第十一單元,生物技術實踐,第 43 課時,生物技術在組織培養、DNA和蛋白質分離及有 效成分提取中的應用,突破考點提煉方法,考點1 生物技術實踐應用植物組織培養,1植物組織培養的過程,(1)菊花組織培養過程,(2)月季的花藥培養,2. 植物組織培養技術和花藥離體培養技術的異同,提醒 同一株綠色植物不同部分的細胞經培養獲得的愈傷組織的基因相同。,3植物激素與組織培養 (1)生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素，其作用及特點： 在生長素存在的情況下，細胞分裂素的作用呈現加強的趨勢。 使用順序不同，結果不同，具體如下：,用量比例不同，結果也不同,4影響植物組織培養的因素 (1)材料：植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結果。一般來說，容易進行無性繁殖的植物容易進行組織培養。嫩枝生理狀態好，容易誘導脫分化和再分化。 (2)營養：常用的培養基是MS培養基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有機物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。,提醒 培養基中添加蔗糖的目的是提供營養和調節滲透壓。,(3)環境條件：pH、溫度、光照等環境條件。如菊花組織培養所需pH為5.8，溫度為1822，光照條件為每日用日光燈照射12小時。,1(2011江蘇卷，16)下列有關植物組織培養的敘述，正確的是 ( ) A愈傷組織是一團有特定結構和功能的薄壁細胞 B二倍體植株的花粉經脫分化與再分化后得到穩定遺傳的植株 C用人工薄膜將胚狀體、愈傷組織等分別包裝可制成人工種子 D植物耐鹽突變體可通過添加適量NaCl的培養基培養篩選而獲得,對位訓練,答案 D 解析 在普通培養基中添加適量的NaCl，制成選擇培養基，可用來篩選植物耐鹽突變體，故選項D正確。愈傷組織的細胞排列疏松而無規則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態的薄壁細胞；二倍體植株的花粉經離體培養后得到單倍體植株，該單倍體高度不育，不能穩定遺傳；用人工薄膜將胚狀體等進行包裝可制成人工種子，愈傷組織不能作為制作人工種子的材料，故選項A、B、C錯誤。,排雷 (1)菊花的組織培養實驗中，應選擇未開花植物的莖上部新萌生的側枝；月季花藥的離體培養實驗中，應選擇花粉發育過程中的單核靠邊期的花粉進行培養。 (2)植物組織培養過程應該在無菌的條件下進行，外植體消毒所用消毒劑為體積分數為70%的酒精和質量分數為0.1 %的氯化汞溶液，所使用的清洗液是無菌水。 (3)組織培養時不用天然激素而是用人工合成的激素，是因為植物中存在相應的分解天然激素的酶而沒有分解相應的人工合成激素的酶，所以天然激素在植物體內作用和存在的時間短，人工合成激素的作用和存在的時間長，作用效果明顯。 (4)在初期，菊花的組織培養需光照，月季花藥的離體培養不需光照，而在后期均需光照。,考點2 生物技術實踐應用DNA的粗提取與鑒定,1原理、方法和目的,2.實驗步驟及注意事項 (1)步驟：提取血細胞核物質(蒸餾水漲破)溶解(2 mol/L的NaCl溶液)過濾(除雜質)析出(滴蒸餾水，降NaCl溶液濃度至0.14 mol/L)過濾再溶解(2 mol/L的NaCl溶液)過濾進一步提純(體積分數為95%的冷卻酒精)鑒定。 (2)鑒定,(3)注意事項 制備雞血細胞液時，要在取雞血的同時加入檸檬酸鈉，靜置后上層是血清，下層為所需要的血細胞。 兩次加蒸餾水的目的不同，一是漲破細胞，二是稀釋溶液。 鑒定DNA時需沸水浴加熱。 二苯胺試劑要現配現用，否則會影響鑒定的效果。,對位訓練,2(2010江蘇卷，32)某生物興趣小組開展DNA粗提取的相關探究活動，具體步驟如下： 材料處理：稱取新鮮的花菜、辣椒和蒜黃各2份，每份10 g。剪碎后分成兩組，一組置于20、另一組置于20條件下保存24 h。 DNA粗提取： 第一步：將上述材料分別放入研缽中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用兩層紗布過濾，取濾液備用。 