藥物分析設計性實驗綜述維生素C及其制劑的含量測定2015 年 4 月摘要：本文簡要介紹了維生素C的結構、性質，詳述了維生素C的鑒別及含量測定的方法，如滴定分析法,分光光度法,電極法,薄層色譜法和高效液相色譜法等，并討論各種方法的優缺點。關鍵詞：維生素C；鑒別；含量測定；前言：維生素C作為維持機體正常生理功能的重要維生素之一,不僅廣泛參與機體氧化、還原等復雜代謝過程,還能促進體內膠原蛋白和粘多糖的合成,增加機體抵抗力。缺乏時可引起造血機制障礙、貧血、微血管壁通透性增加,脆性增強,容易出血等壞血病癥狀,故其對人體健康有著重要的意義。維生素C是一種酸性己糖衍生物,具有烯醇式己糖內酯立體結構,分D和L兩種立體構型,但只有L型有生理功效。維生素C具有較強的還原性,在一定條件下氧化型和還原型可以互變,兩者均具有生物活性。其C2和C3位上兩個相鄰的烯醇式羥基極易解離而釋放出H+,故維生素C雖然不含自由羧基,仍具有有機酸的性質。維生素C呈無色無臭的片狀結晶體,易溶于水,不溶于脂。在酸性環境中穩定,遇空氣中氧、熱、光、堿性物質,特別是有氧化酶及痕量銅、鐵等金屬離子存在時可促進其破壞速度。維生素c的劑型主要有片劑、顆粒劑、泡騰劑、注射劑等維生素C分子結構圖1 鑒別鑒別方法有：與氧化劑反應、薄層色譜法、紫外光譜法、紅外光譜法等，本綜述只講述其中具有代表性的兩種。1.1與硝酸銀反應：:除維生素C鈣、維生素C鈉、維生素注射液、維生素C銀翹片，其余制劑均可用此方法。1.1.1原理維生素C與硝酸銀發生氧化還原反應，產生黑色金屬銀沉淀1.1.2方法取維生素C0.2g,加水10mL溶解。取該溶液5mL，加硝酸銀試液0.5mL,即生成金屬銀的黑色沉淀。1.2與二氯靛酚鈉反應 ：除維生素C注射液和維生素C鈉制劑，其余均可用此方法。1.2.1原理2,6-二氯靛酚是一種染料，其氧化型在酸性介質中呈玫瑰紅色，在堿性介質中顯藍色，與維生素C反應后生成還原型無色的酚亞胺。1.2.2方法（1）取維生素C0.2g，加水10mL溶解。取該溶液5mL，加二氯靛酚鈉12滴，試液的顏色即消失。（2）取維生素C銀翹片10片，除去糖衣，精密稱定，研細，混勻，充分研磨，精密稱定適量(約相當于維生素C0.2g)，置100mL量瓶中，加新煮沸的冷開水10mL、稀醋酸10mL，振搖使充分溶解，用水稀釋至刻度，搖勻濾過，取續濾液適量，用氨試液調節pH至中性，加入適量活性炭（每30mL續濾液中加0.5g活性炭），加熱至沸，濾過。取二氯靛酚鈉試液數滴置點滴板，滴加濾液數滴，試液的藍色即消退。2 含量測定 維生素C及其制劑的含量測定方法有：滴定分析法、分光光度法、高效液相色譜法、電極法、薄層色譜法等。2.1滴定分析法 滴定分析法中有碘量法、2,6-二氯吲哚酚滴定法、鐵()置換氧化還原滴定法、庫侖滴定法、氫氧化鈉兩點電位滴定法等。其中碘量法操作簡單較為廣泛使用，并被中國藥典收錄為維生素C的含量測定方法。2.1.1碘量法 ChP2010采用本法對維生素C原料、片劑、顆粒劑、泡騰顆粒劑、泡騰片、注射劑及維生素C銀翹片進行含量測定。為消除輔料對測定的干擾，滴定前要進行必要的處理。如片劑溶解后應濾過，取續濾液測定；注射液測定前應加丙酮2mL，以消除抗氧化劑亞硫酸氫鈉對測定的影響。（1）取維生素C原料藥約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100mL于稀醋酸10mL使溶解，加淀粉指示液lmL,立即用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液顯藍色并在30秒鐘內不褪，每lmL碘滴定液（0.05mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6。（2）取維生素C片20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于維生素C0.2g)，置100mL量瓶中，加新沸過的冷水100mL與稀醋酸10mL的混合液適量，振搖使維生素C溶解并稀釋至刻度，搖勻，迅速濾過，精密量取續濾液50mL，加淀粉指示液lmL，立即用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液顯藍色并持續30秒鐘不褪。每lmL碘滴定液（0.05mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6。