為止，即制得脂質體，其粒徑較大，不適宜靜脈注射。再將脂質體混懸液通過高壓乳勻機2次，則所得的成品，大多為單室脂質體，少數為多室脂質體，粒徑絕大多數在2m以下。 例如：亞油酸脂質體，取磷酸鹽緩沖液100ml，在磁力攪拌器上攪拌加熱至約60；再稱取1g精制大豆磷脂、1g膽固醇、1g亞油酸及2g油酸山梨坦溶于30ml乙醚中，然后滴注于上述60緩沖鹽溶液中，繼續攪拌，加適量緩沖鹽溶液至100ml即得。 隨著對脂質體表面活性劑的研究和新型表面活性劑的開發，脂質體的制備方法還會改進，相信將有更為簡單有效的制備方法出現。三、脂質體在醫藥中的應用（一）、作為抗腫瘤藥物的載體1、脂質體用作化療藥物載體的特點脂質體劑型可以在某種程度上提高化療藥物的靶向性，并大幅度地降低化療藥物的毒副作用，從幾種途徑提高化療藥物的治療指數。與目前其它的抗癌藥物劑型相比較，脂質體具有獨特的優點，脂質體用于抗癌化療的最主要優點是降低毒性而繼續保持細胞毒作用。將細胞生長抑制劑如阿霉素或柔紅霉素包在脂質體中可明顯地降低心臟毒性和皮膚毒性，實驗動物的存活率比游離藥物對照組高。阿霉素及柔紅霉素脂質體的這種優點在許多脂質體制劑中都觀察到，而與它們所用的脂質組成無關。但是改變脂質組成如增加膽固醇量或使用高相變溫度的磷脂有助于包裹藥物的脂質體在血液中保持完整性。2、化療藥物脂質體的現狀迄今為止，國內外報道的已經包封成脂質體的各種抗癌藥物很多，如阿霉素、放線菌素D、卡氮芥、順鉑、爭光霉素、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、氮芥、三尖杉酯堿等。Hunt等以成膜法制備了阿糖胞苷的多室脂質體，又通過超聲得到小單層脂質體，并研究了阿糖胞苷在不同類型脂質體中的包封率和通透性。臨床研究揭示，阿霉素脂質體對轉移性乳房腫瘤有明顯的活性而無明顯的心臟毒性。而且可將阿霉素脂質體用于原來使用游離藥物時由于毒性太大而被限制使用的其它癌癥。（二）、作為抗網狀內皮系統疾病藥物的載體脂質體作為網狀內皮系統疾病治療藥物的載體是其最成功的應用之一。由于脂質體的天然靶向性，使網狀內皮系統的器官和細胞成為包封藥物脂質體的靶向區，定向地將治療藥物有效地運送到網狀內皮系統患病細胞中釋放藥物。1、抗寄生蟲病 有些寄生蟲病，如利什曼病和瘧疾是某種寄生蟲侵入網狀內皮細胞引起病變。過去治療這些疾病需使用毒性很大的藥物殺死寄生蟲，同時這些藥物對人的毒性也很大。例如治療利什曼病的含五價銻的藥物的中毒劑量和治療有效劑量相當接近，而且這些藥物又能引起心肌炎和腎炎的發生。如果將這些藥物包封成脂質體不僅能有效地殺死寄生蟲，同時也極大地降低了藥物的毒性。在動物實驗中，脂質體藥物以游離藥物11000的劑量即可治愈利什曼病，脂質體劑型的治療指數是游離藥物的3040倍。尤其是對那些使用游離藥物治療已無效的晚期患者。使用脂質體藥物治療也有效。Carl等用含銻劑脂質體治療金黃色田鼠利什曼病時，療效可增加350700倍，只用原劑量的0.15即顯效，且明顯降低了急性心肌病理性變化及中毒性腎炎等毒副作用。