第二步：先向6只小燒杯中分別注入10 mL濾液，再加入 20 mL 體積分數為95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒緩緩地向一個方向攪拌，使絮狀物纏繞在玻璃棒上。,第三步：取6支試管，分別加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮狀物。 DNA檢測：在上述試管中各加入4 mL二苯胺試劑，混合均勻后，置于沸水中加熱5 min，待試管冷卻后比較溶液的顏色深淺，結果如下表：,(注：“”越多表示藍色越深) 分析上述實驗過程，回答下列問題：,(1)該探究性實驗課題的名稱是 _。 (2)第二步中“緩緩地”攪拌，這是為減少。 (3)根據實驗結果，得出結論并分析。 結論1：與20相比，相同實驗材料在20條件下保存，DNA的提取量較多。 結論2：_ 。 針對結論1，請提出合理的解釋：_ 。 (4)氯仿密度大于水，能使蛋白質變性沉淀，與水和DNA均不相溶，且對DNA影 響極小。為了進一步提高粗提取時DNA 的純度，在第三步的基礎上繼續操作的步驟：,溫度對DNA提取量的影響,DNA斷裂,等質量的不同實驗材料，在相同的保存溫度下，,活性，DNA降解速率慢,探究不同材料和不同保存,從蒜黃提取的DNA量最多,低溫抑制了相關酶的,_，然后用體積分數為95%的冷酒精溶液使DNA析出。,將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合， 靜置一段時間， 吸取上清液,解析 根據步驟中選擇了不同的材料，在不同溫度下的處理，可判斷出本實驗的目的是探究不同材料和不同溫度對DNA提取量的影響，是DNA粗提取與鑒定實驗的應用；“緩緩地”攪拌能夠有效防止因DNA斷裂而影響實驗結果；結論可以從表格中顏色深淺得出，低溫下獲得的DNA含量較多是因為低溫抑制了相關酶的活性，使DNA降解速率減慢；依據氯仿的特性，可以在第三步獲得的溶液中加入等量氯仿，靜置并吸取蛋白質含量較少的DNA上清液，獲得純度更高的DNA。,排雷 (1)實驗材料 動物 雞血細胞 液的優點,提醒：人和哺乳動物成熟的紅細胞中不含細胞核，也沒有DNA，不適于作為DNA提取的材料，但卻是提取血紅蛋白的理想材料。,植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。 (2)步驟中注意問題： 實驗中有多個步驟要用到玻璃棒攪拌，使用時注意玻璃棒不要碰到燒杯底。 實驗中所用的二苯胺是一種有毒性的試劑，使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位。,考點3 生物科技新手段PCR擴增技術,1原理：DNA復制。 2條件：模板、原料、酶、ATP。 3場所：體外PCR擴增儀。 4方向：DNA復制的具體過程涉及DNA雙鏈的方向。DNA的兩條鏈是反向平行的，為了明確地表示DNA的方向，通常將DNA的羥基(OH)末端稱為3端，兩磷酸基團的末端稱為5端。DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，而只能從3端延伸DNA鏈，因此，DNA復制需要引物。當引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結合后，DNA聚合酶就能從引物的3端開始延伸DNA鏈，DNA的合成方向總是從子鏈的5端向3端延伸。,5過程 (1)變性：當溫度上升到90以上時，雙鏈DNA解旋為單鏈，如下圖： (2)復性：溫度下降到50左右，兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合，如下圖：,(3)延伸：溫度上升到72左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根據堿基互補配對原則合成新的DNA鏈，如下圖： 6檢測PCR擴增效果 (1)將樣品進行50倍稀釋：取2 L PCR反應液，加入 98 L蒸餾水。 (2)以蒸餾水作為空白對照，在波長260 nm處，將紫外分光光度計的讀數調節至零。 (3)將步驟中的DNA稀釋液加入到厚度為1 cm的比色杯中，測定其在260nm處的光吸收值(用A260nm表示)。