（3）精密量取維生素C注射液適量（約相當于維生素C0.2g)，加水15mL與丙酮2mL，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4mL與淀粉指示液lmL，用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液顯藍色并持續30秒鐘不褪。每lmL碘滴定液（0.05mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6。直接碘量法在滴定過程中發現溶液里的不溶物吸附碘，而且溶液與空氣接觸時間較長。但是此法簡捷、快速、方便,結果也較準確，適合測定多批量樣品。2.1.2間接碘量法先加過量的碘標準液與配制好的維生素C溶液反應完全，用硫代硫酸鈉滴定過量的碘至藍色剛好消失。I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI間接碘量法消除了不溶物吸附作用的影響，縮短了Vc液與空氣的接觸時間，避免了碘的揮發對實驗結果造成的影響。2.1.3返滴定碘量法藥典中常采用將碘溶解在KI溶液中以增大碘的溶解度。此實驗取20%的KI溶液5ml于250ml錐形瓶中，精確量取0.01mol/LCuSO4溶液1ml加入錐形瓶中使其充分反應，再加2ml淀粉指示液。Vc液溶于冰乙酸介質中，用其進行滴定至恰使藍色消失為止。CuI2不穩定隨即分解為Cu2I2和游離的碘。空白試驗：取20%的KI溶液5ml于錐形瓶中，加蒸餾水1ml，再加10滴淀粉指示劑溶液,然后用溶于冰乙酸介質中的Vc液進行滴定,邊搖邊滴定,直至與測定顏色一致為止。反滴定碘量法的空白實驗消除了因KI中含有碘而產生的系統誤差，也消除了人眼對溶液變色的敏感程度不同而對實驗造成的誤差。由于樣品液能與KI中本身含有的碘作用，也消除了因KI中含有的碘產生的誤差。反滴定法比滴定法更準確，但操作較繁瑣，適合測定少批量樣品。2.1.4鐵()置換氧化還原滴定法基于將測定抗壞血酸的碘滴定(藥典)法和鐵銨礬滴定法相結合,曾盔1等先用鐵銨礬基準物氧化碘化鉀置換出相當量的I2,再在維生素C藥物溶液滴定中讓相當量的I2定量氧化抗壞血酸。合適的反應條件是:乙酸介質,碘離子過量,室溫置暗處置換反應10min。將該法用于維生素C藥物中抗壞血酸的測定,結果與藥典法結果相符。2.1.5庫侖滴定法汪瑗2等用庫侖滴定法測定維生素C的含量,以0.5mol/L溴化鉀一1mol/L硝酸鉀一1mol/L醋酸(1:1:l)的混合溶液為電解液,在陽極發生Br2與維生素C分子中一C=C一不飽和雙鍵發生加成反應,測定樣品中維生素C的含量。用庫侖滴定法測維生素C的含量,可以達到藥典法測其含量的相同精度,而且可以省去標定碘溶液等繁瑣的操作過程。用此法測其含量既可靠、靈敏、準確、快速,又適用于微量分析,具有明顯的優越性。2.1.6氫氧化鈉兩點電位滴定法根據維生素C用NaOH滴定時可定量中和1個羥基的性質，結合兩點電位滴定法的原理,謝志方3提出了用NaOH作滴定劑測定Vc含量的兩點電位滴定法。該法避免了直接電位滴定法滴定時間過長，需記錄大量數據，數據處理復雜等缺點，簡化了滴定操作過程及終點的確定，可用于測定維生素C片中Vc的含量。2.2分光光度法2.2.1紫外分光光度法紫外分光光度法的基礎是物質對紫外光的選擇性吸收，是基于分子里價電子的能級之間的躍遷所產生的吸收。運用此方法具有分析速度快、重復性好、無污染等的特點。紫外吸收法除了與可見吸收光譜一樣，可以進行定量分析，可以測定物質的物理化學常數之外, 還可以對物質進行定性的分析以及結構的分析用Cu2+作為催化劑加速維生素C的氧化,以EDTA絡合校正背景作參比,利用氧化前后吸光度的差值直接測定維生素C的含量。亦可利用定量過量的碘酸鉀溶液,在弱酸性條件下與碘化鉀生成I3的顯色反應,抗壞血酸可將一部分的I3還原,剩余的I3用紫外分光光度計測定4。2.2.2重鉻酸鉀分光光度法蔡卓5等以重鉻酸鉀為顯色劑,利用其與維生素C的褪色反應,通過測定反應體系吸光度(350nm)變化值,確定維生素C的含量.、操作簡便、準確可靠、重現性好、靈敏度高,便于推廣使用。2.2.3鄰二氮菲分光光度法魏玲6等利用維生素C分子中烯二醇基的還原性，將高鐵離子定量轉化為亞鐵離子，產生的亞鐵離子與鄰二氮菲發生顯色反應，顯色物的濃度與吸光度成正比，從而間接測定出維生素C的含量，檢出限為2.3410-6molL-1。該方法的特點是靈敏度高，所用儀器普通、操作簡單。2.3.電極法2.3.1聚中性紅修飾電極法中性紅是一種吩嗪類染料,能夠在電極上發生電化學聚合。張秋靈7等用中性紅制備的化學修飾電極作為工作電極,飽和甘汞電極作為參比電極,鉑電極作對電極,濃度為0.50mol/L的NaNO3作為支持電解質,0.5000mol/L的中性紅溶液作為修飾液,利用修飾電極對維生素C有催化氧化的作用,通過循環伏安法測定維生素C的含量。