金黃色葡萄球菌檢驗 金黃色葡萄球菌 StaphyloccocusaureusRosenbach 是人類的一種重要病原菌 隸屬于葡萄球菌屬 Staphylococcus 可引起多種嚴重感染 有 嗜肉菌 的別稱 概況 葡萄球菌屬微球菌科 本菌有19個菌種 從人體上可檢出12個種 葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血動物的粘膜相關系 有些種是人及動物的條件致病菌 金黃色葡萄球菌對人類有致病性 通常被稱為病原性球菌 金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥 又稱為化膿性球菌 革蘭氏陽性球菌 直徑為0 8 1 0微米 鏡檢時呈單個 成對 四聯或不規則的簇群 如葡萄 生物學特性 菌體形態及培養特征 大多數菌株產生類胡羅卜素 使細胞團呈現出深橙色到淺黃色 色素的產生取決于生長的條件 生物學特性 菌體形態及培養特征 大多數菌株最適溫度30 37 最適pH為7 0 7 5 兼性厭氧菌 在好氧條件下生長最好 可在15 氯化鈉和40 膽汁中生長 一般用含10 氯化鈉的大豆肉湯增菌或7 5 氯化鈉肉湯增菌 所有的毒株產生凝固酶 人和動物來源的菌株通常可凝固兔 人 馬和豬的血漿 產生蛋白酶 脂肪酶 磷脂酶 脂酶和溶菌酶 大多數菌株可水解天然的動物蛋白 例如血紅蛋白 纖維蛋白 卵白 酪朊和多肽類如明膠 水解脂類 吐溫類和磷脂蛋白質 并釋放脂肪酸 生物學特性 生化特征 在血平板上可形成明顯透明的溶血環 為 型溶血 可產生卵磷脂 在卵黃高鹽培養基上形成周圍有白色沉淀環的菌落 大多數菌株分解葡萄糖 麥芽糖 蔗糖 產酸不產氣 甲基紅試驗 VP試驗多為陽性 不產生靛基質 觸酶陽性 致病菌可產生凝血漿酶 觸酶試驗 過氧化氫酶試驗 原理 具有過氧化氫酶的細菌 能催化過氧化氫生成水和新生態氧 繼而形成分子氧出現氣泡 生物學特性 致病性 金黃色葡萄球菌為條件致病菌 菌株致病力的強弱主要取決于其產生的毒素和侵襲性酶 a 溶血素 外毒素 分 四種 能損傷血小板 破壞溶酶體 引起肌體局部缺血和壞死 b 殺白細胞素 可破壞人的白細胞和巨噬細胞 c 血漿凝固酶 當金黃色葡萄球菌侵入人體時 該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固 阻礙吞噬細胞的吞噬作用 葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關 d 脫氧核糖核酸酶 脫氧核糖核酸酶能耐受高溫 可用來作為依據鑒定金黃色葡萄球菌 e 腸毒素 引起急性胃腸炎的蛋白質性腸毒素 分為A B C D E五種 金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌 臨床表現多種多樣 可引起局部化膿感染 也可引起肺炎 偽膜性腸炎 心包炎等 甚至敗血癥 膿毒癥等全身感染 葡萄球菌皮膚感染 致病性 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病 可引發不同程度的急性胃腸炎癥狀 惡心 嘔吐最為突出而且普遍 腹痛 腹瀉次之 當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品 如牛奶和奶制品 肉 蛋等 在溫度條件適宜時 經8 10小時即可相當數量的腸毒素 分布 在自然界中廣泛存在 空氣 水 灰塵及人和動物的排泄物中都可找到 作為人和動物的常見病原菌 其主要存在于人和動物的鼻腔 咽喉 頭發上 50 以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在 因而 食品受其污染的機會很多 傳播媒介為被該菌污染的食品 主要為淀粉類 如剩飯 米面 粥等 牛乳及乳制品 以及魚 肉 蛋類等 被污染的食物在室溫20 22 放置5小時以上時 病菌大量繁殖 并產生腸毒素 流行病學 季節分布 多見于春夏季 中毒食品種類多 如奶 肉 蛋 魚及其制品 此外 剩飯 油煎蛋 糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道 上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83 所以人畜化膿性感染部位常成為污染源 流行病學 金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛生問題 在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33 加拿大則更多 占45 我國每年發生的此類中毒事件也非常多 流行病學 腸毒素形成條件 存放溫度 在37 