Alving等也介紹了制備含銻藥物和8-氨基喹啉衍生物脂質體的方法和結果。目前這兩種治療利什曼病脂質體的效果已經得到大量的臨床驗證。同樣，利用脂質體包封抗瘧藥物，如奎寧或核糖脂類藥物也可以比游離藥物更有效地抑制瘧疾發作。 2、對酶系統疾病的治療脂質體既有保護藥酶防止失活的作用，又有天然靶向性使包封的酶主要被肝攝取，所以脂質體是治療酶原貯積病藥物的最好載體。實驗已證明葡萄糖腦苷酶-葡萄糖苷酶脂質體可有效地治療溶酶體貯積病，Raman及Gergoriadis等先后曾治療數例高歇(Gancheris)病，治療后肝區疼痛減輕，病情停止惡化，據認為是酶脂質體易為網狀內皮系統所內吞而定位于酶體。脂質體也用于治療其它酶系統疾病，并取得很好效果。例如應用包封淀粉 - 葡萄糖酶的多層脂質體治療型糖原貯積病(Pompe病)，可使患者肝大明顯縮小。又如過去使用游離的葡萄糖腦苷脂酶治療溶血酶原貯積病，由于酶在體內的破壞失活和缺少靶向性，服藥后患者的臨床指標很少或沒有改變。如果將酶包封在脂質體中給患者靜脈注射，直到注射后48h仍然有效。（三）、作為解毒劑的載體 重金屬如鉛、钚等進入體內在肝等器官中累積而造成中毒，引起某些疾病。使用某些螯合物如EDTA或DTPA可以溶解金屬，治療金屬貯積病，但這些螯合物不能通過細胞膜而影響了它們的體內效果。將螯合物制成脂質體劑型，可將螯合物轉運到貯積金屬的細胞中。例如DTPA脂質體即可有效地從肝中除去钚，從腎中除去汞和促進膠體金從糞便排出。將螯合藥物去鐵敏包封在脂質體中，比游離藥物能更有效地除去肝中累積的重金屬。（四）、作為免疫激活劑用于抗腫瘤轉移和防疫 實驗證明，脂質體是將免疫調節如MAF和MDP運送到巨噬細胞并活化巨噬細胞的理想載體。同時各種脂質體包括空脂質體進入體內后，都將被巨噬細胞吞噬，使巨噬細胞的活性增強。因此空脂質體本身也是一種有效的免疫增強劑。通過對細菌、病毒、原生動物、腫瘤和其它抗原進行廣泛研究后確認脂質體是目前極少數可能用于人類的無毒性免疫激活劑之一。在免疫學試驗中，一些非腸道給藥或經腸道給藥的脂質體能夠有效地將抗原引入細胞從而保護動物抵抗疾病。脂質體與抗原的物理連結是其有效性的必要條件。此外，脂質體本身的結構，主要可能是它的類脂樣性質起到抗原貯庫的作用。脂質體的一些結構特征如大小、雙層膜流動性、表面電荷以及抗原處置于脂質體中的式樣和脂質與抗原的質量比等因素也都可影響其激活性能，但其處方組成因所用的抗原和使用的途徑而異。 （五）、作為抗菌和抗病毒藥物的載體 許多試驗證明，脂質體劑型優于游離抗菌藥，既能到達相應的細胞內部又能起到治療效果。例如目前對免疫缺陷病人(如艾滋病患者)的治療，由于分支桿菌“avinm”(MAC)復合物大部分存在單核細胞內，使用一般抗生素劑型治療無效，而脂質體為將藥物引入細胞內提供了有效的手段。美國FDA的情況調查表明，對治療艾滋病患者MAC的期臨床顯示慶大霉素脂質體不僅耐受性好且活性高。此外，用氨芐西林脂質體對抗小鼠的單核細胞增多性李斯特菌；用苯基青霉素脂質體治療小鼠金黃色葡萄球菌感染等也獲得成功。 另一個具代表性的藥物是兩性霉素B