艾滋病實驗室生物安全一、HIV的生物危害第一類、第二類病原微生物統稱為高致病性病原微生物。人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，是高致病性病原微生物。HIV相關檢測的生物安全級別HIV抗體檢測（包括篩查和確證實驗）、抗原檢測和相關的免疫學檢測應在符合級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。HIV分離培養、濃縮、中和試驗、細胞培養及研究工作及其它需要應用活病毒的研究工作，應在級生物安全實驗室（BSL-3）中進行。HIV核酸提取和檢測均應在符合級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。HIV病毒株應保存在符合級生物安全實驗室（BSL-3）要求的艾滋病實驗室；HIV陽性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、核酸提取物應保存在符合BSL-2要求的艾滋病實驗室。二、生物安全保證措施1.建立安全制度實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序（S-SOP）。意外事故處理預案，主要是生物安全意外事故。內容包括應急處理、登記和報告、調查和處理。信息安全及保密制度：與HIV/AIDS檢測相關的所有資料均應嚴格保密，包括送檢單、檢測記錄、樣品登記、報告單及工作人員年度檢測結果等，不得對無關人員透露檢測結果。培訓和管理實驗室應進行全員安全培訓并強化普遍性防護原則安全意識，所有的血液、未固定的組織和組織液樣品，均應視為有潛在的傳染性，都應以安全的方式進行操作。所有管理和檢測人員都應接受省級以上艾滋病檢測實驗室主持的安全培訓，包括上崗前培訓和復訓，并接受管理人員的監督。必須對新上崗人員進行安全教育和培訓，使他們清楚實驗室工作的潛在危險，通過考核等方式確認他們具備安全操作的能力后方可單獨工作。必須對新調入人員、外來合作、進修和學習的人員進行生物安全培訓，經實驗室主任批準后，方可進入實驗室。生物安全培訓和監督應有客觀詳實的記錄。實驗室主任應詳細了解所有工作人員的教育和培訓背景、特長、性格特點等。要根據人員特點、工作種類、所涉及的生物材料合理安排工作區域，要定期對實驗室環境進行安全檢查。2.個人保健和防護2.1遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適于工作的情況，應暫停工作。2.2皮膚的微小傷口、擦傷等，應用防水敷料嚴密覆蓋。2.3應為每一名在艾滋病實驗室工作的人員提供充足的防護服、一次性乳膠手套、口罩、帽子和覆蓋足背的工作鞋。2.4應將清潔的防護服和其他個人防護用品置于實驗室清潔區內的專用處存放。2.5實驗室應設置應急沖洗眼睛裝置。2.6工作人員上崗前必須進行HIV抗體和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒標志物檢測，應接種乙肝疫苗。應每年對工作人員采血檢測HIV抗體，血清應長期保留。2.7進實驗室工作前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套，嚴禁在實驗室內進食、飲水、吸煙和化妝。2.8實驗操作時應穿合適防護服（白大衣、隔離衣或一次性工作服）、戴手套和口罩、穿實驗室專用的工作鞋。如接觸物的傳染性大、應戴雙層手套；含有HIV的液體（樣品或病毒培養液）有可能噴濺時，應戴防護眼鏡、穿防水（如塑料）圍裙。工作完畢，先脫去手套，再脫去防護服，用肥皂和流動水洗手。穿過的污染的防護服應及時放入污物袋中，消毒后方可洗滌或廢棄。2.9操作過程中，如發現防護服被污染應立即更換，如手套破損，應立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發等。不要將手套清洗或消毒后再次使用，因為使用表面活性劑清洗可使手套對水的通透性增加，消毒劑可以引起手套的破損。2.10禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗的所有液體。3.試劑及樣品的管理應嚴格按要求妥善保存血清及其它體液樣品，應按有關規定設立專門儲存陽性血清、質控品的血清庫和/或毒種庫，應上鎖并指定專人管理。對存放試劑和有毒有害物質的區域應進行監控，冷藏柜、冰箱、培養箱和存放生物試劑、化學危險品、放射性物質的容器，置于工作人員視線之外的地點時應上鎖。