C內 溫度越高 產毒時間越短 存放地點 通風不良氧分壓低易形成腸毒素 食物種類 含蛋白質豐富 水分多 同時含一定量淀粉的食物 腸毒素易生成 耐受力 幾乎所有的消毒試劑以及熱加工過程對金黃色葡萄球菌都有嚴重的破壞作用腸毒素可耐受100 30分鐘不被破壞 對于加工過的食品或食品加工設備而言 此菌或其腸毒素的存在通常作為衛生條件差的一種指標 檢驗程序與操作方法 根據中華人民共和國國家標準 食品衛生微生物學檢驗 GB4789 10 94金黃色葡萄球菌檢驗 操作流程 檢樣25g mL 稀釋液225mL 均質 血漿凝固酶試驗 7 5 氯化鈉肉湯或10 氯化鈉胰酪胨大豆肉湯 BHI肉湯和營養瓊脂斜面 Baird Parker平板 血平板 涂片染色 36 1 18h 24h 結果報告 36 1 B P平板18h 24h或45h 48h 觀察溶血 血平板18h 24h 檢測步驟 增菌 利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性 可耐受15 的氯化鈉 用含10 氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌 檢測步驟 分離 血平板 金黃色葡萄球菌可以產生溶血素 因此在血平板上產生明顯的溶血環 血平板上其典型菌落呈金黃色 有時也為白色 大而突起 圓形 不透明 表面光滑 有溶血圈 檢測步驟 分離 BP平板 胰蛋白胨 牛肉膏和酵母膏提供碳源 氮源 硫 維生素和痕量礦物元素 丙酮酸鈉是一種生長促進劑 亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性 并使菌落產生黑色 卵黃提供營養和有利于觀察卵磷脂環 甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用 檢測步驟 分離 在BP平板上其典型菌落為 圓形 光滑突起 濕潤 直徑2 3mm 顏色呈灰色到黑玉色 邊緣常為淡色 米黃色或灰白色略帶灰色或黃色的白色 周圍為一混濁帶 在其外緣常有一透明圈 用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感 偶然會遇到不分解脂肪菌株 除無混濁帶及透明圈外 其他外觀基本相同 長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落 其黑色常較典型菌落淡些 且外觀可能粗燥 質地較干燥 檢測步驟 鑒定 金黃色葡萄球菌可以產生凝固酶 因此對其鑒別的主要實驗是測定其凝固酶 對于凝固不完全的菌株 可以通過一些其他實驗來進一步確認 例如 厭氧葡萄糖發酵 溶葡萄球菌酶敏感性實驗 耐熱核酸酶實驗等 所有這些實驗不能作為鑒別其產毒與否的依據 25g mL 樣品 225ml7 5 氯化鈉肉湯 血平板 36 1 24hr 鏡檢營養肉湯 血漿凝固酶實驗 報告結果 定性檢測 36 1 24hr 36 1 24hr 36 1 6hr BP平板 25g樣品 225ml生理鹽水 選三個連續梯度 每個梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉湯 將有生長的管劃線接種 36 1 48hr 鏡檢營養肉湯 血漿凝固酶實驗 報告結果MPN g mL 定量檢測 MPN法 36 1 48hr 36 1 24hr 36 1 6hr 適用于檢測可能含有少量金黃色葡萄球菌 卻帶有大量競爭菌的樣品 梯度稀釋 25g樣品 225ml生理鹽水 選三個連續梯度 每個梯度分別取1mL接種之至表面干燥的BP平板 如0 4mL 0 3mL 0 3mL 平板計數 分別記錄每種類型的菌落數 36 1 48hr 鏡檢營養肉湯 血漿凝固酶實驗 報告結果金葡菌數 g mL 定量檢測 平板法 每種類型至少選取一個菌落 36 1 24hr 36 1 6hr 適用于檢測金黃色葡萄球菌數不小于10 g mL 的食品 梯度稀釋 PetrifilmTM測試片法檢驗程序 檢樣25g mL 225mL稀釋 勻質 10倍系列稀釋 選擇適宜稀釋度的樣品勻液 各取1mL分別加入紙片 36 1 24 2h 判讀 沒有菌落 只有典型紫紅色菌落 將所有紫紅色菌落計數為金黃色葡萄球菌 除典型紫紅色菌落外其他顏色的菌落 加入確認反應片 36 1 培養1 3h 有粉紅色菌暈的菌落計數為金黃色葡萄球菌 報告 金黃色葡萄球菌PetrifilmTM測試片 含具有顯色功能 經改良的Baird Parker培養基 對金黃色葡萄球菌的生長有很強的選擇 金黃色葡萄球菌在測試片上生成為暗紫紅色的菌落 可以直接完成鑒定和計數 后面內容直接刪除就行資料可以編輯修改使用資料可以編輯修改使用 主要經營 網絡軟件設計 圖文設計制作 發布廣告等公司秉著以優質的服務對待每一位客戶