,注意 DNA在260nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰，可以利用DNA的這一特點進行DNA含量的測定。 (4)根據下面的公式計算DNA含量。DNA含量(g/mL)50A260nm稀釋倍數 注意 據測定，1 g/mL的DNA在厚度為1 cm比色杯中，OD260為1相當于50 g/mL的雙鏈DNA。以此為標準，可以計算出樣品中的DNA濃度。,7PCR技術的應用 PCR技術模擬細胞內DNA的復制過程，實現對某一段DNA的擴增。PCR技術能在幾小時內將極微量的DNA特異性地擴增上百萬倍，從而有效地解決了因為樣品中DNA含量太低而難以對樣品進行分析研究的難題，大大提高了對DNA分子的分析和檢測能力，被廣泛地應用于基因克隆、基因序列分析、遺傳病診斷、古生物學研究以及刑偵破案、親子鑒定等諸多方面。,3多聚酶鏈式反應(PCR)是一種體外迅速擴增DNA片段的技術。請回答下列有關PCR技術的基本原理及應用問題。 (1)DNA的兩條鏈是反向平行的，通常將_的末端稱為5端，當引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結合后，DNA聚合酶就能從引物的開始延伸DNA鏈。 (2)PCR利用DNA的熱變性原理解決了打開DNA雙鏈的問題，但又導致了DNA聚合酶失活的新問題。到20世紀80年代，科學家從一種Taq細菌中分離到_，它的發現和應用解決了上述問題。要將Taq細菌從其他普通的微生物中分離出來，所用的培養基叫_。,對位訓練,磷酸基團,3端,耐高溫的Taq DNA聚合酶,選擇培養基,(3)PCR的每次循環可以分為三步。假設在PCR反應中，只有一個DNA片段作為模板，請計算在5次循環后，反應物中大約有個這樣的DNA片段。 (4)請用簡圖表示出一個DNA片段PCR反應中第二輪的產物。 (5)簡述PCR技術的主要應用。,遺傳疾病的診斷、刑偵破案、古生物學、基因克隆和DNA序列測定(要求3項以上)。,解析 (1)DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已經存在的核酸的3羥基上，與DNA母鏈結合的引物就提供這個羥基。 (2)因PCR利用了DNA的熱變性原理解決了打開DNA雙鏈的問題，所以用于催化DNA復制過程的DNA聚合酶要具有耐高溫的特性。用選擇培養基可將Taq細菌從其他普通的微生物中分離出來。 (3)DNA復制時兩條鏈均作為模板，進行半保留式復制，所以復制5次后得到的子代DNA分子數為2532個。 (4)新合成的DNA鏈帶有引物，而最初的模板DNA的兩條鏈不帶有引物。 (5)PCR技術可以對DNA分子進行擴增，所以可用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、古生物學、基因克隆和DNA序列測定等方面。,排雷 PCR擴增技術和DNA復制的比較,考點4 生物科技實踐應用血紅蛋白的提取和分離,1蛋白質分離的依據 蛋白質各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質和多少、溶解度、吸附性質和對其他分子的親和力等，可以用來提取和分離不同種類的蛋白質。 2凝膠色譜原理 (1)識圖析圖 凝膠色譜法分離蛋白質的原理,圖A，相對分子質量較小的蛋白質由于擴散作用進入凝膠顆粒內部而被滯留；相對分子質量較大的蛋白質被排阻在凝膠顆粒外面，在顆粒之間迅速通過。 圖B，蛋白質混合物上柱；洗脫開始，相對分子質量較小的蛋白質擴散進入凝膠顆粒內；相對分子質量較大的蛋白質則被排阻于顆粒之外；相對分子質量較小的蛋白質被滯留，相對分子質量較大的蛋白質向下移動；相對分子質量不同的分子完全分開；相對分子質量較大的蛋白質行程較短，已從層析柱中洗脫出來，相對分子質量較小的蛋白質還在行進中。 相對分子質量不同的蛋白質分子因此得以分離。,(2)列表比較 提醒 凝膠色譜柱的直徑大小不影響分離效果，但直徑過大造成洗脫液體積大，樣品稀釋度大；凝膠色譜柱的高度與分離度有關。,3凝膠電泳法原理 凝膠電泳法的原理是不同蛋白質的帶電性質、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導致不同蛋白質在電場中的運動方向和運動速率不同。