4.實驗室的清潔和消毒工作完畢應對工作臺面消毒，推薦用0.10.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過程中如有樣品、檢測試劑外濺，應及時消毒。如有大量高濃度的傳染性液體濺出，在清潔之前應先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。5樣品的采集和處理抽取靜脈血液（或以其它方式收集血液樣品）時要注意安全，應使用一次性注射器，戴手套，謹慎操作，防止血液污染雙手。應小心防止被針頭和其它利器刺傷。如用濾紙采樣，應按常規將手指或耳垂局部消毒。刺破皮膚后，迅速把濾紙沾上，切勿讓血液滴落在其它物體表面造成污染。采血后待血樣干燥后再包裝送檢。離心樣品時要使用密閉的罐和密封頭，防止離心時液體溢出或在超/高速離心時形成氣溶膠。6樣品的帶入、帶出和操作不得將非實驗室物品帶入實驗室。包裝有測試樣品的包裹應在實驗室的安全柜內打開，不能在收發地點或倉庫等地點打開，同時，打開包裹的人員應接受過處理感染源方面的訓練并穿戴合適的防護服；實驗室應具有處理感染源的設備并準備好可消毒的容器。打開樣品容器時要小心，防止內容物潑濺。要核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發現溢漏應立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器進行消毒，同時要按照程序報告有關負責人。要檢查樣品的狀況，記錄有無嚴重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。如污染過重或者認為不能接受，則應將樣品用安全方式廢棄，同時將情況通知送樣人。常規處理血液、體液樣品可在工作臺上進行，如樣品有可能濺出，則應戴手套、口罩和防護眼鏡，在生物安全柜中操作。將樣品轉送到其他實驗室時，應防止對工作人員、患者或環境造成污染。護送樣品的人應清楚接收地點和接收人，實驗室負責人或其指定的人員應及時確認樣品已送達指定的實驗室，被轉入安全位置并得到妥善處理。被污染或可能污染的材料在帶出實驗室前應進行消毒。用后的包裹應進行消毒。用于國際空運的樣品要按照國際空運協會（IATA）的規則進行包裝和標記，并提交相應的資料。7使用利器注意事項7.1應盡量避免在實驗室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時應采取措施防止刺傷或劃傷，并應對用過的物品進行消毒。7.2應使用安全針具采血，如蝶形真空針，自毀性針具等，以降低直接接觸血液和刺傷的危險性。7.3應將用過的銳器直接放入耐穿、防滲漏的利器盒，用過的針頭應直接放入堅固的容器內，消毒后廢棄7.4禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用過的針頭、刀片等利器。污染物處理7.5艾滋病實驗室產生的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養物和其它物品，均應視為感染性廢棄物，應置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，經高壓消毒后再進行處理或廢棄。8.艾滋病檢測實驗室常用的消毒方法物理消毒方法高壓蒸汽消毒，121，保持1520min;干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒）140，保持23h。化學消毒方法含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯20005000mg/L）75%乙醇2%戊二醛艾滋病檢測實驗室物品常用的消毒方法廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。生物安全柜工作臺面和儀器表面：75%乙醇。溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉,也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。生物安全柜9.生物安全柜處理危險性微生物時所用的箱型空氣凈化安全裝置。