在1.010-51.010-2mol/L范圍內,響應電流與維生素C的濃度呈線性關系,相關系數r=0.9987,檢出限1.010-6mol/L,樣品回收率在89.27%104.15%。2.3.2碘離子選擇電極法楊秀芳8等提出用碘離子選擇電極測定維生素C與碘在乙醇溶液中發生氧化還原反應時定量釋放出游離碘離子溶液中的電位以測定樣品中Vc含量的方法。用1%的淀粉溶液作為指示劑,顯微藍色時為終點。維生素C與游離的碘離子的含量成正比,通過使用碘離子選擇電極測定溶液中游離的碘離子的含量,用標準曲線法作為分析方法,間接測定溶液中的維生素C的含量。在0.1mol/L的KNO3,pH=2.06.0的溶液中,維生素濃度對數在10-510-6mol/L范圍內與電位顯示良好的線性關系,檢測下限為510-6mol/L,回收率為92%103%,相對偏差為2.3%。2.4高效液相色譜法 王蕊9等建立了高效液相色譜測定維生素C片含量的方法。方法:采用0.1%的草酸作為溶劑,色譜中采用phenomenex-C18色譜柱,流動相:磷酸鹽緩沖溶液(pH=5.8):甲醇=95:5。流速0.8ml/min,紫外檢測器,檢測波長254nm。結果:維生素C在0.01-0.5mg/ml內有良好的線性關系,線性回歸方程為y=4E+06x+15508,相關系數為R2=0.9998,方法平均回收率為99.71%,相對標準偏差小于2%。本文測定方法簡便,快速,能準確測定維生素C片的含量。趙敏10等建立一種靈敏、準確的高效液相色譜（HPLC）測定維生素C注射劑的方法，并進行分析方法學驗證。方法：采用色譜柱為XterraRPC18(4.6150mm，5m)，柱溫為25，以0.01molL-1（pH為3.5）的磷酸二氫鈉為流動相，系統流速為0.6mLmin-1，檢測波長為265nm。結果：該方法的線性范圍為50120gmL-1，其標準曲線的相關系數為0.9992，日內RSD為0.87%，其日間RSD為1.03%，加樣回收率為100.36%。結論：此法靈敏、準確、高效，重復性好，可用于注射用維生素C的含量測定。2.5薄層色譜法蔡毓瓊11采用硅膠GF254-CMC-Na薄層板,正戊醇-氯仿-甲酸(6:2:1)為展開劑展開測定Vc銀翹片中的維生素C。在紫外燈254nm下檢測,Rf值約0.6,最低檢出限量1l。該方法較化學方法檢測專屬性強且用量少,檢測量低至1g即可檢出,操作方法簡單,易于掌握。適合于含維生素C的中藥和中藥的鑒別檢測。參考文獻1曾盔，周軍，王錦，丁春霞.鐵()置換氧化還原滴定法測定維生素C片劑及針劑中抗壞血酸J.PTCA,2007,43(7):549-5522汪瑗,王玉賢,等.庫侖滴定法測定維生素C含量的研究J.藥物分析雜志，1995,15（3）：33-353謝志方.氫氧化鈉兩點電位滴定法測定維生素C含量J.廣州化工，2011,39（15）：125-1274張捷莉,高雨,侯冬巖1紫外分光光度法測定維多康中維生素C的含量J.食品科學,2004,25(11):235-236.5蔡卓,黃富嶸,梁信源,江彩英,周婉麗,江麗.重鉻酸鉀分光光度法測定藥片中維生素CJ.廣西大學學報，2008,33（3）：289-2916魏玲,呂曉琴,李學琴.鄰二氮菲分光光度法間接測定J.昌吉學院學報，2008,2:110-1127鄒華,常文貴1聚中性紅修飾電極測定維生素C的方法研究J.檢測與分析,2007,10(11):33-36.8楊秀芳,程芳玲,梁棟.碘離子選擇電極測定果蔬、藥劑中Vc含量J.遼寧化工,2003,32(8):366-368.9王蕊,姜麗,袁航,孫學志,曹陽.高效液相色譜法測定維生素C片的含量J.黑龍江醫藥，2010,23（6）:876-87710趙敏,胡付華.高效液相色譜法測定維生素C注射劑的含量J.中國民族民間醫藥，2010,04：28-2911蔡毓瓊.薄層色譜法檢測維c銀翹片中的維生素C的研究J.云南中醫中藥雜志,1997,18(4):34-35.藥物分析設計性實驗設計方案維生素C及其制劑的含量測定維生素C片的含量測定一、目的要求1. 掌握紫外分光光度法的測定原理及操作方法。2. 熟悉標準曲線定量的操作方法及標準曲線的制備。二、實驗原理維生素C在稀硫酸溶液中，在245nm1的波長處有最大吸收，維生素C水溶液在pH562之間穩定。因此本實驗選擇0.005mol/L的硫酸溶液2（pH5.2）作為溶劑，245nm波長為測定波長。該方法對儀器要求較低。三、試劑與儀器1. 試劑：50mg維生素C對照品,20片供試品，約700ml硫酸溶液（0.005mol/L，分析純）2.