如下表：,4.實驗操作流程 樣品的處理 粗分離透析(去除小分子雜質) 純化凝膠色譜法進行分離和純化 純度鑒定SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定相對分子質量,提醒 紅細胞洗滌過程中，洗滌三次后，上清液仍有黃色，可增加洗滌次數，否則無法除去血漿蛋白；離心時轉速要低，時間要短，否則白細胞等會一同沉淀，達不到分離效果。 血紅蛋白釋放過程中，蒸餾水的作用是使紅細胞吸水漲破，甲苯的作用主要是溶解細胞膜。 為了加快干凝膠的膨脹，可將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至接近沸騰，通常只需12 h。這種方法不但節約時間，而且可以除去凝膠中可能帶有的微生物，排除膠粒內的空氣。 滴加樣品時，吸管管口要貼著管壁環繞移動，防止破壞凝膠面。,4(2011廣東卷，5)以下關于豬血紅蛋白提純的描述，不正確的是 ( ) A洗滌紅細胞時，使用生理鹽水可防止紅細胞破裂 B豬成熟紅細胞中缺少細胞器和細胞核，提純時雜蛋白較少 C血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監測 D在凝膠色譜法分離過程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動慢,對位訓練,答案 D,解析 豬成熟紅細胞中缺少細胞器和細胞核，提純時雜蛋白較少，是提純血紅蛋白的理想材料。提純血紅蛋白分四步：紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析，其中洗滌紅細胞時，要用生理鹽水反復洗滌，既要將紅細胞洗滌干凈，又要不破壞紅細胞，然后再用蒸餾水和甲苯使紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白。分離提純血紅蛋白時用凝膠色譜法，其原理是根據相對分子質量的大小來分離蛋白質，相對分子質量大的蛋白質移動速率較快；血紅蛋白的顏色可用于觀察紅色區帶的移動情況，并據此判斷分離效果。,排雷 (1)血紅蛋白的提取和分離時紅細胞分層不明顯，可能是洗滌次數少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速率過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續血紅蛋白的提取純度。 (2)凝膠的裝填標準是緊密、均勻。檢測凝膠色譜柱的裝填是否成功可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。 (3)G75：“G”代表凝膠的交聯程度，膨脹程度及分離范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時吸水7.5 g。 (4)裝填完后,立即用洗脫液洗脫的目的是使凝膠裝填緊密。,(5)實驗過程中加入檸檬酸鈉的目的是防止血液凝固；低速、短時離心防止白細胞沉淀；緩慢攪拌防止紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。 (6)檢測血紅蛋白的分離是否成功的方法：如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關。,考點5 生物技術實踐應用植物芳香油的提取,1植物芳香油的基本知識 (1)成分：組成較復雜，主要包括萜類化合物及其衍生物。 (2)特點：具有很強的揮發性，易溶于有機溶劑。 (3)應用：玫瑰精油是制作高級香水的主要成分，能使人產生愉悅感；橘皮精油的主要成分是檸檬烯，具誘人的橘香味，是食品、化妝品和香水配料的優質原料。 2玫瑰精油的提取流程與關鍵,(1)安裝裝置順序：從左到右，自下而上。 (2)溫度計位置：溫度計水銀球的上限與蒸餾燒瓶支管的下限處在同一水平線上。 (3)冷凝管中的水流向：從下方進水，上方出水，與蒸氣流向相反。 (4)加熱時防暴沸：墊石棉網，向液體中加入幾粒沸石或碎瓷片。 (5)燒瓶內液體量：燒瓶容積的1/32/3。 (6)除水：加入無水Na2SO4后，放置時間可適當延長些。 (7)溫度及時間：為提高產品質量，要嚴格控制蒸餾溫度，可適當延長蒸餾時間。,3橘皮精油的提取流程與關鍵 石灰水浸泡漂洗壓榨過濾靜置再次過濾橘皮油 (1)橘皮的處理：干燥后一定要用石灰水浸透，時間至少 10 h以上。 (2)壓榨液的處理：可以先用普通布袋過濾除去固體物和殘渣，然后離心進一步除去質量較小的殘留固體物，再用分液漏斗或吸管將上層的橘皮油分離出來。,5(2010課標全國卷，37)下列是與芳香油提取相關的問題，請回答： (1)玫瑰精油適合用水蒸氣蒸餾法提取，其理由是玫瑰精油具有 的性質。蒸餾時收集的蒸餾液_(是、不是)純的玫瑰精油，原因是 _。 (2)當蒸餾瓶中的水和原料量一定時，蒸餾過程中，影響精油提取量的主要因素有蒸餾時間和。當原料量等其他條件一定時，提取量隨蒸餾時間的變化趨勢是 。 (3)如果蒸餾過程中不進行冷卻，則精油提取量會_，原因是。,對位訓練,易揮發、難溶于水、化學性質穩定,不是,油與水蒸氣一起蒸餾出來，所得到的是油水混合物,蒸餾溫度,提取量隨蒸餾時間的延長而增加，一定時間后提取量不再增加,減少,部分精油會隨水蒸氣揮發而流失,玫瑰精,在一定時間內,(4)密封不嚴的瓶裝玫瑰精油保存時最好存放在溫度_的地方，目的是。 (5)某植物花中精油的相對含量隨花的不同生長發育時期的變化趨勢如圖所示。提取精油時采摘花的最合適時間為_天左右。 (6)從薄荷葉中提取薄荷油時(能、不能)采用從玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是_ 。,較低,減少揮發,a,能,薄荷油與玫瑰精油的化學,性質相似,解析 由于玫瑰精油易揮發、難溶于水、化學性質穩定，因此可以用水蒸氣蒸餾法提取，冷卻后必然含有水；蒸餾的提取效果與蒸餾的溫度與蒸餾的時間有關，隨著蒸餾時間的延長，原料中含的精油減少，提取的量也會減少直至再也提不出精油。蒸餾過程如果不冷卻，提取后的混合液溫度較高，由于精油易揮發，其含量會減少；保存時，環境溫度應較低為好，防止精油揮發；第(5)小題為信息題，主要考查學生的讀圖、識圖及圖文轉化能力，根據圖像可知，玫瑰精油在蓓蕾期、開放期之間精油的含量較高，應在此時采收；由于薄荷精油與玫瑰精油的化學性質相似，可以采用相同的提取方法。,排雷 (1)植物芳香油的提取方法主要有水蒸氣蒸餾法、壓榨法、萃取法。水蒸氣蒸餾是植物芳香油提取的常用方法，但會導致原料焦糊或有效成分水解等，若植物有效成分易水解，則不宜采用此法。玫瑰精油、橘皮精油、胡蘿卜素的提取分別采用水蒸氣蒸餾法、壓榨法、萃取法。 (2)水蒸氣蒸餾可用明火加熱，萃取過程應該避免明火加熱，采取水浴加熱，這是因為有機溶劑都是易燃物，直接用明火加熱容易引起燃燒、爆炸。 (3)用于萃取的有機溶劑必須事先精制，除去雜質，否則會影響芳香油的質量。 (4)在用水蒸氣蒸餾法制取玫瑰乳濁液提純過程中油水混合物中要加入氯化鈉的目的是增大鹽水的密度，有利于玫瑰精油與水的分層,加入無水Na2SO4的目的是吸收精油中殘留的水分。,(5)橘皮精油的提取過程中，橘皮洗凈晾干后，要浸泡在pH大于12、質量分數為7%8%的石灰水中1624 h，其目的是防止橘皮壓榨時滑脫，提高出油率。,考點6 生物科技實踐應用胡蘿卜素的提取,1萃取劑的選擇與影響萃取的因素 (1)萃取劑的選擇 有機溶劑分為水溶性和水不溶性兩種。乙醇和丙酮能夠與水混溶，是水溶性有機溶劑；石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等不能與水混溶，是水不溶性有機溶劑。 萃取胡蘿卜素的有機溶劑應該具有較高的沸點，能夠充分溶解胡蘿卜素，且不與水混溶。另外還要考慮對人體是否有毒等安全問題。因乙醚沸點較低，苯和四氯化碳對人體有毒，所以本實驗選用石油醚或乙酸乙酯作為萃取劑。 (2)影響萃取的因素 主要因素：萃取劑的性質和使用量。 次要因素：原料顆粒的大小、緊密程度、含水量、萃取的,溫度、萃取的時間等。 總之，溶解越充分，效果越好。 2胡蘿卜素的萃取方法 (1)胡蘿卜素提取裝置的設計 提取裝置：由鐵架臺、酒精燈、 水浴鍋、燒瓶、冷凝管等構成。安裝順 序：從左到右，由下而上。拆除時相反。 裝置如圖所示。 由于有機溶劑易燃，直接使用明 火加熱易引起燃燒、爆炸故采用水浴加熱法。 