I類生物安全柜至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作時柜正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態時保證工作人員不受侵害，但不保證實驗對象不受污染。類生物安全柜至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。工作時柜正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態下遵守操作規程時既保證工作人員不受侵害，又保證實驗對象不受污染。CLASSII級生物安全柜CLASSII級生物安全柜根據結構以及氣流分配不同主要是外排氣流不同分為：A型:（30%排在室內）B型:B1（70%接管道外排）；B2（100%接管道外排）；B3（30%接管道外排）CLASSIIA生物安全柜生物安全柜的使用位置操作人員。10.意外事故處理發生意外事故時，應針對事故的類型立即進行緊急處理，主要包括：皮膚針刺傷或切割傷，應立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當的消毒劑浸泡，如70%乙醇或其它皮膚消毒劑。粘膜污染：用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進行消毒處理。污染物潑濺：小范圍污染物潑濺，應立即進行消毒處理和清洗。發生大范圍污染物潑濺事故時，應立即通知實驗室主管領導和安全負責人到達事故現場，查清情況，確定消毒的程序。發生空氣污染時，可采用低溫蒸汽甲醛氣體對空氣進行消毒，但甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和實驗室的常規空氣消毒。如果發生重大潑濺事故，應采取以下措施進行：從污染處疏散人員，但要防止污染擴散；控制污染擴散，鎖門并禁止人員進入；通知實驗室主管領導、安全負責人等，查清情況，確定消毒處理的程序；必要時可進行生物安全柜和/或實驗室的低溫蒸汽甲醛氣體消毒，使用這種方法生物安全柜和/或實驗室必須密閉，人員必須離開。具體操作可按說明書執行。溢漏處可用經消毒劑浸泡的吸水物質覆蓋；消毒劑作用1015分鐘后，移走吸水性物質，用消毒劑沖洗，用水清洗.11.意外及事故的登記、報告和檢測對重大意外和事故必須進行登記，對職業暴露事故應填寫艾滋病職業暴露人員個案登記表。對重大意外和事故必須進行報告和檢測步驟1：確定暴露級別步驟2：確定HIV傳染源頭嚴重程度哪些情況暴露不會導致HIV感染由于職業暴露而導致的HIV感染的概率是很小的，并不是每一次職業暴露都會導致HIV感染的發生，許多情況下可以不必過度緊張擔心，如：（1）經證實接觸的可疑血液或體液為HIV陰性；（2）完整無損皮膚或無新鮮流血的陳舊性傷口等接觸HIV陽性血液、感染性體液；（3）完整無破損皮膚或無新鮮流血的陳舊性傷口等接觸HIV陽性血液、感染性體液且及時沖洗消毒后；（4）完整粘膜或皮膚粘膜結合部短時接觸少量、低滴度（如HIV血漿濃度低于1500拷貝/毫升）HIV陽性血液或感染性體液；感染風險應將職業暴露補救防護藥品放在醫務人員24小時都能拿取的地方。保證有足夠的醫療防護用品貯存，并能隨時取用。要求醫護人員在發生職業暴露的第一時間按照處置流程進行防護，并及時報告感染辦進行職業暴露備案登記存檔管理。規范建立健康檔案，定期免疫接種。加強過程控制中相關細節的管理改善洗手條件：配備感應或腳踏式洗手裝置，以洗手液替代肥皂。洗手標準化：將洗手的步驟、時間以圖示方式張貼于洗手處。醫療廢物嚴格按分類處理，明顯標識，雙層包裝，防滲漏，防遺撒。銳器置入銳器盒內。制定減輕職業壓力的策略新職員安全操作培訓建立暴露后預防和普遍性應急預防方案案例提示在處理一次性醫療用品時，要將針頭、刀片等銳器與其它物品分開存放和處理，銳器等要裝在耐刺的朔料桶中，以免發生被混在污物中的銳器扎傷等事故。暴露級別為2級，暴露源級別為重度類型；3、在發生職業暴露后馬上進行局部緊急處理是對的；4、發生職業暴露后，最好在4小時內服藥，即使超過了24小時仍然要服藥。案例提示1、在臨床工作中，尤其在為艾滋病人的醫療操作中，一要注意戴口罩，二要戴防護眼鏡。2、這屬于粘膜的暴露，不要用眼藥水滴眼，否則容易損傷粘膜，增加感染的機會。3、在暴露源不明時，先采取必要的預防措施，待暴露源明確后，要根據暴露級別和暴露源類型重新調整用藥方案。三、實驗室質量控制室內質量控制試劑盒內部對照：陽性、陰性對照室內質控品：外部質控品。