為防止加熱時有機溶劑的揮發在加熱瓶口安裝冷凝回流裝置。,(2)紙層析鑒定步驟 制作層析濾紙：在18cm30cm濾紙下端距底邊2cm處做一條基線，在基線上取A、B、C、D四點。 點樣：用最細的注射器針頭分別吸取0.10.4 mL溶解在石油醚中的標準樣品和提取樣品，分別在A、D和B、C點上點樣。點樣應該快速細致，在基線上形成直徑為2 mm左右的圓點。 層析：等濾紙上的點樣液自然揮發干后，將濾紙卷成圓筒狀，置于裝有1 cm深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各種色素完全分開后，取出濾紙，讓石油醚自然揮發。 觀察：與標準樣品的胡蘿卜素層析帶相比較，觀察提取效果。,提醒 此實驗的目的是探究是否提取到了胡蘿卜素，而必修教材中色素的提取與分離實驗則是提取并分離四種色素，探究色素的種類和顏色。,6.如圖為提取胡蘿卜素的裝置圖，請據圖回答下列問題： (1) 的作用是 。 (2)_內加入的萃取液一般是_，原料在加入前，一般要進行、處理。 (3)該萃取過程采用的是水浴加熱，其目的是_。 (4)為了取得最佳萃取效果，萃取的時間應該_(“長”或“短”)。,對位訓練,冷凝管,防止加熱時有機溶劑揮發,燒瓶,石油醚,粉碎,干燥,避免有機溶劑明火加熱引,長,降溫，,起燃燒、爆炸,解析 圖示裝置為萃取裝置，其中為冷凝管，其作用是降溫，以防止加熱時有機溶劑揮發，是燒瓶，其內裝有萃取劑，胡蘿卜素的適宜萃取劑是石油醚，為防止有機溶劑明火加熱時引起燃燒、爆炸，萃取時有必要采用水浴加熱，而不用明火加熱。,排雷 (1)層析時注意選擇干凈的濾紙，為了防止操作時對濾紙的污染，應盡量避免用手直接接觸濾紙，可以戴手套進行操作。 (2)點樣時應注意點樣斑點不能太大(直徑應小于0.5 cm)，如果用吹風機吹干，溫度不宜過高，否則斑點會變黃。 (3)將點好樣的濾紙卷成筒狀，卷紙時注意濾紙兩邊不能相互接觸，以免因毛細現象導致溶劑沿濾紙兩邊的移動加快，溶劑前沿不齊，影響結果。 (4)層析液不可沒及樣品原點，以免色素溶解于層析液中，使鑒定失敗。 (5)層析是否提取到胡蘿卜素，通過與標準樣品中的胡蘿卜素作對比予以確認。,考綱能力 技術實踐應用能力 考題1 血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，負責血液中O2和部分CO2的運輸。請根據血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。,考題鏈接 1.蛋白質的提取與分離技術,(1)將實驗流程圖補充完整：A為_，B為。凝膠色譜法的基本原理是根據分離蛋白質的有效方法。 (2)洗滌紅細胞的目的是去除，洗滌次數過少，無法除去；離心速率過快和時間過長會使一同沉淀，達不到分離的效果。洗滌干凈的標志是。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是。 (3)在洗脫過程中加入物質的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是 。如果紅色區帶，說明色譜柱制作成功。,血紅蛋白的釋放,樣品的加入和洗脫,量的大小,雜蛋白(血漿蛋白),血漿蛋白,胞和淋巴細胞,離心后的上清液中沒有黃色,蒸餾水和甲苯,準確模擬生物體內的生理環境，保持,均勻一致的移動,體外的pH和體內的一致,相對分子質,白細,體會 (1)實驗原理：依據蛋白質的各種特性可以將不同種類的蛋白質分離。 (2)常用方法 凝膠色譜法：根據相對分子質量的大小分離蛋白質。 電泳：利用待分離樣品中各種分子帶電性質的差異及分子 本身大小、形狀的不同產生不同的遷移速率，由此將各種分子分離。 (3)蛋白質的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。,考綱能力 實踐應用能力 考題2 (2011山東卷，34)研究發現柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白質)均有抑菌作用，兩者的提取及應用如圖所示。 (1)柚皮易焦糊，宜采用法提取柚皮精油，該過程得到的糊狀液體可通過除去其中的固體雜質。,考題鏈接 2.芳香油的提取,壓榨,過濾,(2)篩選乳酸菌A時可